ICS65.150CCSB5145代替DB45/T1084—2014TechnicalspecificationsforartificialseedlingproductionofCrassostreahongkongensis（本草案完成時間：2023-3-6）在提交反饋意見時，請將您知道的相關專利連同支持性文件一并附上。IDB45/T1084—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件代替DB45/T1084-2014《近江牡蠣苗種繁育技術規程》，與原文件相比，主要技術變化如下：——標準名稱修改為：“欽州大蠔苗種人工繁育技術規程”；——術語和定義中增加了“親貝”、“浮游幼蟲”、“D型幼蟲”、“殼頂幼蟲”、“眼點幼蟲”、“變態”和“稚貝”內容；——增加了術語的英文名稱，見3；——調整了培育池的深度，增加了池底坡度的要求，見5.2.2；——調整了餌料培育設施體積范圍，增加了培育容器，見5.3.2；——增加了親貝選擇對產地和體重的要求，見6.1；——調整了親貝促熟培育海水的鹽度要求，見6.2；——增加了親貝培育的日常管理要求，見6.4；——增加了卵液采集中水溫和洗卵的要求，見7.3；——調整了各時期幼蟲的培育密度，見8.3；——增加了投餌藻類種類，見8.4；——刪除了各時期幼蟲所需的培育天數，見8.5；——更換了采苗器及處理要求，見9.1；——調整了采苗器的投放密度，見9.2；——調整了附苗時間幼蟲的大小范圍，增加了附苗條件，見9.3；——調整了出池貝苗的每餅附苗數量，見9.4.5；——增加了病害防治中對育苗池的消殺處理，見11；——修訂了藻類培養用水和培養管理，見附錄A.3、A.4；本文件所代替文件的歷次版本發布情況為：DB45/T1084-2014，本次修訂為第一次修訂。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由廣西壯族自治區農業農村廳提出。本文件由廣西壯族自治區農業農村廳歸口。本文件起草單位：廣西農產品質量安全服務協會、廣西壯族自治區水產科學研究院、欽州市欽南區水產技術推廣站、欽州市水產技術推廣站。本文件主要起草人：彭金霞、官俊良、韋嬪媛、何蘋萍、張興志、張立、羅麗俐、黃偉德、蘇朝捷、阮良鵬、鐘昌艷。1DB45/T1084—2022欽州大蠔人工苗種繁育技術規程本文件規定了欽州大蠔（Crassostreahongkongensis）苗種人工繁育的場地條件、繁殖設施、親貝培育、人工授精與孵化、幼蟲培育、附苗、出池苗及病害防治的技術操作要求。本文件適用于廣西行政區域內欽州大蠔苗種的繁育生產。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業水質標準GB/T17924地理標志產品標志通用要求SC/T9103海水養殖水排放要求NY/T391綠色食品產地環境質量NY5362無公害食品海水養殖產地環境條件NY/T755綠色食品漁藥使用準則3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1欽州大蠔Crassostreahongkongensis農業部地理標志產品，學名香港牡蠣（Crassostreahongkongensis隸屬于雙殼綱(Bivalvia)，珍珠貝目(Pteriodae)，牡蠣科(Ostreidae)，是Lam等學者采用線粒體基因組結合形態學標準從近江牡蠣（Crassostrearivularis）中分離出來的“白肉型”牡蠣。應符合GB/T17924的規定。3.2殼高shellheight兩殼完全閉合時，由殼頂至腹緣的最大距離。3.3殼長shelllength兩殼完全閉合時，由殼前端至殼后端的最大距離。3.4親貝parentshellfish可繁殖貝苗的、性腺已成熟的成貝。3.5浮游幼蟲planktoniclarva2DB45/T1084—2022指營浮游生活的各期幼蟲的總稱。3.6D型幼蟲D-typelarva又稱初期面盤幼蟲。此期幼蟲的主要特征是由殼腺分泌的貝殼包裹了全身，形成兩片側面觀像“D”字形的殼。