生物制品概述全套第1頁/共31頁一、生物制品的定義生物制品：是應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備、用于人類疾病預(yù)防、治療和診斷的藥品。第2頁/共31頁一、生物制品的定義我國人用生物制品包括以下五類：疫苗抗毒素及免疫血清血液制品細(xì)胞因子體內(nèi)及體外診斷制品及其他活性制劑（包括毒素、抗原、變態(tài)反應(yīng)原、單克隆抗體、重組DNA產(chǎn)品、抗原-抗體復(fù)合物、免疫調(diào)節(jié)劑、微生態(tài)制劑等）。

第3頁/共31頁二、生物制品的分類2.1疫苗（Vaccines）細(xì)菌類疫苗（BacterialVaccines）：也稱菌苗，由細(xì)菌、螺旋體或其衍生物制成，如卡介苗、傷寒Vi多糖疫苗、破傷風(fēng)疫苗（類毒素）等。病毒類疫苗（ViralVaccines）：由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制成，如麻疹減毒活疫苗、重組（CHO細(xì)胞）乙型肝炎疫苗等。聯(lián)合疫苗（CombinedVaccines）：由二種或二種以上疫苗抗原配制成的具有多種免疫原性的滅活疫苗或活疫苗，如百日咳、白喉、破傷風(fēng)聯(lián)合疫苗（DTP），麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹聯(lián)合疫苗（MMR）等。第4頁/共31頁二、生物制品的分類2.2抗毒素及免疫血清（AntitoxinandAntisera）由特定抗原免疫動物所得血漿制成的抗毒素或免疫血清，如破傷風(fēng)抗毒素、抗狂犬病血清等，用于治療或被動免疫預(yù)防。第5頁/共31頁二、生物制品的分類2.3血液制品（BloodProducts）

由健康人的血漿或特異免疫人血漿分離、提純或由重組DNA技術(shù)制成的血漿蛋白組分或血細(xì)胞組分制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天然或重組的）、紅細(xì)胞濃縮物等，用于診斷、治療或被動免疫預(yù)防。第6頁/共31頁二、生物制品的分類2.4細(xì)胞因子（Cytokines）由健康人血細(xì)胞增殖、分離、提純或由重組DNA技術(shù)制成的多肽類或蛋白質(zhì)類制劑，如干擾素（IFN）、白細(xì)胞介素（IL）、集落刺激因子（CSF）、紅細(xì)胞生成素（EPO）等，用于治療。

第7頁/共31頁二、生物制品的分類2.5診斷制品（DiagnosticReagents）體外診斷制品：由特定抗原、抗體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的免疫診斷試劑或診斷試劑盒，如傷寒、副傷寒、變形桿菌（OX19、0X2、OXK）診斷菌液，沙門氏菌屬診斷血清，HBsAg酶聯(lián)免疫診斷試劑盒等。體內(nèi)診斷制品：由變態(tài)反應(yīng)原或有關(guān)抗原材料制成的免疫診斷試劑，如卡介菌純蛋白衍生物（BCG-PPD）、布氏菌純蛋白衍生物（RB-PPD）、錫克試驗毒素、單克隆抗體等。第8頁/共31頁二、生物制品的分類2．6其他制品（ElseProducts）

由有關(guān)生物材料或特定方法制成、不屬于上述5類的其他生物制劑，用于治療或預(yù)防疾病。如治療用A型肉毒毒素制劑、微生態(tài)制劑和卡介菌多糖、核酸制劑等。第9頁/共31頁三、生物制品的命名命名原則：參照中國生物制品傳統(tǒng)命名及WHO規(guī)程命名方式，制品的基本名稱一般可由三個部分組成。（制法或群、型別）＋（病名、微生物名、組分、人名或材料）＋（品種名即制品種類）例：重組（酵母）乙型肝炎疫苗第10頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)1、疫苗的種類已有的疫苗概括起來分為活疫苗、滅活疫苗、代謝產(chǎn)物和亞單位疫苗以及生物技術(shù)疫苗，其中生物技術(shù)疫苗又分基因工程亞單位疫苗、合成肽疫苗、抗獨特型疫苗，基因工程活疫苗以及DNA疫苗等。第11頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)（1）活疫苗簡稱活苗，有強(qiáng)毒苗、弱毒苗和異源苗三種。強(qiáng)毒苗是應(yīng)用最早的疫苗種類，使用強(qiáng)毒進(jìn)行免疫有較大的危險，非情況特殊不予使用。弱毒苗是目前使用的最廣泛的疫苗，弱毒苗的毒力已致弱，仍保持原有抗原性，并能在體內(nèi)繁殖，用較少劑量誘導(dǎo)產(chǎn)生堅實的免疫力。有些弱毒苗可刺激產(chǎn)生干擾素，可抵抗其他野毒的感染。弱毒苗有的可能散毒，而且保存期較短，將其制成凍干苗可延長保存期。異源苗是用具有共同保護(hù)性抗原的不同種微生物制備成的疫苗。如用鴿痘病毒預(yù)防雞痘等。第12頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)（2）滅活疫苗：病原微生物經(jīng)理化方法滅活后，仍然保持免疫原性，接種后使動物產(chǎn)生特異性抵抗力，這種疫苗稱為滅活疫苗（死苗）。缺點：死苗接種后不能在動物體內(nèi)繁殖，因此使用接種劑量較大，免疫期較短，需加入適當(dāng)?shù)淖魟┮栽鰪?qiáng)免疫效果延長免疫期。優(yōu)點：研制周期短、使用安全和易于保存。目前所使用的有組織滅活苗、油佐劑滅活苗和氫氧化鋁膠滅活苗等。第13頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)佐劑:

