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分發研發部[]市場銷售部部[]]生產管理部]財務部[]目規定新生牛支持細胞增殖檢測試驗操作程序指導操作者按本程序進行新生牛支持細胞增殖檢測試驗的操作適用范職總經理負責本規程的定 標《中民藥典》三部現行材料及設 供試品及參考品/供試,記錄批儀器/超凈臺。參見《超凈工作臺使用與程序》校驗效期內的37℃CO2孵箱1臺(記錄型號,編號)。使用參見《CO2孵箱 1臺(記錄型號,編號1臺(記錄型號,編號玻璃器皿及輔助用具/10ml、1ml試管,2支/已滅菌的操作衣及細胞瓶5個/批待檢使用無菌帽、無菌和橡膠檢查手套。記錄批號75%棉1111196孔細胞培養板,2個/無操作程檢定用具的準備參見《物品準備程序》燈、75%棉、細胞計數器、六孔稀釋板、96孔細胞板及燒杯放入超凈塑料桶、袋放入操作間每次操作前開啟超凈臺,打開紫外燈和風機,60分鐘30用10ml吸管往生長液中加供試,使終濃度為10%。每批供試配150ml培養液。從37℃CO2孵箱中拿出細胞瓶,放入超凈75%棉擦拭瓶頸待細胞沉下后,打開瓶塞,倒掉培養液,再加入加有供試的細胞培養10ml蓋好瓶塞,把細胞瓶重放回37℃CO2孵箱孵育2-3天填寫細胞培養記錄。填寫記錄如此反復操作,使細胞在加有10%供試的細胞培養液中適應傳代三次,從37℃CO2孵箱中拿出細胞培養液,放入超凈臺75%棉擦拭瓶頸10ml10ml10ml1ml10倍梯度稀釋,用細胞計算器1x104/ml。1ml960.2ml737CO2孵箱中培養37℃CO21ml吸管加一滴到細10ml100.1ml用1ml吸管接種到96孔細胞培養板中,每孔0.1ml,每批樣品接種置37℃CO2孵箱中培養一周,填寫記錄一周后把96孔板從37℃CO2孵箱中取出細胞倍增時間測定:取細胞峰值前一天記得的數(Y),接種細胞(X)及生長時間(T)計算。A=log2Y/X,倍增時間 (小時克隆率=細胞生長陽性孔數/接種細胞總孔數x100%細胞最大增殖濃度應≥1x106/ml倍增時間應≤20克隆率應>70%填寫支持細胞增殖檢測記錄。復核人復核并簽字注意事出現結果,應在試驗記錄中如實記附錄及派生記細胞增殖檢測記錄F-SOP-ZL009-相關文440ml《75%棉配制
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