糖化血紅蛋白的測定方法及其在臨床中的應用價值1、糖化血紅蛋白的定義糖化血紅蛋白（GHb）是紅細胞在生存期間HbA與己糖（主要是葡萄糖）緩慢、持續且不可逆地進行非酶促反應的產物。由于HbA所結合的成分不同，又分為HbA1a（與磷酰葡萄糖結合）、HbA1b（與果糖結合）、HbA1c（與葡萄糖結合），其中HbA1c含量最高，占60%-80%，是目前臨床最常檢測的部分。

糖化血紅蛋白的測定結果以百分率表示，指的是和葡萄糖結合的血紅蛋白（HbA1c）占全部血紅蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血紅蛋白的水平為4%-6%。

正常成人體內的血紅蛋白

HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA(??)HbA2()HbF()97%0.5%2.5%成人Hb胎兒Hb未糖化糖化6%94%-主要的糖化血紅蛋白

80%A1a和A1b含量極低HbA1c由蛋白的非酶法糖化形成不穩定的Schiff（醛亞胺結構）可逆快速穩定的HbA1c（醛酮結構）不可逆慢速葡萄糖進入紅細胞后與HBA的?鏈N端纈氨酸殘基縮合?再經Amadori

分子重排后2、糖化血紅蛋白的特性（1）糖化血紅蛋白比例高低的決定因素取決于血糖的濃度血糖與血紅蛋白的接觸時間紅細胞的存活時間血糖濃度越高，接觸時間越長，HbA1c的比例越大（2）反應近2-3個月的平均血糖水平人體內紅細胞的壽命一般為120天，在紅細胞死亡前，血液中糖化血紅蛋白含量也會保持相對不變。因此糖化血紅蛋白水平反映的是在檢測前2-3個月內的平均血糖水平。穩定性好。糖化血紅蛋白是逐漸生成的，且不易分解，短期內的血糖升高或降低，不會引起糖化血紅蛋白的波動，能更好地反映較長時間的血糖控制程度。（3）可以隨機抽血進行檢測，簡便易行，可重復性好。

HbA1c的測定方法通常分為兩大類：一類是基于GHb和Hb的電荷不同，如離子交換層析法、電泳法。另一類是基于Hb上糖化基團的結構特點，如親和層析法、免疫法和酶法等。電泳法與離子交換層析法一樣也是基于糖化和非糖化的Hb所帶的電荷不同進行分離。此法精密度高，但分析時間較長。親和層析法基于糖化和非糖化Hb結構不同進行分析的。除外HbA1c外，血液中的其他糖化的Hb也可與親和物結合，因此該方法的檢測結果為GHb總量，而不是HbA1C含量免疫法可在全自動生化分析儀上用免疫抑制比濁法測定HbAlc水平。具有良好的精密度和抗干擾能力。酶法原理是在蛋白酶的作用下，切斷HbAlc的β鏈N末端的糖化二肽，糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成過氧化氫，在過氧化氫酶的作用下與顯色劑產生顯色反應，通過測定吸光度求出定HbAlc的百分數。床旁檢驗或快速檢驗（POCT）有2種方法，一種是利用硼酸親和原理在顏色反射計上進行檢測。HbAlc特異性地與硼酸復合物結合呈藍色，而未糖化Hb呈紅色，通過兩者光強度的比例計算。另一種是基于免疫反應原理在熒光分析儀上檢測含HbAlc的熒光染料分子的斑點數，換算成HbAlc的數值。此方法便攜、快速，但精密度較其他方法要差。離子交換色譜法

葡萄糖與血紅蛋白?鏈N端纈氨結合后等電點降低，導致糖化的Hb所帶的正電荷比未糖化的Hb少，與樹脂的附著力小，可分別用不同離子強度的緩沖液在不同時間將Hb從陽離子交換柱中洗脫下來，再根據峰值下面積來計算HbAlc占總Hb的比例。目前臨床上較常采用高效液相色譜法（HPLC）和低壓液相色譜（LPLC），HPLC被國際上列為測定HbAlc的參考方法。干擾因素1.

