DiagnosisofGeneticDisease第17章遺傳病的診斷[教學要求]

1．遺傳病的臨床診斷：病史采集；癥狀和體征；系譜分析。2．細胞遺傳學檢查：染色體檢查，FISH技術；性染色質檢查。3．生化檢查：代謝產物分析、酶和蛋白質分析。4．基因診斷：基因診斷的定義和特點；基因診斷的方法：限制性片段長度多態性分析、Southern印跡雜交、聚合酶鏈反應分析（已知點突變的檢測、未知點突變的檢測、基因缺失的檢測、RCR-RFLP）、DNA測序、DNA芯片、熒光原位雜交等的原理、操作和應用。產前診斷(prenataldiagnosis)

植入前診斷(preimplantationdiagnosis)癥狀前診斷(presymptomaticdiagnosis)現癥病人診斷(symptomaticdiagnosis)臨床診斷實驗診斷病史采集癥狀和體征遺傳病系譜分析細胞遺傳學檢查生化檢查基因診斷第一節遺傳病的臨床診斷1

癥狀和體征

2

系譜分析

3病史采集一、病史采集家族史：有無同種病史；

婚姻史：婚齡、婚次、配偶健康情況及是否近親結婚；

生育史：生育年齡、生育子女數目及健康狀況，有無流產、死產和早產史。除應了解一般病史外，還應著重采集與遺傳病家族聚集現象有關的以下項目：二、癥狀和體征遺傳病有和其它疾病相同的癥狀和體征，往往又有其本身特異性癥侯群，為診斷提供初步線索。如：①智力發育不全伴有特殊腐臭尿液苯丙酮尿癥②智力發育不全伴有白內障，肝硬化半乳糖血癥③智力低下伴有眼距寬、眼裂小、外眼角上斜先天愚型二、癥狀和體征白化病

并指

多指軟骨發育不全二、癥狀和體征

除了解現在的癥狀和體征外，還應注意了解身體發育快慢、智力增進情況、性器官及第二性征發育狀態等。皮膚紋理特征的檢查也可作為遺傳病的輔助診斷指標。

三、系譜分析

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1234

1ⅠⅡⅢ記錄遺傳病家族史最好的方法是繪制系譜。系譜分析的意義①有效記錄遺傳病家族史②確定遺傳病遺傳方式③遺傳咨詢中個體患病風險計算④基因定位中連鎖分析系統性、完整性和可靠性不規則顯性、延遲顯性、從性顯性等特殊現象新的基因突變顯性與隱性概念的相對性

注意問題

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123

12312ⅠⅡⅢⅣ

12345ⅠⅡⅢ

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1234042452132

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12341ⅠⅡⅢ同一遺傳病采用的觀察指標不同而得出不同的遺傳方式，如鐮狀細胞貧血和鐮狀細胞癥狀。四、遺傳數據庫資源應用

OMIM(OnlineMendelianInheritanceinMan)

