動物疫病監測采樣技術第1頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日動物疫病監測定義：調查動物群體中某種疫病或病原的存在情況。通過監測可以了解動物疫病的流行現狀、危害程度、風險因子和發展趨勢，早期識別疫病的爆發和流行。根據信息來源分為：問卷調查和實驗室監測。實驗室監測的關鍵:樣品和檢測技術。第2頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日實驗室檢測技術病原檢測：病原本身檢測，病原特有蛋白檢測，病原特有核酸檢測，動物試驗抗體檢測：瓊擴，試管凝集，平板凝集，血凝和血凝抑制，中和試驗，各種ELISA等。在檢測技術過關的情況下，監測結果是否具有代表性，是否能夠真實反映出疫病的真實情況都與監測樣品的采集有重要關系。

第3頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日如何做好采樣工作送檢樣品中的問題合格樣品如何得到合格樣品采樣中應注意問題第4頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日一、樣品存在的問題樣品的真實性（假樣品，一個樣品分開）樣品的質量（溶血，腐敗，反復凍融）采樣單填寫的信息不全（畜禽日齡，免疫情況等）組織樣品采集的太大，不專業。每一種類的樣品用一個采樣單。樣品編號不能追溯回去。第5頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日二、樣品的種類血液樣品：血清，全血抗凝血，血漿組織樣品：心肝脾肺腎腦，淋巴結，扁桃體糞便樣品：新鮮，濕潤的生殖道和精液樣品皮膚樣品：皮屑分泌液和滲出液樣品：舌面或蹄部的水泡液第6頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日血液樣品血液：最常用的樣品，可以做血清學試驗的樣品，也可以作為病原學試驗的樣品。全血（抗凝血）：抗凝劑有肝素，阿氏液，枸櫞酸鈉和4%EDTA，或者用玻璃珠，脫纖維蛋白。血清：不加抗凝劑的血液，在室溫靜置2~4h（或37℃1h），待血液完全凝固后，析出上清即為血清。血漿：抗凝血混勻后，靜置，上清即為血漿。第7頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日檢測樣品的分類細菌學檢測樣品：采集發病典型或剛死亡的整體動物送實驗室為最好。無菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。病毒學檢測樣品：病毒檢測應在動物病初、體溫升高期間采集。以組織臟器、血液、糞便等樣品為主。冷藏或冷凍，保存液中加抗生素。血清學檢測樣品：靜脈采血3ml左右，注射器內留一定空間，靜置過程或已凝固的血液應低溫冷凍，以免溶血。短時間內，可在4度左右保存；如時間較長應凍結保存，注意不能反復凍融.病理學檢測樣品：保證樣品新鮮，應選擇病變最典型最明顯的部位，且連同部分健康組織一并采集。浸泡于酒精或福爾馬林溶液中，冷藏保存和運輸。第8頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日幾種重要疫病的采樣時機禽流感、新城疫：發病初期采全血，泄殖腔\咽喉棉拭子；后期采集新鮮糞便；剖剪后的氣管，肺臟，腎臟等口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌物和咽喉棉拭子豬瘟，豬偽狂犬，藍耳病：全血，血清，組織病料：肺臟，脾臟，淋巴結，扁桃體，流產胎衣等，新鮮精液或冷凍精液豬流感：在發熱期采集鼻咽棉拭子和肺組織病料。第9頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日三、高品質樣品的特征樣品標記明確樣品新鮮采樣單填寫規范樣本\樣品數量適當第10頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日四、如何得到高質量的樣品高質量樣品采樣前準備采樣的時效性樣本的數量樣品的標記樣品的保存和運輸第11頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日1、采樣前的準備-器具采樣工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，鑷子，酒精燈，酒精棉，棉簽，保定動物專用工具樣品存放用具：塑料離心管（1.5，2，5ml），自封口樣品袋，試管架，塑料樣品盒，膠布，封口膜，冰袋。防護用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔離衣等。記錄用具：不干膠標簽、圓珠筆、油性記號筆、采樣單、記錄本等第12頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日2、采樣前準備—采樣技術血液樣品：牛、馬、羊從頸靜脈或尾靜脈采血；豬從前腔靜脈采血，用量少時也可從耳靜脈抽取；家禽從翅靜脈抽取。棉拭子樣品：泄殖腔，咽喉，鼻腔水泡皮及水泡液：O/P液：保定，左手拉出舌頭或從嘴的一側按住舌頭，右手緩慢放入探杯。組織樣品：解剖，潔凈取樣。第13頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日血液樣品的分離方法抗凝血：采血前在試管或注射器內按比例加抗凝劑，運輸時必須減少震蕩以免溶血。非抗凝血：分離血清血清析出好的因素：容器：玻璃試管優于塑料離心管；斜面：與空氣接觸面要大。溫度：最佳溫度是體溫；時間：室溫靜置最短2小時；離心：轉速要低，2000轉。