Hb的變異體對HbAlc測定的影響常見的變異體有HbF即Hb的?鏈由γ鏈替代：如地中海貧血、鐮狀細胞病患者。還如HbS、HbC、HbE等。Hb的變異體會隨著HbAlc一起洗脫而影響HbAlc的測定值。2.

Hb的化學修飾產物最常見的是氨基甲酰化Hb(腎病患者)和乙酰化Hb(接受阿司匹林治療者)。氨甲酰化為高濃度尿素在體內形成異氰酸,結合到HbN末端氨基酸上，形成氨基甲酰血紅蛋白。其與HbAlc的等電點相似，使得HbAlc測定結果假性升高。有關報道，此法測定HbAlc時，如果尿素濃度超過17mmol/L，每升高1mmol/L會使測定值升高0.04%。另外腎病患者常伴有貧血,紅細胞壽命縮短,在解釋檢測結果時，要綜合考慮。3.紅細胞生存期的改變當患有溶血、失血性貧血等時，紅細胞代謝加快，HbAlc值通常下降。缺鐵性貧血時，衰老的紅細胞所占的比例增高，HbAlc值會假性增高。全自動糖化血紅蛋白測定裝置

ADAMSTMA1c

HA-8160HA-8160的技術參數

測定對象：全血測定項目：

HbA1c、HbA1、HbF及圖樣測定原理：

逆相分離陽離子交換層析柱樣本使用量：

約4uL（全血樣本）樣本容器：采血管（EDTA，NaF、肝素）必須樣本量：采血管1mL

HA-8160的特點

HPLC法：

高速分離穩定性HbA1c，特異性強、精密度高。自動去除不穩定性HbA1c同時測定HbA1、HbF能發現變異Hb，修飾Hb高速測定：90秒/樣本HbA1c的測定范圍在3～20%之間。HA-8160波形HbA1a1HbA1a2HbA1b＃CHbFHbA0HbA1cHA-8160結果樣圖測定信息測定結果波峰信息色譜圖影響測定結果的標本因素測定前標本的儲存室溫（15-25℃）下保存2周，冰箱（2-8℃）保存1個月，測定結果的變異率均低于3%，穩定性良好。HbA1c通常用翻倒混合的血或者自然沉降血球。如用和血糖測定共用NaF抗凝采血管，也可用離心分離的血球。但要在700g(1500rpm)、5min左右溫和的離心條件下做前處理，否則HbA1c的測定值有若干偏高的情況出現。對于非重度溶血標本，可進行測定。HPLC分析圖中可出現變性峰形。存在未檢出結果的情況貧血患者當Hb濃度太低時＜65g左右，低于最低檢出量，可采取低速離心后適當棄去部分血漿調節Hb濃度至正常水平。HbA1c的臨床應用主要有三方面

糖尿病的診斷監測糖尿病患者長期血糖的控制狀況HbA1C的監測目的在于消除血糖波動對病情控制的影響。是國際公認的糖尿病監控“金標準”。糖尿病并發癥的風險評估其水平高低與糖尿病并發癥的風險密切相關一糖尿病診斷DM的診斷標準：DM(1)具有糖尿病的癥狀，FPG＞7.0mmol/L（2）具有糖尿病的癥狀，隨機血糖＞11.1mmol/L，且伴有尿糖陽性者。(3)OGTT峰值＞11.1mmol/L，OGTT2hPG＞11.1mmol/LIFG