一種物質(zhì)先于抗原或與抗原混合同時注入動物體內(nèi)，能非特異性地改變或增強(qiáng)機(jī)體對該抗原的特異性免疫應(yīng)答，發(fā)揮輔助作用，這類物質(zhì)統(tǒng)稱為佐劑或免疫佐劑。加入佐劑減少抗原用量和接種次數(shù)。第14頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)佐劑的類型不溶性鋁鹽類佐劑應(yīng)用很廣泛，通常使用的主要有氫氧化鋁膠、明礬、磷酸三鈣等。油水乳劑佐劑是用礦物油、乳化劑(如Span-80、Tween-80)及穩(wěn)定劑(硬脂酸鋁)，按一定比例混合作為油相，然后與抗原液混合制成各種類型的油水乳劑。蜂膠佐劑合成佐劑胞壁酰二肽(MDP)及其衍生物等。

第15頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)（3）代謝產(chǎn)物和亞單位疫苗

代謝產(chǎn)物疫苗：如毒素、酶等都可制成疫苗，破傷風(fēng)毒素、白喉毒素、肉毒毒素、致病性大腸桿菌腸毒素，經(jīng)甲醛滅活后制成的類毒素有好的免疫原性，可作為主動免疫制劑。亞單位疫苗：是將病毒的衣殼蛋白與核酸分開、除去核酸用提純的蛋白質(zhì)衣殼制成的疫苗。此類苗保含有病毒的抗原成分，無核酸，因而無不良反應(yīng)，使用安全，效果較好。豬口蹄疫、偽狂犬病、狂犬病等亞單位疫苗已有成功的試驗報道。亞單位疫苗由于制備困難，價格昂貴。第16頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)（4）生物技術(shù)疫苗

利用生物技術(shù)制備的分子水平的疫苗，包括基因工程亞單位疫苗、合成肽疫苗、抗獨特型疫苗、基因工程活疫苗以及DNA疫苗。基因工程亞單位疫苗：用DNA重組技術(shù)，將編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因?qū)耸荏w菌(如大腸桿菌)或細(xì)胞，使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，分泌保護(hù)性抗原肽鏈。提取保護(hù)性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗。第17頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)（4）生物技術(shù)疫苗

