分光光度法測BPB的電離平衡常數胡文龍PB07206300中國科技大學高分子系摘要：本實驗通過用分光光度計測定溴酚藍最大吸收波長，并在最大波長下對不同pH的溴酚藍溶液的吸光度和pH的測定求出室溫下溴酚藍溶液的電離平衡常數。關鍵詞：溴酚藍鄰苯二甲酸氫鉀最大吸收波長吸光度pH前言分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。在分光光度計中，將不同波長的光連續地照射到一定濃度的樣品溶液時，便可得到與眾不同波長相對應的吸收強度。如以波長（λ）為橫坐標，吸收強度（A）為縱坐標，就可繪出該物質的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法，稱為分光光度法，也稱為吸收光譜法。用紫外光源測定無色物質的方法，稱為紫外分光光度法；用可見光光源測定有色物質的方法，稱為可見光光度法。它們與比色法一樣，都以Beer-Lambert定律為基礎。上述的紫外光區與可見光區是常用的。722型紫外可見分光光度計是在近紫外和可見光譜區域內對樣品物質作定性和定量的分析，是理化實驗室常用分析儀器之一，可廣泛應用于工廠、學校、冶金、農業、食品、生化、環保、石油化工、醫療衛生等方面。實驗原理鏟慕蔬波長瞞為滅λ回的單肯色光到通過融任何養均勻帶而透遞明的糖介質澆時，運由于悟物質哪對光亡的吸夢收作毛用而唱使透故射光葬的強緩度（值I朋）比糠入射粱光的竊強度券（純I眼0士）要范弱，神其減適弱的反程度疲與所汗用的溉波長興（蛙）有霉關。綿又因胸分子抗結構欲不相烈同的園物質連，對墾光的富吸收貿有選藍擇性亂，因何此不沾同的顫物質烈在吸伶收光螺譜上恰所嶼出現籮的吸泛收峰葉的位齡置及野其形場狀，胡以及煌在某瓦一波搏長范麥圍內慈的吸艘收峰銀的數米目和謙峰高壇都與煩物邀質的政特性萍有關撥。分斃光光棕度法鄙是根毛據物劇質對撐光的翠選擇屑性吸長收的反特性叫而建替立的被，這播一特冒性不細僅是偵研究起物質培內部遮結構跪的基幫礎，君也是館定性證分性饅、定旺量分漆析的役基礎遲。師帆根據代貝爾儉—藏郎比朝定律喚，溶杰液對喚于單棗色光梯的吸同收，澆遵守銹下列攤關系蠟式：漠宰紡慨孩尋始棍告些虎義冶腫(竹6－旬1)碗稼式中槍，罵D鼠－消充光（逼或光斷密度楚）；她但I哄/恢I誼0兇－透剖光率貌；袋婆K院－摩須爾消鹽光系戚數，留它是耕溶液遺的特濱性常川數；我遵l陸－被蛋測溶鞏液的錫厚度寨（即五吸收琴槽的雄長度追）；憐C孟－溶集液濃菌度。辣圖瞎6-呀1株附分光唱光度叫曲線霸音在分縣光光匹度分于析中杠，將病每腰一種搞單色材光，敗分別畏、依具次駕地通及過某陣一溶錦液，奸測定占溶液絲對每膨一種步光波尊的消暑光。陰以消斥光（需D板）對摩波長陰（蝶）作弊圖，牢就可生以得籠到該痰物質襖的分北光光笑度曲遮線，項或吸撈收光維譜曲泉線，潮如圖好6蒸－秧1搶所示夾。由燃圖可撫以看窯出，村對應踢于某笨一波學長有殖著一討個最債大的血吸收業峰，柳用這倘一波癢長的莖入難射光貢通過幣該溶勞液就杯有著榆最佳瀉的靈尊敏度肯。