變應性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法對鼻腔菌群變化的影響

基金：2020年珠海市醫療衛生科技計劃項目ZH2202200053HJL[Summary]目的通過比較治療前后患者鼻腔菌群的情況，探討敏感穴位貼敷療法對變應性鼻炎患者鼻腔菌群的影響。方法選擇2020年9月-2021年7月我院收治的確診為肺脾氣虛型變應性鼻炎患者40例，并按照隨機單盲對照分組，分到治療組和對照組，各20例。有患者均選取大椎、肺俞、脾俞、腎俞（7個）穴位進行穴位貼敷。對照組采用安慰劑貼敷，治療組采用敏感穴位藥物貼敷。兩組患者均每次貼藥1小時（受試者如有不適隨時停止貼藥并記錄），1周貼2次。2次為一個療程，共3個療程，共6次。比較兩組患者鼻腔菌群的變化情況。結果治療前，治療組樣本中操作分類單元(OperationalTaxonomicUnit，OTU)的是數量為（204.14±75.03）；而在對照組組樣本中OTU數量為（203.65±74.28），兩組OTU數量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后，治療組與對照組樣本中共計獲得66213條有效序列，治療組共計獲得條序列、對照組獲得條有效序列，序列的有效長度在410~431bp。治療組樣本中OTU的是數量為（188.46±64.35）；而在對照組組樣本中OTU數量為（147.59±58.86），治療組OTU數量高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。根據OTU物種注釋結果，為了便于后續分析和比較，選取待測樣本中豐度較大Top10的物種進行分析比較。治療組患者與對照組患者相比放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭桿菌門豐度相對增加，而厚壁菌門、藍藻、TM7、嗜熱菌門等豐度與對照組患者相比減少。結論變應性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法可改善患者鼻腔菌群。[Keys]變應性鼻炎；中醫；敏感穴位貼敷療法；鼻腔菌群變應性鼻炎也稱過敏性鼻炎，作為一種常見的變態反應性疾病，其具有復發性和漫長性的特點。臨床研究顯示[1]，鼻腔內的微生態平衡失調，這可能是導致患者出現變應性鼻炎癥狀的重要原因。中醫學認為變應性鼻炎主要是由于機體虛弱，又受到外界風寒，出現主要鼻部不適癥狀為主的疾病。治療上應從肺、脾、腎三臟論治[2]。在長期的實踐中，摸索出來對變應性鼻炎的中醫外治法，具有“廉、便、效、驗”的特點，易于被廣大患者所接受。祖國醫學認為，經絡有溝通內外、聯通上下的作用，臟腑之氣匯聚于腧穴，腧穴通過經絡的連接發揮治療作用[3]。穴位貼敷療法作為傳統的中醫外治法，利用其溫熱的性質，通過對經絡穴位的溫熱刺激而發揮調節臟腑生理的作用[4-5]，對變應性鼻炎的治療效果顯著，且安全可靠。基于此，本次研究通過比較治療前后患者鼻腔菌群的情況，探討敏感穴位貼敷療法對變應性鼻炎患者鼻腔菌群的影響。報道如下。1資料與方法1.1一般資料本研究經我院醫學倫理委員會批準，選擇2020年9月-2021年7月我院收治的確診為肺脾氣虛型變應性鼻炎患者40例，并按照隨機單盲對照分組，分到治療組和對照組，各20例。對照組男12例，女8例；年齡18~65歲，平均年齡（34.19±3.27）歲；病程6個月~5年，平均病程（2.46±0.86）年。治療組男13例，女7例；年齡18~65歲，平均年齡（34.23±33.24）歲；病程7個月~5年，平均病程（2.51±0.84）年。比較兩組患者一般資料，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可對比性。且患者及其家屬均自愿簽署知情同意書。1.2入選標準（1）納入標準：①符合變應性鼻炎中西診斷標準者，中醫辨證為虛證者（肺、脾、腎三臟任一臟虧虛或多臟虧虛者），且符合持續性變應性鼻炎標準；②能夠按要求完成病例觀察表等相關記錄；③能夠充分配合鼻腔分泌物的取樣工作。