臨床輸血科血庫主要內容ABO血型系統相關知識Rh血型系統相關知識穿插配血相關知識抗體挑選相關知識2021/1/122一、ABO血型系統及其定型

2021/1/123ABO血型的發現1900年奧地利維也納大學Landsteiner首次發現人類紅細胞血型1907年捷克人Jansky按比率的多少而定為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。1910年美國人Moss將發生最少的定為Ⅰ型，發生最多的定為Ⅳ型。2021/1/124ABO血型發現的意義翻開了免疫血液學、免疫遺傳學的大門為臨床輸血鋪平了道路，使它成為一項有效的治療手段。Landsteiner〔1868－1943〕獲得1930年諾貝爾獎金發現了ABO、MN、P、RH等許多血型2021/1/125ABO血型系統的獨特特點A和B抗原的免疫源性強血清中規律性存在抗A和/或抗B抗體分泌型個體的血漿、唾液、組織細胞等處存在A、B、H血型物質2021/1/126ABO血型的主要抗原和抗體2021/1/127ABO血型的遺傳復等位基因共顯性遺傳顯性基因：A、B隱性基因：iA型：AAAiB型:BBBiAB型:ABO型:ii2021/1/128不同婚配類型子女可能的血型A*OAOB*OBOA*BABABOAB*OABA*ABABABB*ABBAABA*AAO2021/1/129HAB物質生物合成ABO基因－特異性糖苷轉移酶－ABO抗原血型前身物質L－巖藻糖N－乙酰氨基葡萄糖胺D－半乳糖2021/1/12102021/1/12112021/1/1212A、B、H血型物質1930年Lehrs發現唾液中有A和B物質1943年Wiener發現分泌型占80％AB物質的量具有較顯著的個體差異血清中的血型物質較弱唾液中的血型物質較容易測到2021/1/1213A型A抗原血型物質：A，HB型B抗原血型物質：B，HAB型A，B抗原血型物質：A，B，HO型H抗原血型物質：HH抗原強弱：O>A2>B>A2B>A1>A1B2021/1/1214ABH抗原決定族

5－6周的胚胎RBC就可檢測出來，但直到出生發育還不完好，新生兒RBC與血型試劑反響比成人弱。2－4歲紅細胞發育完全。新生兒免疫系統發育不成熟，而且受到母親血清的干擾，故新生兒不做反定型。2021/1/1215成人與新生兒抗原數量比較細胞

成人新生兒A1810000－1170000250000－370000A2240000－290000140000B610000－830000200000－3200002021/1/1216抗A、抗B的特性IgM、IgG、IgA抗體IgM抗體可被2-巰基乙醇〔2－Me〕，二硫蘇糖醇〔DTT〕破壞。IgA抗體經2－Me處理血清學活性下降，但抗體不破壞。IgM與IgG抗體立即溶血，IgA不發生溶血穿插反響性抗AB：結合抗體(抗A＋B)，不是簡單的混合，來源于O型人血清。既可與A細胞又可與B細胞凝集。2021/1/1217ABO亞型A1：與抗A抗A1反響〔植物血凝素〕A2：占A型人群1－8％僅與抗A凝集，抗H凝集較強1－2％A2；25％A2B血清中有抗A1抗體。37oC能發生反響的抗A1有臨床意義。A1與A2共同遺傳時，表現型A1掩蓋A22021/1/1218A3和B3與抗－A或抗－AB試劑呈混合外觀視野大約2/3RBC是凝集的，故A3和B3也分別被稱為A60和B60。A3通常無抗A12021/1/1219Ax表現型最早由Fisher和Harn與1935年報道Ax紅細胞與來自B型個體的抗A產生弱凝集與來自O型個體的抗A＋B發生增強的凝集Ax個體唾液中缺少A物質，僅有H物質與抗H的凝集近似于O型，顯示出強凝集Ax常有抗A1某些單克隆抗－A抗體與多數Ax紅細胞發生凝集，已被用來診斷AxBx特性與Ax相似2021/1/1220Am與抗A反響陰性或弱凝集，抗B陰性，抗AB不增強，抗H強凝集血型物質A、H血清中無抗A1產生Ay表型與Am相似，所不同的是遺傳學上的差異Bm特性與Am相似2021/1/1221AendAend紅細胞很像A3細胞，與抗-A、抗AB產生混合視野，抗B陰性，抗H強凝集，血型物質H血清中可以有抗A1產生2021/1/1222AelAel紅細胞不與抗-A、抗AB產生凝集，抗B陰性，抗H強凝集，血型物質H血清中大多數帶有抗-A或者抗-B抗體Bel特性與Ael相似2021/1/1223AintAint紅細胞A抗原強度在A1和A2之間，同時有增強的H抗原。Aint亞型在黑人中要比白人中多。2021/1/1224CisAB順式AB型，AB基因位于同一染色體上，在AB型中占0.018%可能機制：染色體不等交換A或B基因血型糖基轉移酶發生構造突變產生一個異常的具有雙功能活性的酶2021/1/1225CisABCisAB與A1：467位C——T〔Pro－Leu，AA156)803位G——C〔Gly—Ala，AA268)父母：O×A2B兒子：A2BA2B2021/1/1226CisAB本實驗檢測出的一例CisAB血清學表現型抗-A抗-BACBCOC抗-AB抗-HIS4+1+S-4+-4+2+疑心CisAB+A型最后標本送上海血液中心輸血研究室，基因鑒定后，證實是CisAB+A型2021/1/1227獲得性B稀有表現型，發生于A1個體。有些病例為癌癥患者，也有正常個體。分泌型有A、H物質，無B物質。血清中包含抗－B，不與自身細胞凝集類B抗原不與有些單抗B反響分泌型病人測B物質酸化抗B血清到2021/1/1228獲得性BRBC被B類似物包被，如：E.coliO86/ProteusvulgarisOX19感染理論上A1和O細胞都可以轉變，但目前僅有A1個體報道。A決定簇N－乙酰氨基葡萄糖胺被細菌Deacetylase酶轉化半乳糖胺，該糖與B決定簇的半乳糖有穿插反響。2021/1/12292021/1/1230ABO亞型的鑒定試劑、方法抗-A、抗-B抗H抗-ABA1、A2、B、O型紅細胞主要方法：吸收放散試驗2021/1/1231血清學方法的弱點檢出弱A、弱B亞型才能差只能得到表現型，不能明確基因型不進展家系分析，不能確定純合或雜合對某些罕見的稀有血型，不能準確定型受試劑質量影響血液標本保存期短2021/1/1232基因分型的優點