印撓從（前1言）式擴可以奪看出鏟，對疲于固韻定長渡度桐的吸僑收槽攏，在尿對應茅最大繪吸收安峰啞的波核長（章）下過，測藝定不鳥同濃趣度呆C慶的消記光，堅就可紗以作陡出線兆性的他D著～票C卡線，棗這就彩是定架量分傲析的毫基礎汽。也錦就是輪說，那在該宜波長搞時，拖若溶辱液遵施守貝懇爾－名郎比士定律超，則菊可以鑼選擇雜這一椅波長帳來進湖行定寨量分雷析。首諒以上浪討論直是對胞于單環組分舍溶液欺的情千況，血如果圖溶液雨中含同有多屋種組寇分，拘情況用就比豎較復敵雜，劣要進品行分辛別討巖論，躬大致渣有下能列四寸種情闖況：植1兄、混套合物店中各費組分壽的特踢征吸題收不熟相重踐疊，輛既在兩波長牌1銷時，京甲物玻質顯烏著吸旅收而仗其他逃組分窯的吸菊收可顏以忽俗略；全在波著長喘2抽時，駐只有巖乙物撇質顯棋著吸辮收仿，而鼠其他捎組分粗的吸加收微綢不足各道，街這樣六便可防在盞1資、墻2毫波長趟下分膜別測悟定甲話、乙遵物質方組餐分。摟2宴、混棉合物壞中各蹲組分樣的吸集收帶帝互相脅重疊墻，而錘且他嫁們都援遵守軌貝爾頓－郎幟比定蝦律，廟對幾奶個組甲分即寄可在歐幾個申適當冰的波阿長進雙行幾動次吸兄光度紐的測即量，劍然后鴨列幾至個聯添立方斤程式早，即缺可求把分別心算出心幾個免組分擦的含敗量。慧3軍、混材合物習中各輔組分疊的吸沈收帶茄互相練重疊托，部但不潤遵守樹貝爾階－郎驕比定種律。璃4頓、混袋合溶杏液中燕含有福未知退組分呀的吸淡收曲宵線。旬毯本實傾驗用雷分光占光度丙法測經定弱農電解章質溴晨酚藍雞的電填離平拿衡常痕數。騰溴酚離藍是泉一種恨酸堿肢指示渠劑，稱本身澆帶有陽顏色東且在姜有機賺溶劑鴿中電巨離度懇很小融，所擠以用辛一般將的化陣學分役析法煤或其攜他物肆理化淘學方概法螞很難坡測定聞其電雷離平奶衡常恰數。耐而分莖光光涼度法拿可以懷利用季不同違波長嘴對其倒組分封的不距同吸哄收來售確釋定體精系中聚組分疫的含何量，埋從而詢求算備溴酚仔藍的功電離測平衡希常數輩。水門溴酚宣藍在鉛有機造溶劑瞎中存表在著蜘以下鼻的電柳離平錄衡：麗獸醒容趕澆小走HA叔馳=虹鹿H鏟+燥+A懇－朋相其平漲衡常隔數為浩：致K蝦a炕跡齡烈戚思淘瓦免慨叫地序教燈笑柏弟(農6－忠2)低各溶液纏的顏窩色是東由顯話色物僵質純HA套與冠A設－近引起拴的，壽其變始色范訪圍奇PH駛在元3.泡1鴉～毒4.批6怨之間助，當逢PH卵3.躁1倡時，陡溶液窮的耳顏色心主要溝由葡HA戲引起丹的，殺呈黃佛色；陷在卵PH帆≥豬4.將6箱時，吧溶液哀的顏醒色主哪要由敘A衣－棕引起夢，骨呈藍燒色什。實佩驗證墨明，億對藍畫色產斥生最醫大吸柳收的拆單色以光的遷波長獎對黃黎色不衣產生摘吸收爽，在美其最扮大吸做收波糧長時矛黃色虹消光配為盼0崗或很融小。知因此楊，本歸實驗暖我們腎所研辛究的捐體系吵應屬囑于上發述討悼論的菊第一響種情忽況。眾用對余A形－寧產生經最大盾吸收缸波長臥的單袋色光株測定火電離軌后的鏡混合辦溶液煤的消蠢光，矩可求累出虛A禽－炭的濃沾度。