FPG6.1-6.9mmol/L，2hPG＜7.8mmol/L。IGT

FPG＜7.0mmol/L，2hPG7.8-11.1mmol/L

臨床癥狀不典型者，需要另1d重復檢測確診，但不主張做第3次OGTT。（一）HbA1c用于糖尿病的診斷

隨著HbA1c檢測標準化的逐步完善，2010年美國DM協會（ADA）更新DM診療指南，將其和FPG、OGTT一起列為DM診斷標準之一。并指出HbA1C≥6.5作為診斷DM的標準，HbA1C在5.7-6.4%為DM前期，5.7-6.0%為DM高危期，6.1-6.5%為DM超高危期。ADA的診斷標準是否適用于中國人，此標準頒布后，不少文獻報告以OGTT為金標準評價HbA1C診斷糖調節受損（IGR）和DM的診斷效能。北京大學第一附屬醫院徐國賓教授在他的《HbA1C對糖調節受損和2型糖尿病的診斷價值》文章中指出，推薦6.5%作為診斷DM的cutoff值或醫學決定水平是合理的，其具有較高的特異性和陽性預測值，一般＞96%，生理變動較FPG低，但敏感性不如FPG，HbA1C＜6.5%不能排除經血糖檢測和OGTT試驗確診的DM患者。因此，與血糖聯合檢測有助于提高糖尿病診斷的敏感性和特異性。另外，在他的此項研究中不支持HbA1C在5.7-6.4%為IGR的診斷標準。（二）HbA1C在妊娠期糖尿病中的診斷妊娠期糖尿病（GDM）是指在妊娠期發生或首次發現的不同程度的高血糖癥，包括妊娠前已經存在但漏診的孕前DM及孕期伴隨發生的糖耐量異常。GDM發病率逐年呈上升趨勢，孕期隨著血糖水平的升高，妊高癥、剖宮產率、巨大兒、胎兒畸形、早產以及子代患糖尿病、心血管疾病的風險也會增加。GDM對母嬰近期和遠期都會造成很多不良影響。美國糖尿病學會（ADA）2011年制定了新的GDM診斷標準，孕24-28周用75g葡萄糖進行口服葡萄糖耐量試（OGTT），以空腹、糖后1h

2h血糖5.1、10.0、8.5mmol/L作為cutoff值，3項中任何1項值達到或超過上述標準即可診斷GDM。但此項檢測過程需要多次采血，操作繁瑣，給孕婦帶來痛苦和不便。HbA1C是否可以作為GDM一個輔助診斷指標，使用普通人群的HbA1Ccutoff值診斷GDM是否合理有待進一步探討。我國有文獻報道，HbA1C診斷GDM的最佳cutoff值4.9%，他的特異性和敏感性均高于80%，諸多研究顯示，孕期HbA1C升高的水平與孕期母嬰健康關系密切。但HbA1C并未被推薦作為GDM的診斷指標之一。這還需進行更廣泛的臨床驗證。（妊娠期由于紅細胞周轉加快，紅細胞壽命縮短，空腹血糖降低，使得糖化時間縮短，導致妊娠期HbA1C生理性下降）。（三）與應激性高血糖的鑒別診斷各種應激反應如手術、創傷，感染、急性心肌梗死、腦血管意外等疾病和輸注了含葡萄糖注射液后，都可以使血糖升高，但這種高血糖的HbAlc不一定升高，若為糖尿病患者HbAlc則升高，對兩者簽別診斷和指導治療很有價值，二監測糖尿病患者長期血糖的控制狀況

對于血糖控制狀態較為平穩的患者，每年至少應接受2次HbA1c的檢測。對于血糖控制狀態不穩定的、需要改變治療方案及正在進行胰島素治療的患者，應該每3個月檢測1次。(三)評估糖尿病慢性并發癥的發生與發展HbAlc是監測糖尿病患者血糖控制情況的金標準,是評估糖尿病并發癥風險的有效指標.糖尿病足病、糖尿病性周圍神經炎、眼病、腎病、心臟病以及腦血管病變等是DM最常見的慢性并發癥。也是導致DM死亡的主要原因。DM的早期診斷、生活方式的干預、治療、監控對于延緩并發癥的發生具有重要意義。

8%9%

心力衰竭的幾率Hb死亡的幾率心肌梗死的幾率中風的幾率微血管病變的幾率白內障摘除手術的幾率1%21%14%12%37%19%16%糖化血紅蛋白檢測的標準化實驗室中由于不同的測定原理方法所得到的測定值存在較大差異，為了解決