微生物實驗中如何才能減少平板菌落計數的誤差?第1.試驗環境等外部因素的控制2.雙人雙平行3.經驗豐富（不會把不是菌落的渣子當成菌落）其他回答第2.操作方法：以無菌操作取檢樣25g（或25ml）,放于225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內（瓶內預置適當數量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振要或研磨制成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質器中以8000~10000r/min的速度處理1min,制成1：10的均勻稀釋液。用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混合均勻,制成1：100的稀釋液。另取1ml滅菌吸管，按上項操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。2．無菌操作：操作中必須有“無菌操作”的概念，所用玻璃器皿必須是完全滅菌的，不得殘留有細菌或抑菌物質。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝，應用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。操作應當在超凈工作臺或經過消毒處理的無菌室進行。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘，每個平板不得超過15個菌落。3．采樣的代表性：如系固體樣品，取樣時不應集中一點，宜多采幾個部位。固體樣品必須經過均質或研磨，液體樣品須經過振搖，以獲得均勻稀釋液。4．樣品稀釋誤差：為減少樣品稀釋誤差，在連續遞次稀釋時，每一稀釋液應充分振搖，使其均勻，同時每一稀釋度應更換一支吸管。在進行連續稀釋時，應將吸管內液體沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀釋液內，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內。為減少稀釋誤差，SN標準采用取10mL稀釋液，注入90mL緩沖液中。5．稀釋液：樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水，有的采用磷酸鹽緩沖液（或0.1％蛋白胨水），后者對食品已受損傷的細菌細胞有一定的保護作用。如對含鹽量較高的食品（如醬油）進行稀釋，可以采用滅菌蒸餾水。（二）傾注培養1．操作方法：根據標準要求或對污染情況的估計，選擇2~3個適宜稀釋度，分別在制10倍遞增稀釋的同時，以吸取該稀釋度的吸管移取lml稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿。將涼至46°C營養瓊脂培養基注入平皿約15ml，并轉動平皿，混合均勻。同時將營養瓊脂培養基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內作空白對照。待瓊脂凝固后，翻轉平板，置36±1C溫箱內培養48±2h，取出計算平板內菌落數目，乘以稀釋倍數，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數。傾注用培養基應在46C水浴內保溫，溫度過高會影響細菌生長，過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴，應以皮膚感受較熱而不燙為宜。傾注培養基的量規定不一，從12~20ml不等，一般以15ml較為適宜，平板過厚可影響觀察，太薄又易于干裂。傾注時，培基底部如有沉淀物，應將底部棄去，以免與菌落混淆而影響計數觀察。3．為使菌落能在平板上均勻分布，檢液加入平皿后，應盡快傾注培養基并旋轉混勻，可正反兩個方向旋轉，檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min，以防止細菌有所死亡或繁殖。。4.培養溫度一般為37C（水產品的培養溫度，由于其生活環境水溫較低，故多采用30C）。培養時間一般為48h,有些方法只要求24h的培養即可計數。培養箱應保持一定的濕度，瓊脂平板培養48h后，培養基失重不應超過15%。5．為了避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質與細菌菌落發生混淆，不易分辨，可同時作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板，不經培養，而于4°C環境中放置，以便計數時作對照觀察。