DNA疫苗:是一種最新的分子水平的生物技術(shù)疫苗，將編碼保護(hù)性抗原的基因與能在真核細(xì)胞中表達(dá)的載體DNA重組，重組的DNA可直接注射(接種)到動物(如小鼠)體內(nèi)，目的基因可在動物體內(nèi)表達(dá)，刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫。第18頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2、病毒與細(xì)胞培養(yǎng)病毒的培養(yǎng)繁殖只能在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，是以病毒基因為模板，在酶的作用下，分別合成其基因及蛋白質(zhì)，再組裝成完整的病毒顆粒，這種方式稱為復(fù)制。常見的病毒培養(yǎng)方法有：細(xì)胞（包括組織器官）培養(yǎng)法；雞胚培養(yǎng)法；實驗動物培養(yǎng)法。SPF動物或SPF雞胚，仍常用于培養(yǎng)病毒，但病毒細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展最快，重點介紹。第19頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2.1、病毒細(xì)胞培養(yǎng)概念：將適宜組織中的細(xì)胞分散，在培養(yǎng)液中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，再接種病毒，讓病毒在細(xì)胞中繁殖來培養(yǎng)病毒的方法。用途：用于病毒學(xué)研究，分離病毒，病毒克隆純化，病毒病診斷及疫苗制備等。第20頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)類型：原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株細(xì)胞培養(yǎng)的方法：最常用的方法為靜置培養(yǎng)及旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，還可用懸浮培養(yǎng)或微載體培養(yǎng)技術(shù)等。靜置培養(yǎng)：將消化分散的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶(管)或培養(yǎng)板(孔)，生成貼壁的單層細(xì)胞。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：細(xì)胞可在培養(yǎng)瓶(管)的四壁長滿單層，此法的產(chǎn)量高，適用于疫苗生產(chǎn)。微載體培養(yǎng)也用于規(guī)模化細(xì)胞或疫苗生產(chǎn)。第21頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2.2病毒與細(xì)胞相互作用的類型宿主細(xì)胞感染病毒發(fā)生的變化有殺細(xì)胞和非殺細(xì)胞兩種。具體分為細(xì)胞死亡（殺細(xì)胞、細(xì)胞病變、細(xì)胞裂解），生產(chǎn)性（細(xì)胞存活、允許病毒繁殖、分泌釋放），非生產(chǎn)性（細(xì)胞存活、阻斷病毒復(fù)制），轉(zhuǎn)化（病毒基因與細(xì)胞基因整合、可致腫瘤、細(xì)胞形態(tài)變化）。第22頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2.2病毒與細(xì)胞相互作用的類型病毒引致的殺細(xì)胞變化：感染導(dǎo)致的細(xì)胞損傷稱之為細(xì)胞病變(CPE)。CPE可在光學(xué)顯微鏡下觀察，是病毒學(xué)檢測及研究的常規(guī)手段之一。病毒產(chǎn)生CPE的能力與其對動物的致病力正相關(guān)，因此通常用CPE作為指標(biāo)，來判定病毒的毒力，即計算病毒的半數(shù)細(xì)胞感染量(TcID50)。第23頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2.2病毒與細(xì)胞相互作用的類型空斑或蝕斑：將10倍梯度稀釋的病毒樣本接種吸附于單層細(xì)胞，而后在細(xì)胞上覆蓋一層含營養(yǎng)液的瓊脂，以防止游離的病毒通過營養(yǎng)液擴(kuò)散，但病毒可在細(xì)胞間傳遞。經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，進(jìn)行染色，原先感染病毒的細(xì)胞及病毒擴(kuò)散的周圍細(xì)胞會形成一個近似圓形的斑點，類似固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)。第24頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2.2病毒與細(xì)胞相互作用的類型將獲得的單個空斑制作懸液，梯度稀釋后再作空斑，最終可獲得只含一個病毒顆粒及其子代的空斑，這就是病毒克隆。借助空斑技術(shù)不僅可純化病毒，還對病毒定量，定量單位稱為空斑形成單位(PFU)。通過PFU的計數(shù)及PFU減數(shù)試驗，可滴定血清的效價、測定干擾素的活性等。許多動物病毒如皰疹病毒、披膜病、微RNA病毒及水泡性口炎病毒均可通過此法作定量分析。第25頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)2.2病毒與細(xì)胞相互作用的類型病毒引致的非殺細(xì)胞變化：非殺細(xì)胞病毒的感染通常引致持續(xù)感染，對細(xì)胞的新陳代謝并無大礙，但同時還生產(chǎn)并釋放子代病毒顆粒。除少數(shù)例外，大多持續(xù)感染的細(xì)胞發(fā)生慢性漸進(jìn)性變化，最終死亡。第26頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)3、疫苗制備工藝流程例：流行性乙型腦炎病毒死疫苗制備工藝地鼠腎剪碎，胰酶消化地鼠腎細(xì)胞懸液

37℃,3天細(xì)胞培養(yǎng)液，pH7.0～pH7.2

單層細(xì)胞洗滌細(xì)胞，去除牛血清

10-4～10-5濃度病毒感染細(xì)胞

32～34℃培養(yǎng)2～3天收獲病毒液（收二次）按1:2000加入甲醛，22℃，8天滅活病毒液合并，安全及效力試驗（原液）加入亞硫酸氨鈉（半成品）分裝（成品）檢定(包括理化性質(zhì)，無菌試驗、安全試驗，防腐劑、殘余牛血清含量等）合格成品細(xì)胞培養(yǎng)病毒感染病毒滅活第27頁/共31頁四、疫苗及疫苗制備技術(shù)病毒滅活：病毒受理化因素作用后，失去感染性。滅活病毒仍保留某些特性，如抗原性、紅細(xì)胞吸附、細(xì)胞融合等。溫度：病毒耐冷不耐熱。-70oC長期保存