快速繁殖植物組織培養技術有何意義？當前第1頁\共有30頁\編于星期三\22點

我國用花藥培養法先后培育出優質高產的經濟作物、糧食和蔬菜等新品種，廣泛應用于果樹和花卉的快速繁殖。借助于組織培養生產人工種子，解決某些作物品種繁殖力差、結子困難或發芽率低等問題。當前第2頁\共有30頁\編于星期三\22點

生產藥物、食品添加劑、香料、色素和殺蟲劑等。例如：紫杉醇，生物堿、紫草素等。轉基因植物的培育植物去病毒當前第3頁\共有30頁\編于星期三\22點實驗：菊花的組織培養當前第4頁\共有30頁\編于星期三\22點當前第5頁\共有30頁\編于星期三\22點當前第6頁\共有30頁\編于星期三\22點（用于配置發芽和生根培養基）當前第7頁\共有30頁\編于星期三\22點當前第8頁\共有30頁\編于星期三\22點當前第9頁\共有30頁\編于星期三\22點當前第10頁\共有30頁\編于星期三\22點植物組織培養用的培養基，含有植物生長發育所需要的各種營養物質，這些營養物質同樣為細菌等微小的生物提供了適合的營養。在這種培養基上，細菌等微小的生物比植物細胞具有更強的新陳代謝能力，它們比植物細胞生長、繁殖得更快，而且它們會產生毒素，使培養的植物細胞很快中毒死亡。因此，植物組織培養要想取得成功，必須有效地防止細菌等的污染，保證培養材料、培養基、培養用具完全無菌。為了達到這一要求，就要在植物組織培養過程中進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。當前第11頁\共有30頁\編于星期三\22點實驗材料用具培養瓶、鑷子、超凈臺、滅菌鍋、封口膜和橡皮圈、有棉球的廣口瓶、酒精燈、三角漏斗、培養皿MS培養基萘乙酸、芐基腺嘌呤發芽培養基生根培養基當前第12頁\共有30頁\編于星期三\22點制備MS固體培養基外植體消毒

接種

生芽定植五、實驗過程

移栽鍛煉

生根注意：對培養材料進行表面滅菌時，一方面要考慮藥劑的消毒效果；另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區別對待。當前第13頁\共有30頁\編于星期三\22點（一）制備MS固體培養基1、配制母液

按照MS培養基成分表,分別配制培養基的母液。

(1)大量元素母液(10倍液)

分別稱取10倍用量的各種大量無機鹽，依次溶解于大約800ml熱的（60-80℃）蒸餾水中。（一種成分完全溶解后再加入下一種，最后加水，定容至1000ml后裝入試劑瓶中，冰箱內貯存備用）。(2)微量元素母液(100倍液)(3)鐵鹽母液（100倍液）(4)有機成分母液(100倍數)(5)生長素母液(6)細胞分裂素母液注意:配制培養基時，一定要注意調節pH。當前第14頁\共有30頁\編于星期三\22點MS培養基配制方法返回當前第15頁\共有30頁\編于星期三\22點你能說出各種營養物質的作用嗎？同微生物培養基的配方相比，MS培養基的配方有哪些明顯的不同？問題思考微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持細胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產生的特殊營養需求。

微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養基則需提供大量無機營養，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。當前第16頁\共有30頁\編于星期三\22點

（1）把裝好的培養基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中，蓋好鍋蓋。

（2）設置滅菌溫度參數為121℃，20min，開始滅菌。

2、滅菌無菌技術是植物組織培養能否獲得成功的關鍵．

當前第17頁\共有30頁\編于星期三\22點（二）外植體（離體組織）消毒

注意：對培養材料進行表面滅菌時，一方面要考慮藥劑的消毒效果；另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區別對待。

1、70﹪酒精中浸泡10min，無菌水沖洗2、5%次氯酸鈉溶液中浸泡，無菌水沖洗3、用另一5%次氯酸鈉溶液浸泡5min，無菌水沖洗4、超凈臺中用無菌水多次沖洗當前第18頁\共有30頁\編于星期三\22點（三）切段后接種

