目錄真菌毒素簡介黃曲霉毒素概述黃曲霉毒素現有檢測方法介紹黃曲霉毒素檢測藥典收載情況藥典檢測方法詳解注意事項及實驗室建議1中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023真菌毒素簡介真菌毒素：由產毒真菌在適宜的環境條件下產生的有毒代謝產物，由真菌菌核產生。Mycotoxin：源于希臘語（Mykes）和拉丁語（Toxicum）2中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023常見真菌毒素分類真菌種類所產毒素曲霉屬黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A鐮刀菌屬玉米赤霉烯酮、T-2毒素、嘔吐毒素、伏馬毒素青霉屬展青霉素、桔青霉素3中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023真菌毒素監控意義真菌毒素對食品安全的危害真菌毒素對種、養殖業的危害真菌毒素對制藥行業的危害（中藥）國際貿易中作為技術壁壘在國際反恐和戰爭中，真菌毒素可作為大規模殺傷性生化武器4中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素概述黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等菌種產生的次生代謝產物5中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素的發現1960年，在英國東南部一些農場中，有大約10萬只火雞不明原由地突然死亡。1961年發現火雞飼料中混有的花生粉能夠使大鼠誘發肝癌。1962年，研究發現花生粉中含有一種熒光物質是導致。火雞死亡的病因，這種熒光物質被證實為黃曲霉的代謝產物，故命名為“黃曲霉毒素(Aflatoxins)”。6中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023存在極其廣泛主要存在于土壤，動植物及各種堅果中。家庭自制發酵食品等也經常發現黃曲霉毒素。一般在熱帶和亞熱帶地區，食品中黃曲霉毒素的檢出率比較高。未能及時曬干或儲藏不當的糧食容易產生，在農作物正常的生長期中也可以形成。7中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023毒性極強1993年黃曲霉毒素被世界衛生組織（WHO）的癌癥研究機構（IARC）劃定為Ⅰ類致癌物，是一種毒性極強的劇毒物質，僅次肉毒毒素，是目前已知霉菌中毒性最強的。急性毒性：比氰化鉀大10倍，比砒霜大68倍慢性毒性：肝臟損害，呈急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。脾臟和胰臟也有輕度的病變。8中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023中藥中容易產生黃曲霉毒素的品種種子、果實、糧谷類中藥材發酵類中藥材動物類中藥材油性成分多的中藥材含上述種類藥材的中成藥9中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素的種類及性質根據在紫外線照射下產生熒光顏色的不同，分為B族和G族兩大類及其衍生物B族G族藍色熒光黃綠色熒光10中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023化學結構基本結構：是一組化學結構類似的二呋喃香豆素的衍生化合物目前發現約20余種，已分離鑒定出12種：B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。B1：最常見、毒性及致癌性最強11中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023化學結構式12中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023理化性質黃曲霉毒素相對分子量312～346難溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有機溶劑，但不溶于石油醚、己烷和乙醚在中性及酸性溶液中較穩定，但在pH為1～3的強酸性溶液中稍有分解，在pH為9～10的堿性溶液中分解迅速13中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023純品為無色結晶耐高溫，黃曲霉毒素B1的分解溫度為268℃紫外線對低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性14中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素現有檢測方法介紹薄層層析法：靈敏度低，定量困難HPLC-紫外檢測法：不衍生，靈敏度低，采用UPLC可以增強靈敏度HPLC-熒光檢測法：需衍生，靈敏度高高效液相色譜-串聯質譜法：不需衍生，靈敏度高，假陽性少，成本高15中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023免疫化學分析方法

?酶聯免疫吸附法：快速、簡便、單一毒素、假陽多

?免疫親和柱-熒光分光光度法：高效、無毒、假陽多

?微柱篩選法：半定量，測總量

?一步式黃曲霉毒素檢測金標試紙法：快速、現場大批量初篩16中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素檢測藥典收載情況2005年增補本附錄