獻血員及疑難標本血型鑒定不需家系調查即可明確基因型：純合/雜合有血型IgG抗體的孕婦，預測胎兒血型有大量輸血史，直抗強陽性的患者定血型法醫學標本定型2021/1/1233血清學方法與DNA技術互相補充血清學方法快速，簡單，易于操作血清學方法本錢低DNA技術不能用于抗體挑選DNA只能預測血型，不能確定表現型2021/1/1234ABO和Rh血型操作規程1、將受血者血標本離心別離血清〔血漿〕，將壓積紅細胞用生理鹽水洗滌一次以上，配成3%-5%的紅細胞懸液。2、取7只試管，在標記為抗-A、抗-B、抗-D3個試管中參加相應試劑各1滴，在標記Ac、Bc、Oc、自身細胞4個試管中參加受檢者血清各2滴，前面3個試管參加受檢者紅細胞懸液1滴，后面4個試管中參加相應的試劑紅細胞〔Ac、Bc、Oc〕和受檢者自身紅細胞各1滴。2021/1/1235造成正反定型不符的主要原因1、冷抗體2、蛋白凝集3、紅細胞亞型4、不規則抗體，未知特異性抗體5、自身抗體6、抗體減弱〔兒童、老人、白血病患者等〕7、造血干細胞移植患者2021/1/1236細胞凝集強度判讀表輕搖使細胞扣繼續振搖2秒結果脫落時凝集情況后凝集情況1、整塊懸起，呈仍然呈一個4+一個凝塊結實的凝塊2、呈一個或數個底液保持清澈3+凝塊，底液清澈3、呈一個或數個底液變渾濁2+凝塊，底液清澈2021/1/12374、呈數個凝塊凝塊進一步變細小1+，底液渾濁肉眼仍可見5、有肉眼可見凝塊肉眼不可見任何凝塊±，底液渾濁6、有明顯游離細胞凝塊數量增多不明顯混合同時出現一個或底液渾濁視野數個凝塊(mf)7、紅細胞扣完全或部分消失，細胞上溶血清液為透明紅色〔H〕2021/1/12388、紅細胞從細胞扣細沙樣-