四、遺傳數據庫資源應用

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第二節細胞遺傳學檢查1性染色質檢查

2染色體檢查取材：視檢查對象和目的而有所不同，通常主要取自外周血、皮膚、骨髓、胸、腹水、絨毛、羊水中胎兒脫落細胞和臍血等各種組織。體外細胞培養制片：秋水仙素處理，收獲細胞、低滲、固定、滴片等過程，制備染色體標本。顯帶核型分析一、染色體檢查①不明倦原因擱的智塞力發飼育不期全、劃生長貝遲緩呀者；②先天亞性畸理形（包括廢兩性仿內外宴生殖傻畸形釘）；③性征遺發育戲異常耕及生唉育異鎖常：原發道性閉和經和壤女性尺不孕論癥；無精攏子癥棒和男卵性不展育癥撕；有反幕復多黨次早朵期流肝產史狐的婦螞女及統其丈災夫；④家族唱史：家急族中錘有染設色體受異常跑或先飯天畸劉形的熄個體賠。⑤榆有較柜長時售間、初較大推劑量錯射線偽或致畸壞致突暴變物貸質接端觸者貴；⑥惡性兩腫瘤，尤僵其是鼓惡性脅血液唉病患基者。染色差體檢鋒查（雁核型嬸分析同）指議征二、約性染惰色質徐檢查X染色果質和Y染色后質適應暈癥：周兩性尖畸形舌或性費染色鋸體數危目異津常疾逃病的奮診斷慌，但朽仍需茅染色誓體檢梯查確引認。第三疏節生物態化學士檢查1、代糾謝產掩物分沫析2、酶放和蛋持白質慈分析材料娘主要別來源制于血拜液和揚特定車的組杯織、慮細胞槐，如館肝細巷胞、矮皮膚綱成纖夫維細瀉胞、林腎、估腸粘談膜細湯胞等億。產前療診斷勿中常敲采集橡絨毛買、羊勻水、諒臍帶摘血和燃皮膚糞。新生去兒的半篩查竄最常悔用的抽標本怠是血和尿。苯丙酮尿癥,PKUⅠ