（2）排除標準：①急性鼻炎(傷風)，血管運動性鼻炎，自主神經性鼻炎，嗜酸性粒細胞增多性非變態反應性鼻炎，變應性鼻竇炎；②膠布過敏史；③局部皮膚病變如燒傷、濕疹、潰瘍、凍瘡破潰者；④孕婦、婦女月經期暫停（經后可補貼，但應注明貼敷日期）；⑤由于智力或行為障礙不能充分配合試驗和調查者；⑥因工作環境經常變動等易造成失訪的患者。1.3方法不允許受試者在觀察期間采用針對變應性鼻炎的藥物療法，但出于倫理學考慮，以及考慮到來院就診患者的心理傾向，研究者將為患者提供統一的藥物，以供患者在癥狀發作時服用。提供藥物：鹽酸左西替利嗪分散片5mgpo/qd。受試者并被要求及時記錄用藥日記，該服藥記錄將作為療效指標之一進行統計分析。所有患者均選取大椎、肺俞、脾俞、腎俞（7個）穴位進行穴位貼敷。1.3.1對照組采用安慰劑貼敷（安慰劑由淀粉構成，并用醬油調色成類似中藥色）。1.3.2治療組采用敏感穴位藥物貼敷（貼敷藥物由白芥子、細辛、延胡索三味組成，并用生姜汁調和）。兩組患者均每次貼藥1小時（受試者如有不適隨時停止貼藥并記錄），1周貼2次。2次為一個療程，共3個療程，共6次。1.3.3鼻腔菌群測定方法一.樣本采集：耳鼻喉科門診醫生嚴格按照技術操作規范，充分消毒雙手，無菌棉拭子置于受檢者的中鼻道，旋轉3周擦取黏膜表面菌群，整個取樣過程避免接觸鼻腔側壁及鼻前庭。采得樣本置于3mL塑料離心管中，離心管內含有1.5mL還原性硫乙醇酸鹽轉運液。轉移樣本于４°C保存不超過24小時，經冰盒轉運至實驗室進行后續操作。二.樣本處理：（一）DNA提取：使用總DNA提取試劑盒按說明提取總DNA，檢測濃度后于-80℃保存。（二）PCR擴増：使用16SrRNAV1-V2區引物進行PCR擴增，引物序列為27F及338R，反應條件為：初始變性溫度為94℃3min，94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸60ｓ，共28個循環，72℃最終延伸7min后于10℃保存。（三）髙通量測序：使用Hiseq第二代高通量測序平臺對PCR產物進行250bpX2雙末端測序，測序完成后進行操作分類單元的生成和注釋，構建微生物多樣性分析，主成分分析及線性判別分析。1.4統計學方法采用SPSS22.0軟件進行數據處理，以表示計量資料，組間用獨立樣本t檢驗，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。2.結果2.1鼻腔菌群多樣性分析治療前，治療組樣本中操作分類單元(OperationalTaxonomicUnit，OTU)的是數量為（204.14±75.03）；而在對照組組樣本中OTU數量為（203.65±74.28），兩組OTU數量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后，治療組與對照組樣本中共計獲得66213條有效序列，治療組共計獲得條序列、對照組獲得條有效序列，序列的有效長度在410~431bp。治療組樣本中OTU的是數量為（188.46±64.35）；而在對照組組樣本中OTU數量為（147.59±58.86），治療組OTU數量高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。表1兩組患者鼻腔菌群多樣性分析對比（±s）組別治療前治療后tP對照組(n=20)203.65±74.28147.59±58.862.6450.012治療組(n=20)204.14±75.03188.46±64.350.7090.482t0.0212.096P0.9830.0432.2鼻腔菌群物種組成分析根據OTU物種注釋結果，為了便于后續分析和比較，選取待測樣本中豐度較大Top10的物種進行分析比較。