瓜子體外遺傳毒性安全性評估

瓜面，又名瓜面、塔面、塔面、繭中心等，是甘蔗科植物的干燥成熟種子。1儀器和試藥1.1實驗設備日本OLIMPUS倒置顯微鏡CKX41;日本OLIMPUS顯微鏡BX-4型;瑞士阿道夫科耐控溫搖床AGLT-X;瑞士阿道夫科耐CO1.2鼠傷寒沙門氏菌回復突變株chl中國倉鼠肺成纖維細胞(ChineseHamsterLungFibroblast,CHL)來自中科院上海生命科學院。外源大鼠肝微粒體組分(S9)、TA97、TA98、TA102、TA100、TA1535系列組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌的標準菌株購于MOLTOX公司。瓜蔞子飲片(陜西興盛德藥業有限公司),按照《中國藥典》外觀、薄層色譜等方法1.3材料、實驗方法3,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇對照品購于上海詩丹德標準技術服務有限公司;MTT噻唑藍,購于上海炎熙生物科技有限公司。陽性對照物:環磷酰胺(CP)、絲裂霉素C(MMC)、松胞素B(CytoB)、疊氮鈉(SA)均購于SIGMA公司,敵可松(Dexon)購于上海邁瑞爾化學技術有限公司。2-氨基蒽(2-AA),購于TCI公司。2實驗方法2.1檢測瓜子的濃度根據最新版世界經濟合作與發展組織(OECD)遺傳毒性指導原則,不同溶劑對體外遺傳毒性假陽性率影響較大,用水提法提取瓜蔞子有效成分2.2細胞實驗2.2.1本氨基藍細胞mtt的活力試驗選用世界經濟合作與發展組織(OECD)遺傳毒性指導原則4732.2.2細菌回復突變試驗pmes試驗按照GB/T21786-2008細菌回復突變試驗方法2.2.3體格檢測CHL細胞培養在6孔培養板內蓋玻片上,按照OECD遺傳毒性指導原則TG4732.2.4表面微測試按照OECD體外微核試驗指導原則TG487式中:DC細胞毒性=100-RI2.3數據的統計與分析試驗數據采用統計軟件處理,分析結果用3結果3.1s9對細胞生長的影響各組細胞染毒后,與陰性對照組細胞生長情況相比,在陽性對照組藥物作用下,無論S9是否存在,細胞生長均受到抑制,細胞存活率顯著下降,見表1。與陰性對照組細胞存活率數據比較,瓜蔞子水溶性浸出物各濃度接觸組均沒有顯著差異,也未呈現劑量依賴關系,對CHL細胞活力均無顯著影響。3.2測定結果及分析各陽性對照組誘導營養缺陷型菌株回復突變菌落數與陰性對照組相比,具有極顯著性差異(P<0.01),說明測試有效性。各加藥組回復突變菌落數尚未超過陰性對照組回復突變菌落數的2倍,且不呈現劑量依賴關系,由此判定瓜蔞子水溶性浸出物在此試驗中沒有誘發回復突變作用。試驗結果見表2。3.3染色體畸變試驗通過對CHL細胞體外分別染毒6h和24h的對比,加與不加S9染毒條件下,陰性對照畸變率≤5%,陽性對照與陰性對照畸變率差異極顯著(P<0.01),瓜蔞子水溶性浸出物各濃度加藥組染色體畸變率雖然隨著染毒時間延長,畸變率有上升趨勢,但是與陰性對照差異不明顯(P>0.05),且未出現劑量依賴關系,結果見表3。3.4對瓜子水溶液浸出物的致增殖微核試驗結果通過微核試驗,分別給CHL細胞在加與不加S9染毒條件下,陽性對照與陰性對照微核率差異極顯著(P<0.01),瓜蔞子水溶性浸出物各濃度加藥組與陰性對照組細胞增殖未受到顯著影響,微核率差異不明顯(P>0.05),且未出現劑量依賴關系,結果見表4。4中藥提升手段運用現代分離提取工藝對中草藥有效成分分離提純,是對傳統中草藥有效成分分析、功效發掘、藥理研究、中成藥劑型提升的必須手段。有研究表明,瓜蔞子中富含油脂、甾醇、黃酮、揮發油等不易溶于水的有效成分然而,中藥是復雜成分的組合體,成分之間相互作用,可改變中藥的藥性和毒性5測定瓜子及其中藥配伍的毒性級別的客觀標