細菌的分離培養與鑒定一培養基的制備 二消毒與滅菌三細菌的接種和培養四細菌的生化反應

細菌的分離培養與鑒定一培養基的制備 1一培養基的制備步驟：1稱量藥品2溶解3調節PH5過濾分裝6包扎標記7滅菌一培養基的制備步驟：2二消毒滅菌法物理滅菌法：干熱滅菌法：150-170℃維持1-2h；

高壓蒸汽滅菌法121℃（101.53kPa）15-30min；

其他：過濾除菌法、紫外線滅菌法。化學滅菌法：主要使用一些化學消毒劑進行，如：75％酒精、1％的新潔爾滅等。

二消毒滅菌法物理滅菌法：3三細菌的分離、接種與培養細菌的分離方法：

稀釋法、平板分區劃線法。細菌的接種方法：斜面培養基接種法、液體培養基接種法、穿刺接種法、傾注平板法、平板涂布法。細菌的培養方法：需氧培養法CO2培養法厭氧培養法三細菌的分離、接種與培養細菌的分離方法：43.1細菌的分離培養方法連續稀釋法平板分區劃線

分區劃線分離法：此法常用于含菌量較多的標本如混合細菌的分離。

連續劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養

3.1細菌的分離培養方法連續稀釋法5細菌的分離培養與鑒定-課件61區2區3區4區1234平板分區劃線法（學生操作）1區2區3區4區1234平板分區劃線法（學生操作）7注意事項劃完前一區后，需重新灼燒接種環后再進行下一區的劃線。相鄰兩區要有重疊區域。結果觀察：觀察各區的生長情況，并看是否有單一菌落長出；菌落的形態、顏色、大小、邊緣、透明度都需記錄。注意事項劃完前一區后，需重新灼燒接種環后再進行下一區的劃線。8平皿送37℃溫箱培養24小時結果(要求)兩種單個菌落分四區無雜菌瓊脂不破平皿送37℃溫箱培養24小時結果(要求)9℃℃103.2細菌的接種斜面接種法該法主要用于單個菌落的純培養、保存菌種或觀察細菌的某些特性。液體接種法多用于一些液體生化試驗管或發酵的接種。穿刺接種法此法主要用于半固體培養基、明膠及雙糖管的接種。3.2細菌的接種斜面接種法11(1)斜面瓊脂培養基接種法（2人一組）大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌送培養24小時(2支/組)一組37℃溫箱一組60℃溫箱一組4℃冰箱用接種環挑菌后在斜面表面劃折線(1)斜面瓊脂培養基接種法（2人一組）送培養24小時(2支12(2)液體培養基接種法（2人一組）1.菌種(任選一種）大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌2.接種每一菌種分別接種pH5.0/7.2/9.0的營養肉湯各一支3.送37℃溫箱培養24小時(2)液體培養基接種法（2人一組）1.菌種(任選一種）13液體培養基沉淀生長混濁生長表面生長液體培養基沉淀生長混濁生長表面生長14(3)瓊脂半固體接種法（1人一份）1.菌種大腸埃希菌/枯草芽孢桿菌/葡萄球菌2.接種用接種針穿刺接種3.送37℃溫箱培養24小時(3)瓊脂半固體接種法（1人一份）1.菌種153.半固體培養法－觀察細菌是否有動力1、3：有動力：呈云霧狀2：無動力：沿穿刺線生長，并變粗3.半固體培養法－觀察細菌是否有動力1、3：有動力：呈16四、細菌的生化反應1糖發酵試驗(Fermentationofsugars)2IMViC試驗靛基質產生試驗（吲哚試驗）甲基紅試驗V-P試驗枸櫞酸鹽利用試驗3硫化氫產生試驗4尿素分解試驗

四、細菌的生化反應1糖發酵試驗(Fermentation17糖發酵試驗

不同細菌分解糖類的能力和代謝產物不同。例如大腸桿菌能發酵葡萄糖和乳糖；而痢疾桿菌可發酵葡萄糖，但不能發酵乳糖。即使兩種細菌均可發酵同一糖類，其結果也不盡相同，如大腸桿菌有甲酸脫氫酶，能將葡萄糖發酵生成的甲酸進一步分解為CO2和H2，故產酸并產氣；而痢疾桿菌缺乏該酶，發酵葡萄糖僅產酸不產氣。

糖發酵試驗18吲哚（靛基質）試驗(Productionofindole)

有些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而產生靛基質，靛基質無色，不能直接查見，此時滴加數滴吲哚試劑于培養基的液面上，上層呈玫瑰紅色者為陽性，仍呈黃色者為陰性。吲哚（靛基質）試驗(Productionofindole19甲基紅（methylred）試驗

將細菌接種于葡萄糖蛋白胨水中，37℃培養48h后，再向其中加入甲基紅試劑3滴。大腸桿菌等細菌分解葡萄糖產生丙酮酸，但丙酮酸不被縮合成乙酰甲基甲醇，而轉化成甲酸、乙酸等酸性物質，培養基中酸多，pH值低，故呈紅色，為陽性。而產氣桿菌將丙酮酸縮合成乙酰甲基甲醇，培養基中酸少，pH值高，故呈黃色，為陰性。甲基紅（methylred）試驗20VP（Voges-Proskauer）試驗

大腸桿菌和產氣大腸桿菌均能發酵葡萄糖，產酸產氣，兩者不能區別。但產氣桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在堿性溶液中被氧化生成二乙酰，二乙酰與含胍基化合物反應生成紅色化合物，是為VP試驗陽性。大腸桿菌不能生成乙酰甲基甲醇，故VP試驗陰性，

VP（Voges-Proskauer）試驗21枸櫞酸鹽利用試驗(Utilizationofcitrate)

將細菌接種于枸櫞酸鹽培養基上，37℃培養48h。產氣桿菌等細菌能利用枸櫞酸鹽作為碳源，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，使培養基變為堿性，培養基中的指示劑（溴麝香草酚藍）由淡綠色轉為深藍色，為枸櫞酸鹽利用試驗陽性。大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽，培養基顏色不變，為陰性。枸櫞酸鹽利用試驗(Utilizationofcitrat22硫化氫產生試驗(ProductionofH2S)

將細菌穿刺接種于醋酸鉛培養基中，37℃培養24h后觀察結果。有些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸，生成硫化氫，穿刺部位呈黑褐色，是為反應陽性。培養基顏色無變化，則為陰性。

硫化氫產生試驗(ProductionofH2S)23尿素分解試驗(Splittingofurea)

將細菌接種于尿素培養基中，37℃培養18～24h。變形桿菌能迅速(2～4h)分解尿素產生大量的氨，使培養基變堿而呈紫紅色，是為陽性反應。尿素分解試驗(Splittingofurea)