對照組患者鼻腔中菌群按豐度遞減Top10依次為：厚壁菌門(Firmicutes)(52.50%)、變形菌門(Proteobacteria)(17.86%)、放線菌門(Actinobacteria)(17.45%)、藍藻(Cyanobacteria)(8.7%)、擬桿菌門(Bacteroidetes)(2.70%)、TM7(0.17%)、梭桿菌門(Fusobacteria)(0.15%)、嗜熱菌門(Thermi)(0.11%)、酸桿菌門(Acidobacteria)(0.11%)、疣微菌門(Verrucomicrobia)(0.09%)；治療組患者Top10依次遞減為：厚壁菌門(47.96%)、放線菌門(22.59%)、變形菌門(20.72%)、擬桿菌門(3.86%)、藍藻(2.74%)、梭桿菌門(1.87%)、TM7(0.09%)、嗜熱菌門(0.05%)、綠彎菌門(Chloroflexi)(0.04%)、酸桿菌門(0.04%)。治療組患者與對照組患者相比放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭桿菌門豐度相對增加，而厚壁菌門、藍藻、TM7、嗜熱菌門等豐度與對照組患者相比減少。3討論變應性鼻炎的發病機制目前尚未明確，就現有資料來看，該病是由于多種致病因素共同作用而發病的，明確發病的機制，對于臨床治療起到更好的效果。有研究表明[6]，在疾病的發病中，非變應原性致病因素起著重要的作用，可以誘導發生變態反應。微生物的組成對于維持鼻粘膜正常的免疫應答具有重要作用，鼻腔菌群中某些微生物可能與疾病的發生有關。在正常情況下，平衡的鼻腔微生物共同參與了粘膜屏障功能的維持，當菌群失調時，粘膜對外來變異原敏感性增加而抵抗性下降，促進炎癥的發生。此外某些條件致病菌的代謝產物也可促進包括白介素在內的炎癥因子釋放，進一步加重Th1/Th2免疫失衡。有實驗針對過敏性鼻炎患者菌群定植利用PCR-DGGE法進行對比分析，驗證了菌群定植的差異性，證實了過敏性鼻炎患者鼻腔菌群存在紊亂。因此鼻腔微環境中微生態菌群的失調會導致發病率的升高。祖國醫學認為，經絡有溝通內外、聯通上下的作用，臟腑之氣匯聚于腧穴，腧穴通過經絡的連接發揮治療作用。穴位貼敷療法作為傳統的中醫外治法，利用其溫熱的性質，通過對經絡穴位的溫熱刺激而發揮調節臟腑生理的作用，對變應性鼻炎的治療效果顯著，且安全可靠。穴位貼敷療法使用的藥物，大多數是溫熱活血類。臨床運用敏感穴位貼敷療法對變應性鼻炎的治療有著令人滿意的效果[7-8]，而本研究結果顯示，治療組OTU數量高于對照組，而治療組患者與對照組患者相比放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭桿菌門豐度相對增加，而厚壁菌門、藍藻、TM7、嗜熱菌門等豐度與對照組患者相比減少。提示變應性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法可改善患者鼻腔菌群。穴位貼敷療法具有“廉、便、效、驗”的特點，且鼻腔分泌物的取樣為非創傷性，易于被廣大患者所接受，提高了患者的依存性。但對于敏感穴位貼敷治療變應性鼻炎影響鼻腔菌群的機理尚不明確，未來可進行深入研究。綜上所述，本研究運用敏感穴位貼敷療法對變應性鼻炎的治療有著令人滿意的效果，那個有效改變鼻腔菌群。Reference[1]王巍,邢秀玲,劉偉然,等.益氣養陰方聯合穴位貼敷治療兒童變應性鼻炎氣陰兩虛型臨床療效及相關機制研究[J].河北中醫,2019,41(12):1795-1798+1804.[2]成雅,蔡嘉洛,廖富,等.穴位貼敷治療肺氣虛寒型變應性鼻炎藥物組合與敷貼時長選擇的臨床研究[J].河北中醫,2020,42(9):1305-1308+1405.[3]姜青云.敏感穴位藥物貼敷對變應性鼻炎患者癥狀及外周血T細胞亞群的影響[D].廣州中醫藥大學,2018.[4]壽崟,張必萌,張翠紅,等.鼻三針聯合穴位貼敷治療肺虛感寒型變應性鼻炎的臨床研究[J].上海針灸雜志,2022,41(2)：185-190.[5]王巍,劉偉然,孫映雪,等.益氣養陰方聯合穴位貼敷和中藥香囊治療氣陰兩虛型變應性鼻炎的臨床研究[J].現代中西醫結合雜志,2021,30(30):3334-3338+3343.[6]魏強,李小