膠凍狀血清的成因：采血前剛剛喂食（沒有空腹）；凝血時間不夠；脂肪血（營養過剩）第14頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日糞便、棉拭子和O/P液樣品的采集泄殖腔拭子的采集：將棉拭子插入泄殖腔約1.5~2cm,旋轉后沾上糞便。咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：將滅菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，輕輕擦拭并慢慢旋轉將拭子拔出，將棉拭子放入緩沖液內。O/P液是從動物食道/咽喉刮取的黏膜樣品，用特制的食道探環刮取黏膜，放入樣品保存液中。第15頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日水泡液及水泡皮的采集用75%酒精消毒水泡表皮，用滅菌生理鹽水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的PBS緩沖液中；然后用剪刀將水泡皮剪下，放入含抗生素的PBS緩沖液中。第16頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日3、采樣的準確性和時效性代表性：應該考慮到整個監測區域的地理分布，選取有代表性的點。如動物品種分布、日齡、飼養密度、地勢特點、交通特點、動物遷徙習性等因素。如禽流感采樣時，疫區交接處，野鳥遷徙途徑，水禽家禽混合飼養處等。時效性：如抗體監測，免疫后14天左右才可以采集；監測病原時，注意排毒時間和病原的易嗜細胞和組織，在監測時要根據不同時期，采集不同部位的組織進行檢測。如口蹄疫病毒首先是在咽喉部和肺上皮細胞擴增，然后進入血液，通過分泌物、水泡排毒。第17頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日樣本\樣品的數量樣本：總體中的一部分代表；樣品：檢測的原始材料。概率抽樣（隨機抽樣）：是按照隨機原則進行抽樣，不加主觀因素，組成總體的每個單位都有被抽中的概率（非零概率）比例抽樣：按養殖規模成比例抽樣。多階段抽樣：全市分區，每個區隨機選縣，每個縣選鄉鎮，每個鄉鎮選養殖場。樣本量，符合統計學要求，決定因素：疫病在群體中的發生率，可信水平，檢測方法的敏感性和特異性。樣品的量要足夠檢測使用。第18頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日4.1樣品的包裝和編號單個樣品的包裝動物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有PBS的糞便等液體樣品用用1.5ml，2ml，5ml帶蓋的塑料離心管；組織病料等固體樣品用自封口樣品袋，或放入1.5ml及2ml塑料離心管；每次送樣的同一種樣品進行編號，每個樣品都要有唯一編號，標識清楚，不易丟失。每組樣品的包裝以鎮或每個采樣點為單位分組，每組一個大包裝，用自封口樣品袋包裝，并貼有標簽，注明樣品名、樣品編號、采樣日期等。第19頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日4.2樣品的記錄單個樣品的小塑料離心管外用油性記號筆標記每組樣品自封袋外用鋼筆填寫樣品標簽和封條編號與采樣單一致，具有唯一性和可追溯性。填寫采樣單：被采樣畜主的聯系方式和采樣人的聯系方式；被采樣動物的健康狀況和免疫狀況；被采樣動物的聯系方式（畜種，日齡，標識號等）；樣品運輸方式；日期，簽名（采樣人，畜主）。青島市動物疫病監測采樣單每類樣品要求填寫一份采樣單。第20頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日5、樣品追溯樣品編號和填寫采樣單目的就是對檢測結果的追溯。《動物防疫法》規定動物免疫抗體監測、動物疫病病原監測、動物疫病應急流行病學調查等均實行可追溯制度。追溯內容：家禽來源、飼養周期、防疫情況、免疫程序、疫苗及獸藥的使用情況。抗體監測要求追溯到每棟，每舍。病原學監測必須追溯到每只，每頭。第21頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日6.1樣品的保存血清：4-8℃冷藏，不超過2周；抗凝血：4-8℃冷藏，不超過1周；病毒檢驗材料：短時間可冷藏，否則須-20℃或-70℃以下保存，無條件的可置滅菌50%甘油-PBS液中冷藏，不宜反復凍融。細菌檢驗病料：冷藏，不宜冷凍，可置滅菌的30%甘油-PBS液/鹽水中冷藏。所有凍存樣品忌反復凍融第22頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日6.2樣品的運輸關鍵是：容器（密閉）溫度（低溫）時間（越快越好）容器：密封容器，防止滲漏，造成環境污染或疫情擴散。溫度：樣品應在低溫下保存和運輸（放置冰塊）。拭子樣品和組織樣品應作暫時的冷藏或冷凍處理，然后運送。血清樣品，若24h內運達實驗室，冷藏運輸；若超過24h，要先冷凍后，再冷藏運輸，途中不能超過48h。時間：若能在4h內送到實驗室，可用冰袋冷藏運輸。如果超過4h，應置于-30℃作冷凍處理，再在保溫箱內加冰袋運輸，在24h內送到。若24h不能送到實驗室，則運輸過程中環境溫度應保持在-20℃以下（干冰）。第23頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日樣品運輸保存液

25～50％甘油生理鹽水PH7.2～7.6的肉湯Hanks液、MEM培養基（雙抗）含雙抗的PBS緩沖液第24頁，共26頁，2023年，2月20日，星期日五、采樣時注意事項注意人畜共患病：做好