第一次增加了黃曲霉毒素測定法2010年版一部

?正文：僵蠶、陳皮、酸棗仁、桃仁、胖大海品種項下增加了黃曲霉毒素殘留量檢查

?附錄：繼續收載了黃曲霉毒素測定法17中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/20232010年版一部第二增補本修訂了附錄方法?刪除了流速規定?增訂了另一種衍生方法：即光化學衍生法?取消了免疫親和柱的品牌規定2015年版四部通則2351黃曲霉毒素測定法?增加了第二法：高效液相色譜-串聯質譜法?增加附注：“當測定結果超出限度時，采用第二法進行確認”18中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/20232015年版四部通則增加中藥中真菌毒素測定指導原則?基本原則（中藥中真菌毒素的分類、監控品種、測定方法、限值擬定）?基本內容（高效液相色譜法、高效液相色譜-質譜聯用法）19中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/20232015年版四部通則9302中藥有害殘留物限量制定指導原則中關于黃曲霉毒素的規定“由于黃曲霉毒素毒性強，目前國際上不建議設定黃曲霉毒素的安全耐受量和無毒作用劑量，也無最大限量理論值計算公式，限量越低越好”。20中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023《中國藥典》2015年版正文收載品種根及根莖類：遠志果實種子類：大棗、肉豆蔻、決明子、麥芽、陳皮、使君子、柏子仁、胖大海、蓮子、桃仁、檳郎、酸棗仁、薏苡仁動物類：僵蠶、水蛭、地龍、全蝎、蜈蚣共19種，較2010年版藥典增加14種21中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素藥典檢測方法詳解液相條件：C18，甲醇-乙腈-水（40:18:42）衍生方式：柱后碘衍生、柱后光化學衍生混合對照品溶液的制備：液體標液（B1\B2\G1\G2=1\0.3\1\0.3ug/ml）梯度稀釋500倍22中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023供試品溶液的制備：15g粉末，3gNaCl，70%甲醇提取，免疫親和柱純化測定：吸取混合對照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入色譜儀，繪制標準曲線。吸取供試品溶液20-25μl，測定23中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023方法來源：《中國藥典》2015年版四部通則2351黃曲霉毒素測定法基本步驟?提取

?凈化（活化、上樣、洗雜、洗脫）

?測定

?隨行質量控制（質控樣、隨行加樣回收）24中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023泵流操作架免疫親和柱HPLC-熒光檢測器光化學衍生器自動固相萃取儀25中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023凈化步驟取15ml（離心后的提取液），加水至50ml濾過，取20ml，通過免疫親和柱，流速3ml/min加水洗滌兩次，每次10ml過空氣10秒，將水擠出柱子分次加甲醇1.5ml，自然洗脫，過空氣，定容至2ml26中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023免疫親和柱的原理利用抗原－抗體免疫反應的原理，使用大劑量的單克隆抗體，選擇性的將樣品提取液中的黃曲霉毒素吸附，用水將雜質洗脫除去，再用甲醇定量將黃曲霉毒素洗脫，達到分離凈化目的黃曲霉毒素單克隆抗體雜質27中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素的衍生化衍生原因

黃曲霉毒素B1、G1熒光遇水要淬滅，檢測前需要衍生化28中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023藥典附錄收載的兩種衍生方法

?碘衍生法：碘作為衍生劑，對衍生溫度有要求，試劑對儀器有腐蝕性，需要沖洗

?光化學衍生法：紫外光燈（254nm）照射，操作簡單，對衍生溫度無要求，不需要其他衍生劑，無需沖洗對黃曲霉毒素B1和G1進行衍生，黃曲霉毒素B2和G2不受該衍生步驟的影響29中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023AFB1AFG1黃曲霉毒素的衍生化30中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023黃曲霉毒素的衍生化31中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023結果報告低于檢測限（標出檢測限）

報告具體值

未檢出限度內限度外報告具體值32中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023方法難點痕量分析——ppb級，要求高靈敏度毒性強，具有一定的風險性——安全防護措施基質復雜33中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023注意事項取樣的代表性

黃曲霉毒素在樣品中分布不均勻免疫親和柱的使用

儲存、使用溫度（使用說明書）安全防護

操作人員專門培訓，全程穿工作服佩戴手套注意事項及實驗室建議34中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/2023對照品的使用使用黃曲霉毒素混合對照品，不使用黃曲霉毒素固體純品自行配置

對照品貯備液避光、低溫、密閉保存，工作液現配現用35中藥中黃曲霉毒素的檢測7/21/202