酶活性檢查PAH肝臟血液濾片苯丙氨酸

血FeCl3顯色反應----綠色苯丙酮酸尿液例：19批78年，薄美國攤科學限院院成士美周籍華悉裔科翼學家YW衛K臺an恰(簡悅彩威)和Do霞zy應用駱液相DN臨A分子梁雜交脂成功豈地進倍行了磚鐮狀濃細胞擊貧血汪癥的戒基因鍬診斷洪，標姜志著揪檢驗著診斷共進入拿基因心診斷助時代逃。第四前節基因膜診斷(g嫁en哲e測di侵ag由no蛋si雜s)20第四秒節基因叉診斷(g伯en鍋e庭di集ag調no刪si牢s)基因代診斷爽：利用分子陣生物研學技腥術，從DN毯A/趟RN閣A水平檢測匪分析致病是基因的存在、變異和表達煉狀態從而居對疾扣病作融出診斷的技虜術。一、處基因搶診斷盜定義罵和特育點A、特柏異性評強B、靈交敏度哪高特點C、應耳用范斥圍廣D、早床期診父斷基因越診斷濾概述人類勸基因注組計凱劃——基因圖結構后基后因組魚計劃——基因厚功能基因階診斷在的兩宇個支感點：基因蘿診斷稱的一和般流忍程前提引條件犁：先喂證者胡要有源明確戒的臨糊床診狗斷醫學正遺傳淡咨詢嘆門診相關卷臨床蔽科室醫生內診斷簽署抄基因曾診斷仰知情賄同意轟書抽取滑外周由血2-澆3m緒l基因坦檢測咨詢瓣臨床固醫生對基孕因檢撒測結捕果的繡理解找到爆功能暢性突媽變：演支持少臨床讀診斷未找波到功說能性鞭突變胳：不尊否定貌臨床罰診斷遺傳組病基涉因診慈斷的陽分類臨癥兵診斷——家系忙先證毯者或蘿患者癥狀璃前診宜斷——家系膛高危例個體產前土診斷——家系請高危涼胎兒二、殿基因墳診斷祥基本德方法1．So漁ut閱he哀rn印跡幟雜交2．聚炸合酶途鏈反疤應分紀析3．DN洲A測序5．熒以光原能位雜保交4.迷DN崖A芯片分子擇印跡顆雜交(S展ou爪th詢er院n般bl握ot香ti己ng輪)的基孤本方中法：DN陷A標本也用限制括性內讓切酶終消化→瓊脂花糖凝葵膠電忙泳分縫離各酶滑解片敘段→DN黑A轉印廚至硝酸昏纖維毛素濾巾膜→標記烈探針雜交→顯影→確定麻探針吵互補浙的每悼條DN您A帶的騙位置郊，以節確定籮在眾壩多酶貌解產訊物中慕含某一伶特定固序列刺的DN議A片段末的位灑置和汁大小。1．So藥ut刪he篩rn印跡朗雜交-+2．聚說合酶材鏈反綁應分桃析PC丹R原理俯示意主圖變性喘→退漫火→絡延伸聚合絮酶鏈宗反應京（Po房誠ly嚷me厭ra燒se逗C嘗ha候in早R舒ea果ct遭io暫n，PC迎R）：體外印酶促輩擴增趕特定DN棚A片段忍的技孤術。蛇由高價溫變酒性、蛾低溫剩退火鍵及適樓溫延吼伸等皇反應塘組成粱一個包周期喪，循榴環進錢行，兔使目械的DN爽A得以今迅速轟擴增道。（1）產命物探疑針檢憂測——返AS環O探針等位差特異和性的而寡核吃苷酸(a邊ll悔el滿e-桃sp京ec啞if你icol懼ig掛on雁uc路le貫ot么id案e，AS帥O)探針:當某璃一致悉病基抓因的突變露位點則的性蛙質以及今突變劈燕位點兩側斧的堿煌基序色列都明確的情咽形下嚇，可爆以合狐成AS染O探針。AS滔O探針雅檢測作鐮狀旋細胞世突變喪基因氏的示個意圖正常探針突變探針βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS123已知辰點突仔變（2）產然物構類象變既化檢忠測-S捉SC漲PDN誘A單鏈箭構象峽多態惜性(s抬in報gl糾e熊st煌ra脆nd食c惱on尼fo緞rm除at瀉io痰npo懇ly匪mo升rp留hi列sm盼s,恩SS截CP)：相同逗長度總的單尚鏈DN怎A可因方堿基竄序列勵不同灣產生熔構象仙差異圈，在雹非變合性聚篇丙烯裙酰胺慕凝膠淡電泳需中表既現為片遷移勻率差碼別。提取DN瓦A→PC虹R擴增罰→產臨物變君性→慣電泳根據主單鏈棚條帶示位置稠的改吸變判敲斷該緊個體朵是否恒存在蜘突變重。并不輪是所躬有的部堿基略突變船都會富導致SS休CP，因芽此該前方法神不能劣鑒別自所有暖突變鐵。SS港CP電泳哪檢測收示意識圖未知霜點突戀變基因叼缺失侍時可衛導致生靶DN限A模板漂的缺笑失，佛使用造特異種性引侮物擴姻增時餐得不映到相揀應的波擴增棕產物讀，因矩此可材以直斧接檢擺測缺棕失。（3）PC俊R產物巷有無設檢測正常潑基因異常槽基因E1E2E3E4E5E1E2E4E5L1L2L1目的燃基因引物PC談R產物（電壇泳）L2基因擱缺失泰或點杰突變RF抗LP連鎖樸分析千法（re喜st群ri裙ct跪io希n侮fr緞ag絲式me睜nt翠l恢en隊gt苗h節po定ly羨mo型rp若hi運sm，RF糾LP）由于堿基卡變異可能初導致限制嫌酶切杰點消彩失或馬新的巨酶切紅位點出現詠，引傷起不非同個揉體DN鼓A在用紀同一雪限制避酶切悅割時賭，產士生不同寫長度名的DN閉A片段，稱RF頭LP。（4）產功物酶糖切檢鏡測-R脖FL葉P基因欣缺失誓或點嫩突變RF您LP的主蓋要步老驟:DN潔A→酶切→So寫ut攏he肆rn側印記蒼雜交鋒分析DN籠A→關PC交R皮→酶切→電泳堡分析RF嶺LP主要遙有以厘下兩煌種類擾型：點多晝態性序列咐多態酒性正常肆人（Hb鳳A）和報鐮狀強細胞弊貧血麥患者（Hb打S）β珠蛋柜白基腸因的露結構鏈差異正常介人（Hb吳A）和眨鐮狀晉細胞痰細胞貧血廟患者即（Hb朗S）β珠蛋螞白基揚因Dd趁eⅠ限制幸酶切森點示搞意圖β珠蛋沸白基誘因Dd杏eⅠ限制盆酶切銷片段影電泳突結果例1:鐮狀屋細胞捷貧血

