毛細管電泳儀的使用（原創）*電泳儀的使用方法毛細管，電泳儀，原創概要：準備工作1.毛細管的制備：①剪略長于需要長度的毛細笥使用專用的裁剪紗布），斷端利用鑷子小心移除。②燒窗：從毛細管進液端開始到實驗者需要長度的位置燒窗，窗口盡量小，過程中可用防護工具對窗口兩端.準備工作毛細管的制備：剪略長于需要長度的毛細管（使用專用的裁剪紗布）。斷端利用鑷子小心移除。燒窗：從毛細管進液端開始到實驗者需要長度的位置燒窗，窗口盡量小，過程中可用防護工具對窗口兩端的毛細管進行防護。燒好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。注：檢測的有效長度為從毛細管進液端到檢測窗之間的距離，這個距離一般根據實驗者的需要自己掌握。取出卡槽：打開安放卡槽區域的門。旋轉固定卡槽的杠桿90度，按卡槽中央的釋放按鈕，握住卡槽的兩端向上抽出卡槽。安裝毛細管：將進液端的毛細管小心的從卡槽的出口插入。進入時可輕輕旋轉。當窗口到達檢測點時停止插入，將游離的進液端毛細管從卡槽的入口引出。并固定好毛細管外端的橡膠管。注：插入毛細管時小心操作，窗口位置的毛細管非常容易破裂，需格外謹慎。過程中切忌使用暴力。安放卡槽：用與取出的步驟相反順序的操作安放卡槽。添加樣品，緩沖液及沖洗液：為了減少樣品及緩沖液的揮發。在插入加液管前可在加樣管固定器的小孔內加入少量的ddH2O。已添加好的加液管，在插入轉盤上的固定槽前先離心2min加液時注意加樣槍頭緊貼管壁，防止氣泡的產生。為了減少虹吸作用，需要保持入口處和出口處的runningbuffer量一致，對于500ul體積的加液管，推薦加入500ul的劑量；對1.5ml體積的加液管，推薦1.3ml的劑量。推薦加入樣品的最小劑量為50ul檢測需要的最小劑量為15ul。在出口處的waste管中加入50ul的ddH2O，可以防止檢測端的毛細管被沖洗液的殘留污染。電泳儀的操作插上電源。檢查電泳儀的連接情況。檢查制冷區小槽內水量是否充足，打開電腦，打開電泳儀的開關（兩扇門都需要關閉）。在電腦桌面點開BioFocus的圖標。進入到BioFocus的控制界面。設置程序：①點擊Reagents鍵，在已有的ReagentsDatabase中查看是否含有需要使用的配液，有可點擊該配液查看。或使用edit鍵進行修改；沒有則點擊add進行編輯添加。添加之后注意命名名稱的唯一性。點擊Cartridges鍵，對卡槽的相關參數進行查看，修改。如CartridgesDatabase中沒有和試驗要求匹配的配置參數則點擊Add進行添加。注意需要激活相應的或者設置的卡槽。點擊Configurations^Define：添加需要的信息：configurationID；Configurationdescription；selectthecartridge^Continue：Regent雙擊左下角regentdatabase中需要選擇的regent；雙擊屏幕右邊你需要放置該regent的InletCarouselPosition^Sample:命名。同樣的方式從左下角的Reagents中添加到右側相應的位置上一點擊empty然后點擊需要刪除的Regent；點擊clear清除所有設置的Regent擺放次序一OK。注：在以上幾步中，記得同時設置好中止的清洗程序，及Shutdown程序。ddH2O清洗5分鐘。氮氣吹干。點擊Methods：選擇設置好的程序-^Define:填寫MethodIDDescription^InletRegent0選擇電泳中需要的Runningbuffer^OutletRegent選擇電泳中需要的RunningbufferfVoltageMode填寫需要的電壓，電流，正負極。