3.7殼頂幼蟲umbolarvaD型幼蟲經過一段時間的發育，鉸合線開始向背部隆起，形成殼頂的幼蟲。3.8眼點幼蟲eyepointlarva雙殼貝類幼蟲后期，在鰓的原基背部形成一對球形的由黑色素聚集起來的感覺器官，稱為眼點；是即將進行附著生活的特征，此時的幼蟲稱為眼點幼蟲。3.9變態metamorphosis幼蟲面盤和眼點消失、出現次生殼、以鰓作為呼吸和濾食器官、子代從浮游生活轉變為固著生活的生物學過程。3.10倒池Invertedpool將幼蟲從一個池中收集移入另一個干凈的池中的過程。3.11采苗器Seedlingattaching供牡蠣幼體固著、變態和發育生長的基質。本技術規程采苗器規定的是水泥圓餅。3.12稚貝spat在貝類生活史中，幼蟲經變態后向成體過渡的一個發育階段。主要特征是面盤完全退化，鈣質的貝殼形成，用鰓呼吸和攝食，足部發達，營底棲生活。4場地條件4.1場地選擇選擇毗鄰潮流暢通海域，淡水水源充足，地勢平坦，背風向陽，周邊3000m內無工業、農業及生活污染區，交通、水電、通訊方便的場地建設繁育場，其他環境條件應符合NY5362的規定。4.2水質要求水源應符合GB11607和NY/T391的要求。親貝培育、人工授精與孵化、幼蟲培育、藻類培養用海水水源要求鹽度20～35，pH8.0～8.4，溶解氧5mg/L以上。5繁殖設施5.1池塘3DB45/T1084—2022親貝暫養、催熟池塘面積1300m2～3300m2，水深2m以上，沙泥底，平整不滲漏，排灌方便，增氧設施齊備。5.2苗種培育車間5.2.1車間要求采用棚架或房屋結構，要求可以調光、通風、防雨、抗風暴。5.2.2設施要求水泥池，用于苗種孵化及培育，面積為30m2～100m2，池深為1.5m～2.0m，半埋式，池內角為弧形，排灌方便，池底坡度以8.0%～10.0%為宜，增氧設施齊備。5.3藻類培養車間5.3.1車間要求室內間，用于藻類一級培養，要求具有調光、控溫功能；室外大棚，用于藻類二、三級培養，要求具有調光、通風、防雨、增氧功能。5.3.2設施要求一級培養用3L～5L的三角燒瓶，二級培養可用18L～50L透光塑料水桶，三級培養可用500L~1000L玻璃鋼桶和透光塑料桶或車間池子。6親貝培育6.1親貝選擇宜選用欽州大蠔地理標志保護范圍海域的自然種群或原良種場的成貝，貝齡2.5齡～3.0齡，殼高9cm以上，體重100g以上，殼面完整、附著物少，有活力，軟體部肥滿，生殖腺覆蓋大部分內臟囊。6.2培育條件培育海水鹽度15～20，水溫25℃~30℃,自然光照。池塘應事先施植物生長素進行藻類培養，水色呈黃褐色或黃綠色，透明度在30cm左右，溶解氧5mg/L以上，陰雨天氣時可增氧。6.3培育密度50個/立方米～60個/立方米。宜投喂硅藻,日投喂細胞量為1.0×105個/毫升～3.0×105個/毫升，分3次～4次投喂，輔助投喂金藻、扁藻、螺旋藻粉和雞蛋黃等，并根據親貝攝食情況調整投餌量。早晚各換水1次，每次換水量1/3~1/2，2d～3d倒池1次；采卵前3d～4d每次換水1/2，不倒池，每天吸污1次。6.5性腺檢查當親貝性腺覆蓋整個內臟囊，配子成熟時可用于人工育苗。4DB45/T1084—20227人工授精與孵化7.1工具準備牡蠣開殼器、吸管、載玻片、玻璃或塑料容器、篩絹網袋等工具用10mg/L高錳酸鉀溶液浸泡10min后，用過濾海水沖洗。7.2鑒別雌雄親貝清洗后解剖，選擇生殖腺飽滿的個體，用吸管取少量性腺，涂于載玻片上的水滴中，肉眼觀察呈顆粒狀散開的為雌貝，煙霧狀散開的為雄貝，進一步鏡檢確定雌雄，剔除掉雌雄同體個體。親貝♀:♂=10︰1，鑒別后分別放置。7.3卵液采集先制備卵液，盆中盛放一半過濾海水，鹽度15～20，水溫25℃~30℃,將雌貝內臟團放入孔徑70μm～80μm的篩絹網袋中，在大盆中輕擠網袋讓卵子濾出。獲得的卵液需用500目絹網過濾清洗后加入過濾海水，靜置30min～60min。7.4精液采集卵液靜置時間接近結束時制備精液，盆中盛放少量過濾海水，鹽度15～20，將雄貝內臟團放入孔徑70μm～80μm的篩絹網袋中，在小盆中輕擠網袋讓精子濾出，鏡檢精子活力。