雞胚接種專業知識講座雞胚接種專業知識講座第1頁二、試驗目標

了解雞胚基礎結構與功效，掌握常見雞胚接種方法。雞胚接種專業知識講座第2頁三、雞胚結構與功效卵殼殼膜氣室絨毛尿囊膜

尿囊腔羊膜與羊膜腔卵黃卵白卵殼膜氣室絨毛尿囊膜羊膜腔尿囊腔卵白卵殼雞胚接種專業知識講座第3頁卵殼殼膜上有細孔，進行氣體交換使氣體分子和液體分子在內外兩方面進行交換。雞胚接種專業知識講座第4頁氣室

絨毛尿囊膜呼吸和調整壓力起胚胎呼吸器官功效，氧氣交換是在膜血管內經過卵殼孔而進行。雞胚接種專業知識講座第5頁尿囊腔胚胎排泄器官，內含有尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽溶液，以后尿囊液中尿酸鹽快速增加，胚胎發育到第12-13天后，尿囊液開始變得混濁。雞胚接種專業知識講座第6頁羊膜與羊膜腔卵黃

卵白其中盛有羊水，胎體浸泡于其中在胚胎發育早期供給雞胚營養。在胚胎發育晚期供給雞胚營養。雞胚接種專業知識講座第7頁四、材料

1、雞胚10日齡

2、病毒雞新城疫病毒（NDV）

3、照蛋燈

4、打孔器

5、石蠟

6、注射器

7、蛋座

8、酒精棉球、碘酊棉球雞胚接種專業知識講座第8頁五、受精卵選擇最好是來自SPF雞群，以降低母源抗體影響受精卵殼最好是白色受精卵必須新鮮，保留在5-20℃不要超出10天，保留一個月受精卵，孵化率快要于零。雞胚接種專業知識講座第9頁六、孵育孵卵箱內溫度應保持在37.5-38.5℃相對濕度：50%-60%必須確保有充分新鮮空氣流通，尤其是在孵化5-6天以后從孵育后第3天開始，天天翻卵一次。雞胚接種專業知識講座第10頁七、檢卵自孵育后第4天開始檢卵，天天一次。孵育4-5日于檢卵燈上檢驗雞胚受精是否及發育情況。未受精卵：只見含糊卵黃陰影，不見血管和雞胚痕跡活胚：含有清楚血管和雞胚暗影，較大雞胚還可見到胚動，但孵育14、15天以后胚動不顯著，甚至無胚動。死胚：血管昏暗含糊，沒有胚動。雞胚接種專業知識講座第11頁八、接種前處理用檢卵燈再次檢驗雞胚活力，用鉛筆畫出氣室和胚胎位置，并在將要接種部位做好記號。對雞胚進行消毒。雞胚接種專業知識講座第12頁九、雞胚用于病毒培養優缺點

（一）優點組織分化程度低，病毒易于增殖可選擇不一樣日齡和接種路徑感染病毒組織和液體中含大量病毒輕易采集和處理起源充分設備和操作簡便易行雞胚接種專業知識講座第13頁（二）缺點胚內可能污染細菌和病毒

沙門氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽腦脊髓炎病毒母源抗體許多病毒在雞胚中增殖缺乏特異性感染指針雞胚接種專業知識講座第14頁十、接種路徑

1、尿囊腔接種

2、絨毛尿囊膜接種

3、卵黃囊接種

4、眼球接種

5、羊膜腔接種正粘病毒和副粘病毒

6、腦內接種狂犬病毒

7、靜脈接種藍舌病毒雞胚接種專業知識講座第15頁（一）卵黃囊接種法

主要用于蟲媒披膜病毒以及鸚鵡熱衣原體和立克次氏體等分離和增殖。

方法一：

1）取6-8日齡雞胚，用檢卵燈照視畫出氣室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大頭向上)

2）用碘酊和酒精消毒氣室端

3）用鋼錐在氣室中央錐一

小孔雞胚接種專業知識講座第16頁4）用注射器吸收病毒懸液，沿氣室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。

5）用熔化石蠟封孔，置孵卵箱內繼續孵育，天天翻卵1-2次，24h內死亡者廢棄。雞胚接種專業知識講座第17頁4）用鋼錐打一小孔，將針頭刺入約1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml

5）用熔化石蠟封孔，置孵卵箱內繼續孵育，24h內死亡者廢棄方法二：

1）2）同一

3）將卵橫放在卵座上，胚胎位置向下。在卵長徑1/2處用碘酊和酒精消毒。雞胚接種專業知識講座第18頁（二）絨毛尿囊膜接種

主要用于痘病毒和皰疹病毒分離和增殖。

方法一：

1）取10-12日齡雞胚，畫出氣室部，消毒

2）在氣室端卵殼上開一1.5×1.5cm口

3）用滅菌眼科鑷子撕去一小片內殼膜

4）滴入接種物

5）用膠布或透明膠紙封閉切口雞胚接種專業知識講座第19頁方法二：（要做人工氣室）

1、在胚胎附近近氣室處，選擇血管較少部位，用電烙器在卵殼上烙一個直徑約3-4mm烤焦圈。2、用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵殼，造成卵窗。

3、在氣室端中央鉆一個小孔。

4、用針尖挑破卵窗中心殼膜，切勿損傷其下絨毛尿囊膜，滴加生理鹽水于刺破處。

雞胚接種專業知識講座第20頁5、用橡皮乳頭緊貼于氣室中央小孔上吸氣，造成氣室內負壓，使卵窗部位絨毛尿囊膜下陷而形成人工氣室，此時可見滴于殼膜上生理鹽水快速滲透。

6、用1ml注射器滴2-3滴接種物于絨毛尿囊膜上。雞胚接種專業知識講座第21頁7、用透明膠紙封住卵窗，或用玻璃紙蓋于卵窗中，周圍涂上熔化石蠟密封，氣室中央小孔用石蠟密封。

8、胚橫臥于卵箱中，不許翻動，保持卵窗向上。雞胚接種專業知識講座第22頁（三）

尿囊腔接種

主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病毒、新城疫病毒分離和增殖。

1、選取10-11日齡雞胚，畫出氣室和胚位

2、在氣室靠近胚體處用碘酊和酒精進行消毒

3、用鋼錐穿一小孔

4、將注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接種物

5、用石蠟封口，并置孵卵箱中孵育，天天翻卵并檢卵一次，24h內死亡者廢棄。雞胚接種專業知識講座第23頁十一、NDV接種雞胚后對雞胚影響

NDV以尿囊腔接種于9-10日齡雞胚，強毒株在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡雞胚以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以頭部、足趾、翅膀出血尤為顯著。雞胚接種專業知識講座第24頁十二、收毒

收毒前將雞胚直立放置于4℃冰箱半小時以上，凍死胚胎，預防