1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。2、放入培養瓶和滅菌后的接種用具(鑷子、解剖刀、接種針)，把鑷子、解剖刀、接種針插入內盛70%酒精的廣口瓶中。當前第19頁\共有30頁\編于星期三\22點

3、在酒精燈火焰旁，打開三角瓶，把花莖用無菌解剖刀切成幾段，每段至少有一張葉片

4、切段插入培養基，誘導愈傷組織，蓋上封口膜。

5、愈傷組織插入生芽培養基，蓋上封口膜。6、用記號筆在瓶壁上寫明培養材料、培養基代號、接種日期。注意事項

全部接種操作都是在無菌條件下進行的，所以要特別認真仔細，以防雜菌污染。當前第20頁\共有30頁\編于星期三\22點（四）培養接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養。培養期間應定期消毒，溫度控制在１８～２5℃，并且每日照光１4.5小時。觀察記錄生長情況，并照相存檔。2-3周后將生長健壯的叢狀苗在無菌條件下一個個轉入生根培養基中，在上述條件下繼續培養當前第21頁\共有30頁\編于星期三\22點（五）移栽（六）栽培生根后，將苗移至消毒的草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上濕度，2-3天后打開玻璃罩低濕度鍛煉轉移至土中培養（定植）當前第22頁\共有30頁\編于星期三\22點此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環境為液體有機物營養環境，而不是能體現其整個植物體的光能自養。在培養過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養的能力，是由細胞到一個個體的演變過程。1、高等植物是光能自養型生物，為什么在植物組織培養過程中還需要提供有機物培養基？2、培養過程中為什么需要進行光照?思考？當前第23頁\共有30頁\編于星期三\22點1、培養基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養；5、移栽到消過毒的環境中生存一段時間。3、在整個操作過程中，是如何來實現無菌環境的？當前第24頁\共有30頁\編于星期三\22點結果分析與評價（一）對接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化（三）是否進行了統計、對照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格當前第25頁\共有30頁\編于星期三\22點六、結果分析與評價

（一）對接種操作中污染情況的分析

接種3～4d后，在接種操作中被雜菌污染的培養物會表現出被污染的現象。請學生適時統計污染率，分析接種操作是否符合無菌要求。當前第26頁\共有30頁\編于星期三\22點（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化觀察實驗結果，看看是否培養出了愈傷組織，記錄多長時間長出愈傷組織。統計更換培養基后愈傷組織進一步分化成根和芽的比例和時間。（三）是否進行了統計、對照與記錄做好統計和對照，填好結果記錄表，培養嚴謹的科學態度。從實驗的第一步開始就要求做好實驗記錄，實驗小組配制不同培養基，如誘導愈傷或直接分化叢芽的培養基，然后做不同配方的比較。當前第27頁\共有30頁\編于星期三\22點（四）生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術的關鍵是既要充分清洗根系表面的培養基，又不能傷及根系。一般使用無土栽培的辦法。培養基質要提前消毒，可以向培養基質噴灑質量分數為5%的高錳酸鉀，并用塑料薄膜覆蓋12h。掀開塑料薄膜后24h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天，等壯苗后再定植大田或進行盆栽。學生可以在課后統計自己移栽的成活率，看看移栽是否合格。當前第28頁\共有30頁\編于星期三\22點1、不同植物、不同組織的生根和生芽是否都可以使用與本實驗相同的生長素和細胞分裂素濃度2、本實驗用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為什么？

任何植物物種或品種都不可貿然使用與本實驗相同的生長素和細胞分裂素濃度，必須要套索使用如何合成激素和何種激素濃度才可以。學習者可以參考已有文獻上成熟的經驗，也可以自己探索植物中存在的天然激素有相應的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應使之分解的酶，所以作用和存在時間長，作用效果也更明顯。課后練習當前第29頁\共有30頁\編于星期三\