模塊2微生物的純培養技術2微生物的分離純化模塊2微生物的純培養技術2微生物的分離純化1在自然界中，微生物呈混合狀態存在，要想獲得所需菌種，則必須把它們從中分離出來并加以純化培養。分離：將特定的微生物個體從群體中或從混雜的微生物群體中分離出來的技術叫作分離。純化：在特定環境中只讓1種來自同一祖先的微生物群體生存的技術叫作純化。概念在自然界中，微生物呈混合狀態存在，要想獲得所需菌種，則必須把2分離技術主要是稀釋和選擇培養。稀釋：是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞，并使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法和稀釋涂布法。選擇培養：如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時，需要結合使用選擇培養法，即選用僅適合于所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體，改變群體中各類微生物的比例，以達到分離的目的。概念分離技術主要是稀釋和選擇培養。概念3實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基稱量溶化滅菌倒平板計算（二）接種純化大腸桿菌實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基稱量溶化滅菌倒平板計4實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基稱量溶化滅菌倒平板接種方法有：計算（二）接種純化大腸桿菌實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基稱量溶化滅菌倒平板接5實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基稱量溶化滅菌倒平板接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法計算（二）接種純化大腸桿菌實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基稱量溶化滅菌倒平板接6稀釋平板分離法：將待分離樣品做系列稀釋，使樣品中的微生物細胞充分分散。取合適稀釋度的樣品與培養基混合，培養出現菌落。如稀釋度適合在培養基平板上即可出現的單個菌落。平板劃線分離法：用無菌接種環挑取待分離材料，在平板培養基表面劃線稀釋而獲得單菌落的方法。實驗原理稀釋平板分離法：實驗原理7細菌的接種工具接種針接種環涂布器細菌的接種工具接種針接種環涂布器81.平板劃線接種法：目的：使混合的細菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以獲得純菌。方法

分區劃線法：適用于含菌量較多的標本

連續劃線法：適用于含菌量較少的標本1.平板劃線接種法：9菌落當單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，便會形成一個肉眼可見的、具有一定形態結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落當單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，便會形成一個肉10微生物的分離純化-課件11微生物的分離純化-課件12分區劃線生長現象分區劃線生長現象13連續劃線生長現象連續劃線生長現象141.平板劃線法1.平板劃線法15微生物的分離純化-課件16微生物的分離純化-課件17討論每次使用接種環之前都要進行灼燒，為什么？討論每次使用接種環之前都要進行灼燒，為什么？18討論1.操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。討論1.操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上19討論2.以免接種環溫度太高，殺死菌種。討論2.以免接種環溫度太高，殺死菌種。20討論2.以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。討論2.以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.劃線后，線條末212.稀釋涂布法2.稀釋涂布法222.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：2.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：232.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：依次1mL，注意更換移液管充分混勻2.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：依次1mL，注意更換移液管24（2）涂布平板操作（2）涂布平板操作25系列稀釋1個225mL無菌水2個9ml無菌水得10-125g或25mL樣品10-2,10-3的菌懸液1ml稀釋涂布平板法系列稀釋1個225mL無菌水2個9ml無菌水262.稀釋涂布法倒平板，待平板冷卻凝固后再加樣2.稀釋涂布法倒平板，待平板冷卻凝固后再加樣27取菌懸液2.稀釋涂布法取菌懸液2.稀釋涂布法28將菌液均勻涂