瑞香狼毒的化學成分研究

狼毒又名斷腸草、山椒草、紅狼毒等。蒙古藥物被稱為dalkubu，這是robot科的一種植物。瑞香狼毒性味苦平,有大毒,有逐水祛痰、破積殺蟲之功效,臨床上主要用于治療乳腺炎、腮腺炎、脈癰、痘疹、疫熱、炭疽、結喉等癥,對于植物病原菌也有抑制作用。本文選用金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌為供試菌種,采用管碟法對瑞香狼毒不同溶劑提取組分及單體化合物的體外抑菌活性進行了研究。1材料和方法1.1培養基和試劑瑞香狼毒采自內蒙古武川縣西北部,經鑒定為瑞香科狼毒屬植物瑞香狼毒;金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]、營養肉湯培養基(批號070313)和營養瓊脂培養基(批號080229)均購自中國藥品生物制品檢定所。1.2方法1.2.1瑞香狼毒食品的制備稱取干燥瑞香狼毒根500g,加入5倍量牛奶、浸泡25h,撈出藥材,淋干水分,40℃鼓風干燥,即得瑞香狼毒奶制品。1.2.2瑞香狼毒炒劑的制備稱取干燥瑞香狼毒根500g,加入12倍量水,煎煮1h,過濾,共煎煮3次,合并濾液,濃縮至稠膏狀,即得瑞香狼毒煎膏。1.2.3乙醇浸膏的提取分別稱取瑞香狼毒生藥材、奶制品、煎膏各100g,用300ml95%乙醇分3次超聲提取,每次1h,減壓回收溶劑,得乙醇浸膏。取少量乙醇浸膏留樣,剩余樣品懸浮于蒸餾水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,濃縮,得各溶劑提取組分。1.2.4總浸膏的制備取干燥瑞香狼毒根3.5kg,粉碎后用95%乙醇冷浸提取,濃縮得總浸膏。浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,各溶劑組分經反復柱色譜分離純化后,正丁醇萃取部位得到化合物I~VI、乙酸乙酯萃取部位得到化合物VII~IX。1.2.5樣品溶液的配制稱取不同溶劑提取物各3份,每份均相當于原藥材2.15g。分別加入3ml水制成樣品水溶液,4℃冷藏,編號備用;同法操作,得粗提物的醋酸水溶液(pH=3.5)。1.2.6溶液的配制稱取單體化合物I~IX各3份,每份均相當于原藥材64.5g。分別加入3ml水制成樣品水溶液,4℃冷藏,編號備用;同法操作,得單體化合物的醋酸水溶液。1.2.7菌懸液的制備取已培養24h的金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的營養肉湯培養物,用0.9%的無菌氯化鈉溶液制成每毫升含3000~5000CFU(colony-formingunits)的菌懸液。1.2.8抑菌活性的初心抑菌活性的初發物的篩選采用管碟法,將每個涂布菌液的平皿上均勻放置6個鋼管,取供試樣品的水溶液3ml,水浴煮沸10min滅菌,按編號依次加樣,樣品量以加滿鋼管為宜,35~37℃培養24h,實驗重復2次,進行抑菌活性的初步篩選;將具有抑菌活性樣品的醋酸水溶液同法進行抑菌活性的研究,以醋酸水溶液為空白對照。2結果2.1瑞香狼毒水溶液的抗菌活性2.1.1抑菌效果的測定對瑞香狼毒生品各溶劑組分及單體化合物的水溶液進行了抑菌活性篩選,試驗結果表明,各供試樣品水溶液僅對金黃色葡萄球菌具有不同程度的抑菌作用,對銅綠假單胞菌沒有抑制作用。各溶劑部位的抑菌作用沒有明顯差別,但均強于單體化合物中狼毒色原酮(VIII)和異狼毒素(IX)的抑菌作用,其他單體化合物均無抑菌作用(表1)。2.1.2各種溶劑成分的抗菌活性研究2.1.2.不同組分的抑菌效果對瑞香狼毒煎膏制品各溶劑組分的水溶液進行了抑菌活性篩選,試驗結果表明,煎膏制品的乙醇組分、正丁醇組分、乙酸乙酯組分對金黃色葡萄球菌均具有不同程度的抑制作用,對銅綠假單胞菌均無抑菌作用;相對于生藥材而言,瑞香狼毒煎膏的抑菌作用沒有減弱,說明煎膏制品保留了原藥材的抑菌活性(表2)。2.1.2.對細菌的抑制作用對瑞香狼毒奶制品各溶劑部位的水溶液進行了抑菌活性篩選,試驗結果表明,奶制品的乙醇組分、正丁醇組分、乙酸乙酯組分對金黃色葡萄球菌均具有不同程度的抑制作用,對銅綠假單胞菌均無抑菌作用;相對于生品而言,瑞香狼毒奶制品的抑菌作用沒有減弱,說明奶制品保留了原藥材的抑菌活性(表3)。2.2體外抑菌活性測定將“2.1”中具有抑菌活性的樣品用pH3.5的醋酸水溶液溶解后,進行抑菌活性的研究。比較以醋酸水溶液和水作為溶劑時的體外抑菌活性,結果顯示,醋酸溶液具有一定的抑菌作用,故各提取組分的抑菌作用明顯增強;但溶劑對單體化合物的抑菌作用影響較小,故狼毒色原酮、異狼毒素的抑菌作用無明顯變化(表4)。3瑞香狼毒的抑菌性本實驗以不同極性溶劑從瑞香狼毒提取物中萃取得到不同極性組分,由于石油醚部位的樣品量極少,無法進行研究,故只觀察了乙醇組分、乙酸乙酯組分和正丁醇組分的體外抑菌效果。結果顯示,瑞香狼毒的各溶劑提取組分均具有不同程度的抑菌活性;單體成分活性較低,只有狼毒色原酮和異狼毒素具有抑菌作用,其他單體化合物均無抑菌作用,說明瑞香狼毒的抑菌作用來自于多成分的協同作用。瑞香狼毒各溶劑部位及單體成分對金黃色葡萄球菌具有抑菌作用,這為臨床用于腮腺炎、乳腺炎等化膿性感染的治療提供了理論依據;對銅綠假單胞菌均無抑制作用,不能用于術后及燒傷后引起的菌血癥和敗血癥的治療,這也與臨床應用相吻合。瑞香狼毒炮制前后的抑菌作用沒有明顯的差別,說明炮制品保留了原藥材的抑菌活性,炮制方法科學合理。據文獻報道,含有瑞香狼毒的蒙藥成方制劑具有殺“粘”、燥黃水的作用,臨床上主要是外用,以食醋調成糊狀,抹于患處,可以消腫,止痛。本實驗