在某些場合，為了防止食品顆粒與菌落混淆不清，可在營養瓊脂中加入氯化三苯四氮唑（TTC），培養后菌落呈紅色，易于分別。（三）計數和報告1．操作方法：培養到時間后，計數每個平板上的菌落數。可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數，計算處原始樣品中每克（或每ml）中的菌落數，進行報告。到達規定培養時間，應立即計數。如果不能立即計數，應將平板放置于0—4C，但不得超過24h。計數時應選取菌落數在30~300之間的平板（SN標準要求為25~250個菌落），若有二個稀釋度均在30~300之間時，按國家標準方法要求應以二者比值決定，比值小于或等于2取平均數，比值大于2則其較小數字（有的規定不考慮其比值大小，均以平均數報告）。若所有稀釋度均不在計數區間。如均大于300，則取最高稀釋度的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。如均小于30，則以最低稀釋度的平均菌落數乘稀釋倍數報告之。如菌落數有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之間，則應以最接近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。如所有稀釋度均無菌落生長，則應按小于1乘以最低稀釋倍數報告之。有的規定對上述幾種情況計算出的菌落數按估算值報告。不同稀釋度的菌落數應與稀釋倍數成反比（同一稀釋度的二個平板的菌落數應基本接近），即稀釋倍數愈高菌落數愈少，稀釋倍數愈低菌落數愈多。如出現逆反現象，則應視為檢驗中的差錯（有的食品有時可能出現逆反現象，如酸性飲料等），不應作為檢樣計數報告的依據。當平板上有鏈狀菌落生長時，如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限，則應作為一個菌落計，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應按一個菌落計算，不要把鏈上生長的每一個菌

落分開計數。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數乘2代表全平板的菌落數。7．當計數平板內的菌落數過多（即所有稀釋度均大于300時），但分布很均勻，可取平板的一半或1/4計數。再乘以相應稀釋倍數作為該平板的菌落數。8．菌落數的報告，按國家標準方法規定菌落數在1~100時，按實有數字報告，如大于100時，則報告前面兩位有效數字，第三位數按四舍五入計算。固體檢樣以克（g）為單位報告，液體檢樣以毫升（ml）為單位報告，表面涂擦則以平方厘米（cm）報告。1、多做稀釋度，選擇菌落數在30——300之間的計數；2、多做平行，我一般一個稀釋度做三個；3、外部條件要保持一致：如培養基（最好選擇一個廠家出的），溫度，時間等。紙巾細菌總數檢測加入氯化三苯四氮嗤（TTC）方法的探討免費訂閱豈特茬CAJ下載芯）PDF下載 I和.CAJVie㈣下載不支持迅雷等下載工具。免費訂閱暫無此圖片實用預防醫學一PracticalPreventiveMedicine,編輯部郵箱.創肥年肚期[給本刊投稿]【作者】暫無此圖片實用預防醫學一PracticalPreventiveMedicine,編輯部郵箱.創肥年肚期[給本刊投稿][Author]QINYanmin.RAOJian.HUANGHuiying（ShenzhenCentreforDiseasePreventionandControl,Shenzhen.518020China）【機構】幕圳市底病預防控制中心；洙圳市底病預防控制中心中國廣東幕圳&18020；中國廣東幕圳&18020；中國廣東幕圳5T&B20；【摘要】目的探討一種能精確檢測紙巾細菌總數的方法。方法在細菌總數檢測時加入氯化三苯四氮哇（TTC）試割-TTC在細菌脫氫酶的作用下變為紅色。結果細菌菌著著紅色一械檢樣品不著色一使細菌菌著與樣品中的絮狀顆粒艮氣泡明顯區分開來。結論本方法在紙巾細菌總數檢測中操作簡便一結果;隹確一易于推廣?！娟P鍵詞】細菌總頻；氯化三苯四氮（t（TTC）；脫氫.酶；丈章編號；1006-?l10(200引皿-般資■02 L論尋咎】紙巾細菌總數檢測加入