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5‘3’16p13.2-pter人類α珠蛋測白基甘因簇例2a地中豪海貧懲血缺并失基陣因檢芹測L1L2BamH1BamH114kbPC獅R-心RF奏LP檢測朱基因咬缺失碗和插借入的餅示意胞圖10kb14kb18kb案例9-啄2基因斜診斷構分析(P99)地貧霧的基壺因缺阻失的RF枕LP基因躬診斷Ⅰ2正常崖對照ⅠⅡ12110kb14kb18kbaa乖/a鞠aⅠ1Ⅱ1aa/a健-aa/-裝-a-擁/-污-3．DN絹A測序DN桿A測序立即測花定DN貝A的一朋級結彩構中主堿基險的順洗序。包含贈特定葉位點孩的PC歉R產物澡再作DN元A測序慎，比工較正筋常基亮因與溫突變饒的序暴列，跑可檢曾測出移突變胞的堿袖基類暑型和裁位點柿。DN他A自動予測序打儀生耗成的借序列DN愚A自動階測序眉儀采千用4種不營同顏嫂色的園熒光回分別升標記4種雙敞脫氧甚核苷局酸，斗基本捏實現恨了測古序自犯動化待。概念墾：基因共芯片搞技術嘉是DN問A雜交勒探針肚與半波導體窗工業東技術膽相結數合的第產物件。將刷各種探針及固定于支咳持物玻上后棕與帶有速熒光米標記假的DN楚A樣品桿分子司進行雜交，通唐過檢付測每克個探唐針分炸子的雜交衰信號，進子而獲邀取被亮測樣訪品中DN揮A分子馳的數量也和序探列信批息。該媽技術償可用幫于大防規模對篩查域由基熱因突住變引齒起的幅疾病治。4.薪D循NA芯片檢測言原理撒和步騾驟：（1）制作丈芯片另：根線據疾雹病基絕因中童的突喉變位救點區殿域的蠻核苷適酸序忠列，斧合成20個核蠢苷酸趕長的凝探針布，將膛其固冷定于嘩芯片泥上，獻芯片益上可淚固定幫成千蘋上萬傅個探才針。（2）從被攤測對價象的暑細胞鼠中提孫取DN泡A，用酶烘切成歌較小揪的片攀段，雕對DN極A作熒叼光標厘記，劍并熔投解成危單鏈舌。（3）將樣卸品滴隱加到怒芯片度上并刑與芯梯片上蘋的探斗針雜挨交，而凡是格與探池針互熔補的蔑酶切竭片段懇會固貪定于誰特定倉位置畏上，含不能墨互補膀的片色段會植被洗腐脫掉鄰。（4）對芯維片上曬的熒犬光作單掃描優和分骨析。GenescreeningusingaDNAmicroarray.非放柳射性菊原位胞雜交方法用特情殊熒光狠素標兵記DN侍A探針，在笨染色頸體、耳細胞爐和組凳織切妥片標久本上黎進行DN貓A雜交符，檢強測細彎胞內DN身A或RN奪A的特憂定序僻列存跡在與簽否。6．熒搏光原舍位雜車交（FI崇SH）案例19怒-1羅xx，女碧，34歲，裂曾生輕育過仇一個樹智力厭低下核患兒謠，現傭再次腸妊娠裝，因奴懼怕省再生桑同病熔患兒手前來饒咨詢解。其疾患兒展，男俘，6歲，判智力鏟低下脖，IQ值42。染柿色體突核型描分析嶼為46，XY，-1鞏4，+t辰(1鬼4q覽;2太1q圣)。檢罪查患進兒父疼親的泡核型搶正常缺；而牧母親連是平彎衡易棉位攜唉帶者跑，核態型為45，XX位,-震14時,-獨21兆,+值t(慮14慌q;練21