設定電泳時毛細管需要的溫度，以及電泳時間一Add:添加在電泳前后需要灌注的洗液等。填寫灌注的時間fInjection:選擇電壓或者氣壓的進液方式；前者需選擇恒壓或者恒流。以及進液時間的長短；后者需選擇壓力 *時間的進液常數fDetector:DetectorParameters:設置波長。時間。通道，AU范圍；Displayparameters：設置波長。AU范圍。偏移；Options:設置RiseTimeTurnofflampatrunendDesignation：該設者存儲的位置fOK點擊AutoSeqs:選擇需要的程序fDefine查看。編輯需要調整的程序。如States顯示Conflict則需要對相應的設置進行調整。知道狀態顯示PendingfPendingoReadyfOKfStart停止，存儲，查看文件①等待所有的程序完成后(包括運行程序及情節程序)。要停止運行的程序。則可點擊屏幕左上角的Stop鍵f選擇需要中止運行的某一步(AbortCurrentRunOnly)，某一組(AbortCurrentRunGroup)或所有編輯的程序(AbortAutomationSequencefOKf存儲在指定盤上(Yes),自定義盤(NO)f需要取出加液管及轉盤(YES)不需要(NO)注：在所有的對話框消失之前。以及轉盤沒有回到初始位置之前，不能打開電泳儀的門。操作要點：將毛細管電泳儀放置于有空調的房間。保持室溫恒定。同時。操作中控制毛細管及儀器恒溫。緩沖液加壓一段時間后。淌度和電滲流會變化，要經常更換。緩沖液要用0.45mm微孔濾膜過濾后使用。對未涂漬的毛細管柱每天使用前先用0.1mol/L氫氧化鈉溶液、水及運行緩沖液各沖洗10min平衡后使用。更換緩沖液時。要用水沖洗3min后，再用緩沖液沖洗10min平衡后進樣。樣品宜溶于稀釋5~10倍的運行緩沖液中。以獲得好的峰形。為提高定量準確性。宜加入一內標。在保證峰形的前提下。樣品宜用高濃度，進樣時間應大于5psisec。摸索實驗條件時。可先用一短柱，用磷酸鹽、硼砂或Tris在不同的pH值條件下試驗。當選定緩沖液種類時，可先改變pH值獲得最佳分離。再改變濃度以獲得較好的峰形及柱效。為使分析高效、快速，電壓一般可用18?20kv。每次作完實驗后，用水沖洗5min，可將毛細管兩端置于水中保存。也可用氮氣吹干后保存。毛細管電泳儀的保養卡槽的清潔松開固定卡槽前方Holder的螺絲，用羊毛刷及ddH2O清潔卡槽。然后用干凈的刷子將其擦干。如果可以的話。可以用異丙醇，甲醇或者乙醇代替水進行清潔，這樣保存的時間較長。壓力電極的清潔吸入端電極的清理非常重要，利用甲醇，異丙醇，或者乙醇清潔內部及其頂端。在電極內部小孔的頂部涂上一層薄薄的潤滑油進行有效的防護。壓力電極底部邊緣的兩個小孔需要用羊毛刷和水每個月進行清潔。毛細管卡槽的清潔每次電泳完畢之后。應該將毛細管用清洗液。ddH2O沖洗。然后用氮氣吹干。托盤的清潔托盤內的小槽可能由于電泳液的溢出而收到污染，應采用溫水以及性能較為溫和的去污劑浸泡。然后用ddH2O沖洗干凈。晾干，然后再安裝好。清洗過程中注意不要讓安放EP管的小槽劃出托盤，經常使用的小槽應重點清理。制冷器的更換及灌注在常規的使用中。制冷儲備槽應當經常檢查和補充水量。水量應控制在槽內壁兩條線之間，每周加入1到2毫升的甲醇以防止細菌的滋長。使用電壓在20KV以下時，ddH2O可以作為制冷液，在20-25KV時。大部份的情況下仍然可以采用水作為制冷液，在沱25KV時就要采用FluorinertFC77Bio-Radcatalog#148-6050（機器配置時