悉令爛向A翅－鄉在顯薦色物姿質中腦所占間的分耽數為暢X營，則瞎HA之所占胃的摩目爾分充數為題1噴－肆X資，所賭以爽鈔簽脆香栽(駕6－呢3)膏悲或者謠寫成捏：裁塘禽港濤賴排究忌某(千6－稠4)縣根據提上式處可知途，只尾要測呈定溶漸液的每PH絨值及盆溶液譜中的驅[H籠A]演和胡[A凝－討]色，就升可以唉計算券出電賀離平攜衡常止數紛K囑a滲。庭愈在極夕酸條否件下揮，蘭HA村未電艙離，起此時俊體系嘉的顏叔色完捉全由批HA風引起關，溶雕液呈濫黃色浙。設桿此時宰體系鑰的消癢光度今為那D焦1棗；在栗極堿貼條件癥下，除HA受完全驢電離叨，此竭時體授系的悄顏色逃完全忙由派A灶－末引起尊，此墾時的讓消光醬度為異D籌2挽，臺D位為兩謠種極賊端條撥件之謠間的榮諸溶都液的談消光漸度，席它隨脊著溶亮液的勒PH券而變鳳化刃，予D戚＝質(1穿－蹈X)胳D般1牢+X殼D己2蛋。溝代入矮（方4券）式雨中得答：饒偏槳(冒6－首5)阿腦在測博定壘D吳1惕、方D呆2遇后，亂再測渾一系崖列件PH均下的齊溶液扭的光蒼密度掘，以編對澇PH迅作圖誼應為幻一直姥線，賢由其鈴在橫姐軸上壩的截福距可額求出謝p日K影a和，從來而可國得該蒙物質撲的電氏離平盼衡常箱數。不實驗添部分山標（惰一）便儀器例與試薯劑制試劑細：棍5最×購10絹-5份mo宵l危·速dm貸-3曠的溴違酚藍鄉溶液莊，座0愧.1鳴mo臭l駁·擔dm勻-3捎的H需cL各溶球液葛1能mo渡l好·采dm炮-3順的H景cL間溶液故厭偷錘朽淋舞液推0債.1洲罵mo綢l事·脖dm搬-3第的N禽aO纏H溶池液滅0.咳2既mo視l庸·降dm塞-3錯Na蛇OH象溶液私0滋.1碧壁mo旅l遺·鄭dm壓-3授鄰苯邁二甲奪酸氫爬鉀溶奉液煩雁古廳儀器倚：護72竟2否型分擇光光棗度計賞勸客品乒會1鞠臺，讀超級騰恒溫流水浴茅良沸脅史衡1涉臺敗10鳴mL育移眉液管繪免肌飛撥綱劍糠3添支，晌華咳陳2普5m芳L每移液包管握1蝦支油25輩mL錯量筒搬閱臭押心咐參杰圍1抗只，占滴管譜若干級10泡0貌mL釋容量些瓶丹要命躁摸1槍1屠個謊實驗擠過程志1餅、打綠開超花級恒挖溫水故浴使獻之恒牧溫在屆25冠℃喉，打火開分熟光光橋度計千，預衣熱儀伍器，瀉同時幼掀開串樣品醫室蓋胞。報膊抹2凈、確欲定溶腹液的譽最大磨吸收炒波長戚。鏟才（庭1蓋）用肺2領0m筋L啞移液團管準乳確移霜取隨5復×干10之-5陪mo萌l邊·騙dm賤-3劃的裁B.圖P.膛B緊溶液屋2疏0m姜L雙，置桿于一男個洗糊干凈裕的1毒0剪0m身L蹈的容刻量瓶樹中，稅并用覽50堪ml洋的移殊液管默準確符加入牽50懶mL租0.呈1躲mo闊l水·坐dm缺-3南的鄰希苯二敘甲酸邪氫鉀強緩沖恢溶液弟，加連H排2邀O稼稀釋冒到刻黎度，避得爹1榴.0恭×翠10舅-5宿mo惜l芹·留dm削-3族的夜B.貧P.稍B張溶液摔。鉛旱（童2擴）取味１嗓cm粘厚度虛的比略色皿小兩只墊，分幟別用跳H頂2焦O能和筐1衣.蠅0悔×匙10感-5統mo但l慣·已dm迫-3原的捆B.第P四.B喪溶液蘆洗凈薪，再密分別馳裝入巨2/仁3替體積道的絮H采2遷O贈和疲1.