7.5人工授精授精按親貝♀:♂=10︰1，將卵子密度調整到1×106個/升～2×106個/升，取精液加入卵細胞液中，攪拌3min～5min。7.6孵化受精卵移入孵化池中孵化，孵化密度20個/毫升～30個/毫升。受精卵入池后，加大充氣，撈取水面泡沫，定期觀察胚胎發育情況。8幼蟲培育8.1幼蟲收集在水溫25℃~30℃下，受精卵經20h～24h發育至D型幼蟲，用網目38μm～48μm的篩絹網將D型幼蟲收集移入培育池培育。8.2培育條件8.2.1水質條件培育用水需經沉淀沙濾后用1mg/m3～2mg/m3乙二胺四乙酸（EDTA）處理，鹽度15～20，水溫25℃~30℃,pH8.0～8.4，溶解氧5mg/L以上。8.2.2環境條件5DB45/T1084—2022散氣石0.8個/立方米～1個/立方米，24h連續充氣，光照控制在500lx～1000lx。8.3培育密度前期（殼高140μm以內）3個/毫升～5個/毫升，中期（殼高140μm～280μm）2個毫升～3個/毫升，后期（殼高280μm以上）1個/毫升～2個/毫升。8.4投餌管理藻類培養見附錄A。幼蟲培育前期用金藻或小球藻投喂，中后期增加角毛藻和扁藻混合投喂。投餌量根據水中幼蟲密度、幼蟲胃飽滿度和水中剩餌多寡靈活掌握，以適量多次為好，每天2次～3次。8.5水質管理D型幼蟲入池1d～2d內采用逐日加水，第3d起用網目48μm篩絹網箱換水，每天1次～2次，每m～280μm）3/5，眼點幼蟲期（280μm～340μm）100%。每隔3d～5d倒池一次。養殖海水排放應符合SC/T9103的規定。9附苗9.1采苗器選擇及處理采用厚1.5cm～2cm、直徑5cm～6cm的水泥圓餅，7個～8個/串，餅間距8cm～10cm，10串/捆，垂直吊放，根據育苗池深度確定采苗器長度，末端離池底10cm～20cm為宜。采苗器經浸泡，反復沖洗后，用20mL/m3的次氯酸鈉溶液浸泡18h～24h，硫代硫酸鈉（Na2S2O3）中和至無氯，排掉浸泡海水再用淡水沖洗干凈待用。9.2采苗器投放密度根據幼蟲密度，每立方米水體垂直吊放水泥圓餅串30捆～40捆。9.3附苗時間當幼蟲殼高達到300μm～320μm，眼點幼蟲比例達30%以上且部分出足時，收集幼蟲并移入已投放采苗器的水池中。9.4附苗管理9.4.1附苗環境條件附苗池光照0lx～500lx，附苗初期微充氣，眼點幼蟲固著完成24h后加大充氣量。9.4.2幼蟲密度0.5個/毫升～1.0個/毫升。9.4.3投喂管理日投喂單胞藻，附苗前期投餌密度為1.0×105個/毫升～2.0×105個/毫升，稚貝期可增加投餌量。6DB45/T1084—20229.4.4水質管理附苗初期水位應不低于采苗器，采用流水方式換水。固著完成24h后，可加大換水量。養殖海水排放應符合SC/T9103的規定。9.4.5出池附苗完成后7d～10d，當貝苗附著量達到30個/餅～50個/餅時，即可出池。10.1規格殼高1.0mm～2.0mm。10.2質量肉眼可見苗體明顯，大小均勻，固著牢固。規格合格率≥90%；數量合格率≥95%；傷殘死亡率≤10.3運輸采用常溫干運法，途中采取防曬、防風干、防雨、防磨擦等措施，一般運輸時間控制在8h以內。11病害防治預防為主，防治結合。每次倒池換水，使用10mg/L的高錳酸鉀溶液對育苗池進行消毒，育苗過程中可添加1mg/m3～2mg/m3土霉素等抗菌素進行細菌性病害預防。藥物使用應符合NY/T755的規定。7DB45/T1084—2022（資料性）藻類培養A.1藻種海水單胞藻，應根據生產季節選用適于培養的藻種，一般采用金藻、小球藻、角毛藻、扁藻。A.2培養液硅藻類培養液各元素濃度為N∶P∶Si∶Fe=10∶1∶1∶0.1，其他藻類培養液各元素濃度為N∶P∶Fe=10∶1∶0.1。A.3培養用水保種及一級培養用水要加熱煮沸徹底消毒，密封冷卻待用。二級培養用水經沙濾、500目篩絹袋過濾煮沸維持3min～5min；如水質較好，二級培養用水也可采用有效氯30ppm的漂白粉或漂白片消毒。三級培養用水采用有效氯30ppm的漂白粉或漂白片消毒8h以上，曝氣后待用，使用前再用硫代硫酸鈉（N