氯化三苯四氮呼(TTC)方法的探討奏彥甌饒健*黃惠英摘要：目的探討一種能精確檢測紙巾細菌總數的方迭a方法在細菌總數檢測時加入氯化三苯四氮哩(TTC)試＜-TT(：作細苗脫：氮酶的作用下變為紅色。結果細菌藺落養紅色*被檢樣卅環著色:使細南閑落」」樣品屮的絮湫顆粒及氣泡明顯區分開來。結論本方袪在紙巾細菌總數檢測中操作簡便，結果準確，易于推廣。衣犍誑：細菌總數；氮化--苯凹氮^(TTCi：脫］1酶中圈分類令r11? 文獄標識咼ARactiriumGjuntonTillieswithTT(^Mdh(xiQfNYan~minfRAOJian,HVANGHur-jwg(SlienzlKHCentreforIUk-easef*rev&iiioHandControl,ShtnzJten,518020Chma)Abstra吐：ObjectiveTofindannethodcfcountingbacteriunontissuesaccurately.MethodsAddTTCintothesamplewhencountingbacteriLm.TTCreactwithbacteriumdehydrogenaseandthecolourofbacteriLmturnsred.ResultBa&teriumturnsredandthesampleremainsitsoriginalgoIolt,sothatbacteriLmareeasytobedistingudiedfromairIxbUesandfloccosegrandeConclusionThsmetlxsdisfeatuedbyeasyoperation,higherprecisionandaccuracy.Ktywords：Bacteriaamount;2,3,5triphenyiterazdoride(TTC)：Dehydrogenase如今，人們如今，人們使用消毒紙rfi的頻率非常之高■因此保證紙巾的質量很重要。紙巾的細菌總數測定一般采用標準平板氐但由于紙巾的原料來源不同，由多種化學合成物質主產而成，有相當部分質量不達標。因此在進行細菌總數的檢測技術時，會有些白色難融的絮狀顆粒及紙粒和細閨菌落非常相彳此同時在傾入培養基時有氣泡產生。以上的兩種情況都容易與細菌菌落混淆，影響細菌菌落計數，直接影響了結果的準確性。為此，我們參照化妝品改良的細菌總數測定袪—TC法檢測紙巾細菌總數。1材料與方袪1.1材料采取在市面銷售的(含灑樓)紙巾樣殆，從中選擇10份含一定量細菌的陽性樣品進行檢測.L2試劑0.5%的氯化［苯四M^(TTC)121T15min滅菌備用,TTC營養瓊月瞬養基稱取也4呂溶11I英偶水1.121ri5miri滅菌備用。果有細繭存在，培斧后在細菌脫氮嗨的件川卜?「「TC便接受氫而變成紅色。這樣使細菌菌落著色，而被檢樣品不著色。所以在營養瓊脂中加入一定量的TTC便培養基上細菌能與樣品川的絮狀顆粒物質及氣泡明顯地區分開來，紙巾細菌總數的測是方法均采用平板法，選擇10份細菌總數超標的陽性樣品，稀釋成每毫升含一定量的細菌試液，分成兩個試驗組。一組向平皿中加入1ml試樣，以及一定量的普通營養瓊脂培養葛另一組每平板加入1ml試樣及已酉改？的各種濃度的TTC營養瓊脂培養基，于算匸培養仙h,進行菌落計數。檢測的樣品應至少重復三次測試，并同時作空白對腮u毎個樣品需柞平行樣，取其細菌平均數，計算結果。同時,觀察幾種不同濃度TTC培養基在平板上細菌生長的著色情況,以便確定TTC的濃度。2結果1-3原理及方法1-3原理及方法氯化三苯四氮瞠（簡稱TTC）貝有良好的穩定性的優點，⑵口5min滅菌，在棕色瓶內可謀存一年以上。TTC作為受氫體加入培養基屮，如作齊口?。荷钲谑蓄D病諛叫忙制二心汕「國廣介:深圳518（12（1.1作者簡介;秦戯皿（1974}-V；-訶詢貝人-木科咋曲拽帳主耍M屮不卩赧艾的TTC對就落數卄無顯著恵義,TTC濃度在o1~0.0001的范圍內抑菌柞用不明顯.從培養基平板上觀察菌落著色情況來看,TTC濃度0*1%顯深紅色,0.01%顯紅色,0.001%顯微紅色KfjO.0001%不若色川i］吋作空白對膽兩個"加TTC峠贈怔餉】Chin.AdonicJcmnialEIcctHHUcPublhhing盃媳陽彩越禺腳痛缶軸齬蝦◎優質回答TTC法TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留呈檢驗標準（GB4689.27—94）的檢測法r屬生物檢測法。其測定原理基于抗生素對微生物的抑制作用。如果牛奶中含有抗生素「則加入菌種（嗜熱刪菌）經培育2一弘3小時后，加入TTC指示割（三苯基四氮哩懷發生還原反應，所以樣品呈無色狀態如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色這樣實驗后樣品顏色不變的為陽性祥品染成紅色的為陰性。TTC法的具體操作步驟：1一菌液制備將單菌種（嗜熱站菌）以脫脂乳為培養基，在翁土代培養箱中培養W小時后再以脫脂乳以至于仃稀釋待用；2取待檢樣液加1_,在