耽0賴×僚10科-5瓦mo測l棒·予dm糊-3辦的帖B.拼P.藍B偽溶液扛，把患比色哥皿兩兄光面樓擦干澡，正叼確插嫩入光粒度計員恒溫驢比色蛇槽中態，用稼蒸餾戴水作途空白綠溶液蒼，用久以校幼正儀模器。奪放在四最外衣面的涌一個獲槽內甘便于承測量雜。松（3愉）在偷48礙0愛－忙63睡0n側m月波長息范圍目內，背從低蝶到高餡逐一微選擇迷儀器遲的入登射光辱波長鈔，用善空白取溶液去蒸餾害水在削T軌檔校杠正儀處器的野0妥點和玉10瓦0代，并聰用吸奸光旋興鈕調鳳H風2逗O鋒的吸秩光度蠻為睡0覆，再冰測量塌兩種哄不同煎溶液揪的吸薯光度陡。在天48衫0殊－擊56洲0太的范煮圍內模每隔貢10壤nm賤測一戲次，需在笑56私0頂－組60頌0n家m修范圍肆內每鑒隔乞5n甲m廉測一礙次。印將所細得的朋結果果以吸芬光度橋D嫁對守作圖球，憂或從澤測量徑數據蠻直接緞讀出屋B.濱P.欄B傅溶液械的最偏大吸旋收波失長。林3讀、各屑個不徹同酸忘度的墨溴酚膚藍溶盾液配對置。梨取粘7魚只1濟0牧0m鄭L電的干身凈容猛量瓶緣，分亡別加光入2弟0m屋L夢5恐×葬10禽-5倦mo墊l瘦·書dm瘋-3駛的錘B.地P.霧B恨溶液迅，再糾分別催加入慰50漁ml依L0敘.1聾絞mo另l躬·正d折m傭-3飛鄰苯微二甲級酸氫壁鉀溶鏟液。蹦加入蘆的H漏CL罷和N狡aO斤H的芽量以蘋下表投為準垮，再醉加稀健釋至翼刻度皆。可靈分別姜得到惜不同粘PH扮值下共的籍B.突P.蜘B亭溶液爸。緒溶液貢號嬸PH袖值駁X緩1艇（刪0.剪1孫mo顯l謎·徑dm遼-3療HC烏l塊）扔溶液獸號給PH盜值潛X垮1答（劫0.械1趨mo鮮l頁·曬dm仁-3賀Na棗OH忍）求1蹄～嗽3.掩2汽16算.0障0醋mL咽5限～攤4.業2額3.勺00鋤mL騎2侄～或3.約4視10纏.0鋒0梢mL記6榜～艙4.偷4培7.廁00軟mL炸3擱～屠3.悄6管6.劃00毛mL杯7毯～傷4.殖6爽11佛.0饞0迎mL秧4黎～地3.紫8簡3.缸00小mL主4、速不同執酸度著下，混溴酚鋼藍溶徒液p石H值咽的測暴定。見將上踏述七蚊種不儀同酸影度與的溴藏酚藍驅溶液蛙用酸指度計搜測量坡相應影的p和H值援。德5、磨不同斬酸度敬下，仇溴酚壟藍溶屠液吸背光度柏D饅的測肢定。叫（孕1翅）將斤波長脊固定式在宇ma獄x吃處，蹲把已造經恒架溫的笛溶液絨逐一變以蒸總餾水露作參朱比，刃測量晃其吸慈光度鋤，可斬得一鉗系列唇的貓D謊值。曾由于浮在杠ma篩x立的波根長下臺，對嗓HA榆不產隆生吸庸收，爐所以芹此時匪的踢D駁是歉A斯－咽的吸堅收提幣供的桶。測妹量過與程中港注意懷溶液奸恒溫說。怖（2乏）取敗兩只迅10月0m蜜L顯容量胖瓶，對分別欣加入磨20逐mL棋5味×歲10賣-5誠mo酒l殼·胸dm黃-3防的救B.惡P.巨B款溶液瓶。在咐一支驅容量肢瓶中璃加入坑50茫mL閱0.河2括mo袖l馳·免dm總-3敢的N芽aO匠H溶尊液稀穗釋到牽刻度偏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