均勻滑落，及時出現缺口，但無肉眼可見凝塊出現，直至細胞扣完全消失2021/1/12392021/1/1240冷抗體1、反響溫度2、強度3、補體致敏才能解決方法：先離心，37℃孵育15-20分鐘，在水浴箱中直接看結果。2021/1/1241案例一抗-A抗-BAcBcOc自身cIS4+-1+4+1+-37℃20分鐘-4+--受檢者血型為“A〞型，冷抗體的排除主要通過溫度的變化來進展鑒別。2021/1/1242蛋白凝集與真凝集的鑒別和處理1、鑒別：對于反響溫度不敏感，結合鏡檢2、處理方法：加生理鹽水2021/1/1243案例二抗-A抗-BAcBcOc自身cIS-4+4+1+1+-37℃20分鐘4+1+1+-加4-5滴生理鹽水4+---受檢者血型為“B〞型，蛋白凝集是不受溫度影響的，主要通過加生理鹽水搖勻后觀察結果。2021/1/12442021/1/12452021/1/1246蛋白凝集與真凝集的鑒別和處理2021/1/1247同時出現蛋白凝集+冷凝集離心后將試管放入37度水浴箱中，同時將玻片和一試管生理鹽水同時放入水浴箱中，放置15-20分鐘在水浴箱中觀察結果，假如仍有反響，將液體滴在溫浴過的玻片上，參加溫浴過的生理鹽水迅速鏡檢，觀察結果。2021/1/1248二、Rh血型相關知識2021/1/1249

主要內容1、Rh陰性血輸注現狀2、Rh血型相關知識3、Rh抗體的臨床意義2021/1/1250一、Rh陰性血輸注的現狀2021/1/1251

常州地區Rh陰性血使用情況調查表

年份

“A”

“B”

“O”

“AB”袋數（單位數）占血液制品總使用量的比例2014-2016170108

27156605(977.5)0.3%2021/1/1252Rh陰性血使用存在的問題1、醫療機構數量及床位數增加；2、臨床醫生對Rh陰性陽性血的使用還存在誤區；3、冰凍紅細胞的保存劑目前國家沒有批文，使得陰性紅細胞保存存在問題；4、如需陰性患者緊急輸血，從招募、體檢、檢驗、出庫運輸需要很長一段時間，招募這一關尤其重要；2021/1/1253

Rh陰性血供給比較緊張的原因1、患者的不確定性2、供者人群本身就比較少見，紅細胞供給比較緊張，假如遇到需要陰性血小板的就更為緊張。3、對于一些急診患者比方多發傷的患者，需要的陰性血液量比較大。2021/1/1254Rh血型系統發現的歷史1940年蘭德斯坦納和威納將恒河猴的血液注入家兔體內后，得到一種免疫抗體，這種血清中的免疫抗體不僅能凝集恒河猴的紅細胞，且能凝集85%的白種人的紅細胞，從而證明了這些白種人的紅細胞與這種猴子的紅細胞上有共同的抗原，因此便取恒河猴的英文字頭“RH〞作為這種抗原的名稱。D抗原陽性的稱為Rh陽性，反之則為陰性。Rh是一種血型系統，中國99%以上的人為Rh陽性，陰性率大概為0.4%。白種人大概為15%。2021/1/12552021/1/12561941--1945年確定了人體紅細胞上含有Rh系統的五種抗原即D、d、E、e、C、c。根據紅細胞上D抗原的有無,可將人類紅細胞分為Rh陽性和Rh陰性。即紅細胞上缺乏D抗原的人是Rh陰性，紅細胞存在D抗原的人是Rh陽性。至今已發現Rh血型系統的抗原46個，涉及臨床問題的主要有5個抗原，即D、C、c、E、e。2021/1/1257Rh抗原的發育Rh抗原是胎兒早期就充分發育并維持整個一生，臍帶血或新生兒的紅細胞Rh抗原與成人一樣強。Rh血型抗原的抗原性Rh血型抗原的抗原性強度僅次于A及B抗原。2021/1/1258RhD陰性機制RhD基因缺失：無D抗原RhD基因改變：D蛋白失活RhD--CE--D交融基因：無D抗原產生2021/1/12592021/1/1260三、Rh抗體的臨床意義Rh抗體的免疫球蛋白性質：大部分Rh抗體為IgG類，可通過胎盤屏障，進入胎兒體內，引起溶血。Rh抗體的產生途徑：輸血輸血妊娠免疫2021/1/1261受血者血漿中如有Rh抗體，輸入含有相應抗原的血液后將引起嚴重的溶血性輸血反響，甚至可導致受血者死亡。導致受血者死亡。孕婦血漿中如有Rh抗體，妊娠Rh血型不配合胎兒時，其中IgG類的Rh抗體可以通過胎盤進入胎兒體內，破壞胎兒有相應抗原的紅細胞，引起新生兒溶血病。因此Rh抗體具有非常重要的臨床意義。2021/1/1262三、穿插配血相關知識

2021/1/1263配血程序及主要本卷須知1、患者的病史和標本等的檢查、核對及處理2、受血者、獻血者ABO和Rh血型鑒定3、穿插配合試驗2021/1/1264一、患者的病史和標本等的檢查、核對及處理

