課題1微生物的實驗室培養專題2微生物的培養與應用1提供合適的營養和環境條件2防止其他微生物污染2基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽3特殊營養：（有些微生物需要）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）、氧氣、二氧化碳、滲透壓的需求：一、培養基如:生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、堿基等按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。1概念：不同的微生物往往需要采用不同的培養基配方營養物質定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質合成生物體的細胞物質和一些代謝產物；有些是異養生物的能源物質氮源凡能提供所需氮元素的物質合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物①無機化合物：CO2、NaHCO3等。②有機化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油、牛肉膏、蛋白胨等①無機化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽。②有機化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等自養微生物異養微生物注：含C、H、O、N的有機物是異養型微生物的碳源、氮源、能源，如牛肉膏硝化細菌營養物質定義作用主要來源生長因子生長必不可少的微量有機物酶和核酸的組成成分無機鹽礦物質參與酶的組成；調節滲透壓——水——作為溶劑和運輸的介質；參與生化反應——牛肉膏、酵母膏、動物組織提取液等備注：1不同種類的微生物，對碳源的需要差別較大。2微生物最常利用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。3對異養微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源和能量充生長因子，往往是由于缺乏合成這些物質所需要的酶或合成能力有限。劃分標準培養基種類特點用途物理性質化學成分天然培養基合成培養基用途或功能鑒別培養基培養基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業生產，增加某某菌的濃度或產物微生物分離、鑒定、活菌計數、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業生產培養基成分明確分類、鑒定在培養基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養、分離出特定微生物在培養基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養基液體培養基固體培養基加入青霉素是抗生素，殺細菌的培養基:不加氮源的無氮培養基:不加含碳有機物的無碳培養基:幾種選擇培養基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養型微生物唯一碳源為纖維素的培養基分解纖維素的細菌1無菌范圍：實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗操作過程2消毒與滅菌酒精燈旁操作超凈工作臺關鍵是防止外來雜菌的污染二、無菌技術耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時接種環、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養基，100in關鍵是防止外來雜菌的污染2消毒與滅菌：二、無菌技術四、大腸桿菌的純化培養分散成單個細胞,形成單個菌落3功能：單個或少數菌體2特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。鑒定菌種的重要依據固體培養基上大量繁殖子細胞群體菌落1定義：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養基1計算：培養基用量依配方計算各成分的用量2稱量：3溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補水定容、分裝、封口：5滅菌：6倒平板：培養基、培養皿倒平板約50℃倒置：防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基倒置1培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。3平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。思考討論（課P17）4在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。學生看課P18平板劃線法的操作在給學生看平板劃線法的視頻㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養基㈡純化大腸桿菌：接種方法⑴:平板劃線法：菌種劃3個平板1個不劃線1接種：接種環防止劃破培養基？（重復實驗）（空白對照）四、大腸桿菌的純化培養平板劃線時不能劃破培養基，為什么？一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。問題討論1為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，菌種直接線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。操作的第一步灼燒接種環：每次劃線之前都要灼燒接種環：在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環：②灼燒接種環之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。③劃線時最后一區域不要與第一區域相連。問題討論問題討論2在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？3在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106接種方法⑵:稀釋涂布平板法：a梯度稀釋菌液：菌液微量移液器⑵稀釋涂布平板法：a梯度稀釋菌液：b涂布平板：1個不涂布作空白對照滴灼冷涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍各梯度分別涂布3個平板重復組，取平均值平板劃線法⑵稀釋涂布平板法：問題討論涂布平板的所有操作都應該在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？答：應從操作的各個細節保證“無菌”，例如，酒精燈與培養皿的距離要合適，吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍，等等⑴平板劃線法：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2培養：將接種后的培養基和一個未接種的培養基放入37℃恒溫箱中培養12h～24h后，觀察并記錄四、大腸桿菌的純化培養接種方法下面對發酵工程中滅菌的理解不正確的是A防止雜菌污染B消滅雜菌

C培養基和發酵設備都必須滅菌D滅菌必須在接種前B滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。滅菌的目的發酵所用的微生物是滅菌后專門接種的五、課題成果評價培養12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發現這一點。（一）培養基的制作是否合格如果未接種的