抗原抗體反應(yīng)實驗第1頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月抗原抗體反應(yīng)

antigen-antibodyreaction概念基本原理特點影響因素應(yīng)用范圍第2頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月一.概念抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)體內(nèi)產(chǎn)生保護(hù)效應(yīng)造成病理損傷體外多種表現(xiàn)形式:凝集,沉淀,補體結(jié)合,中和等.第3頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月二.基本原理抗原和抗體分子結(jié)構(gòu)及立體構(gòu)型的互補

抗原-抗體結(jié)合力疏水作用,氫鍵,范德華引力,靜電吸引作用第4頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月4typesofnoncovalentforces第5頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月三.特點特異性和交叉反應(yīng)可逆性一定條件下（低pH、高濃度鹽、凍融等）→抗原-抗體可被解離最適比例

反應(yīng)體系中抗原/抗體最適比例→決定反應(yīng)結(jié)果的關(guān)鍵因素第6頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月四.影響因素(一)反應(yīng)物自身因素1.抗體*來源*特異性與親和力*濃度2.抗原*理化性質(zhì)、表位多寡和種類第7頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月(二)環(huán)境條件1.電解質(zhì)不可缺少2.酸堿度pH6-83.溫度15-40c4.時間規(guī)定時間第8頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月五.應(yīng)用范圍用已知抗原檢測未知抗體用已知抗體檢測未知抗原大分子物質(zhì)藥物、激素和炎性介質(zhì)等各種半抗原物質(zhì)第9頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月

抗原抗體反應(yīng)的基本類型

1.Precipitation---2.Agglutination---3.Radioimmunoassay4.Enzyme-linkedImmunosorbentAssay5.Immunofluorescence6.WesternBlotting7.FlowCytometryandFluorescence8.ImmunoelectronMicroscopy第10頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月沉淀反應(yīng)（Precipitation）

可溶性抗原＋抗體沉淀

凝集反應(yīng)（Agglutination）

顆粒性抗原＋抗體凝集本次實驗涉及的抗原抗體反應(yīng)第11頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月沉淀反應(yīng)分類:Precipitationinfluids（液相沉淀）Precipitationingels（瓊脂擴(kuò)散）

-radialimmunodiffusion（單相擴(kuò)散）

-doubleimmunodiffusion（雙相擴(kuò)散）

GelImmunoelectrophoresis（

凝膠免疫電泳）

-rocketimmunoelectrophoresis（火箭電泳）第12頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫沉淀反應(yīng)(precipitation)

原理可溶性抗原+抗體

白色沉淀內(nèi)容單向定量免疫電泳(火箭電泳)瓊脂糖雙向免疫擴(kuò)散第13頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月單向定量免疫電泳(火箭電泳)實驗原理：將抗體混入瓊脂內(nèi);將待測樣品（抗原）加入瓊脂一端的加樣孔中，進(jìn)行電泳;抗原在電泳時與抗體反應(yīng)，比例合適時形成錐形沉淀峰（形如火箭）,峰高與抗原含量成正比;以標(biāo)準(zhǔn)抗原的濃度為橫坐標(biāo)，峰高為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可根據(jù)峰高從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出待測樣品中的抗原含量。第14頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月

*實驗流程抗體+瓊脂瓊脂板打孔數(shù)個(孔與板緣距離1cm)

加入樣品(由低濃度到高濃度)電泳第15頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗內(nèi)容：抗原抗體反應(yīng)

1.火箭電泳2.瓊脂糖雙向擴(kuò)散試驗3.凝集試驗(凝血試驗)第16頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗步驟1.取熔化并冷卻至50°c的1%瓊脂糖凝膠，加入anti-IgG抗體，混勻后澆至玻璃板上。2.凝固后，如下圖打孔。3.第1-5孔加入10l經(jīng)倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)血清樣品1:32，1:16，1:8，1:4，1:2。第6孔加入待測血清。4.將瓊脂板放入電泳槽，用濾紙與電泳槽搭橋連接，樣品孔一端接負(fù)極。電泳80v,2-3h.（-）（+）第17頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月1：41：81：161：3250ul稀釋液50ul1:2血清50ul50ul倍比稀釋：第18頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗步驟5.取出瓊脂板，在0.5%考馬斯亮藍(lán)中染色，6%醋酸脫色。6.從加樣孔的圓心到峰尖量取各孔樣品沉淀峰的高度。以抗原濃度為橫坐標(biāo),峰高為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算待測樣品中抗原的含量。第19頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月Rocketeletrophoresis第20頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月瓊脂糖雙向免疫擴(kuò)散*實驗原理：在含有電解質(zhì)的瓊脂中打孔，分別加入抗原及抗體，兩者互相向?qū)Ψ娇讛U(kuò)散，當(dāng)比例合適時即形成弧形沉淀線。沉淀線的數(shù)目、位置、形狀等，與抗原或抗體的純度、濃度、擴(kuò)散速度等有關(guān)。第22頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月*實驗流程：鋪制瓊脂糖凝膠板

打孔(梅花型)中心孔內(nèi)加抗IgG血清,其余加倍比稀釋待檢血清濕盒內(nèi)37c溫育24h第23頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月DoubleImmunodifusion第24頁，課件共25頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗步驟1.將已溶化的1%生理鹽水瓊脂糖3~4ml傾注在玻片上制成厚薄均勻的凝膠板。待凝固后，打梅花孔（如下圖）。2.在中心孔內(nèi)用加樣器加入10lanti-IgG血清（抗體）。3.在第1~5孔內(nèi)分別加入10l經(jīng)系列倍比