檢查前應盡可能理解、核對受血者的有關資料，包括受血者姓名、年齡、性別、床號、種族、臨床診斷、輸血史、藥物史、妊娠史，特別是以往輸血反響的記錄，等等。這些資料是非常珍貴的信息，有助于解決可能出現的血清學問題。患者標本一般要求不超過3天的期限，反復輸血的受血者更應注意抽取新的標本做配血試驗。2021/1/1265

二、受血者、獻血者ABO和Rh血型鑒定主要方法1、玻片法〔操作簡單，便于初篩使用〕2、試管法〔比較經典，最可信的方法〕3、微柱凝膠法〔簡單易行，可以自動化〕4、微孔板法〔便于大量標本的血型鑒定，可以自動化〕2021/1/1266血清學試驗試管法患者血型鑒定：正定型：一滴抗-A、抗-B試劑加2%患者洗滌紅細胞一滴。反定型：用A、B、O試劑紅細胞一滴加患者血清兩滴。〔反定型試驗不可忽略〕2021/1/1267穿插配血的作用1、確認受血者和供血者ABO血型的相合性。2、可檢測出受血者血清中不規則抗體，此抗體可能在抗體挑選試驗中，由于挑選試劑紅細胞缺乏相應的抗原而漏檢。2021/1/1268穿插配血試驗是保障臨床輸血平安、及時、有效的重要手段，其方法主要有鹽水法、凝聚胺法或抗人球蛋白法等，使用平安、有效的方法進展穿插配血試驗，分析確定穿插配血不合的原因，并采取相應的處理方法對預防輸血反響發生和解決臨床疑難輸血有重要意義。穿插配血試驗，也稱為配合性試驗。要使患者與獻血員血液間沒有相對應的抗原、抗體存在。2021/1/1269臨床配血的主要方法1、鹽水介質法〔常用〕2、凝聚胺介質法〔常用〕3、抗人球蛋白介質法〔金標準〕4、酶法5、凝膠卡式法〔常用〕6、其它方法鹽水法能檢出IgM抗體，不能檢出IgG抗體凝聚胺法可檢出大多數IgG抗體，但對部分IgM抗體檢測不如鹽水介質法敏感抗球蛋白實驗是檢測有臨床意義的紅細胞血型抗體最敏感的方法2021/1/1270穿插配血試驗操作規程1、取2個試管，主側管中參加受血者的血清2滴，再參加血袋中紅細胞懸液〔經1-3次洗滌后的3-5%紅細胞懸液〕1滴；次側管中參加血袋中血漿2滴，再參加受檢者紅細胞懸液〔經1-3次洗滌后的3-5%紅細胞懸液〕1滴，充分混勻。2、3700轉/別離心15秒判讀結果。3、再按照凝聚胺試驗過程做一遍，判讀結果。4、再按照間接抗球蛋白試驗〔IAT〕過程做一遍，判讀結果。5、結果判斷肉眼可見凝集為陽性；肉眼不可見凝集，初步判斷為陰性。2021/1/1271配血本卷須知1、在配血過程中必須使用可以檢測IgM、IgG抗體的方法。2、假如用試管法進展試驗，則必須加做凝聚胺法、抗人球蛋白法、酶法等當中的至少一種，第一步鹽水法必需要離心判斷結果。3、患者紅細胞、供者紅細胞必須至少用生理鹽水洗滌一遍以上。2021/1/1272配血中出現問題的解決方法1、調查患者的年齡、性別、種族、疾病診斷、用藥史、家族史、輸血史、輸血反響史、妊娠史、生育史等〔非常重要，對于后續的配血給血方案有很重要的意義〕。2、從實驗結果中分析存在可能出現的原因。2021/1/1273配血過程中出現問題分析1、配血主側出現凝集或者溶血現象1、1患者或供者ABO血型定型不準確，或二者的ABO血型不配合。1、2患者體內存在不規則抗體、冷抗體、自身抗體、蛋白異常情況、血清中存在高分子聚合物的血漿擴容劑等；〔絕大多數情況〕。1、3供者紅細胞直抗試驗呈陽性〔概率很低〕。1、4試劑系統被污染。2021/1/12742、配血次側出現凝集或者溶血現象2、1患者紅細胞直抗試驗呈陽性〔絕大多數情況〕；2、2供者血漿中存在不規則抗體、冷抗體、蛋白異常情況等〔概率很低〕；2、3患者與供者的ABO血型不相合。2021/1/1275四、抗體挑選相關知識2021/1/1276抗體挑選的意義1、必須對有輸血史、妊娠史、短期內需要承受屢次輸血者及穿插配血不合者進展抗體挑選試驗。2、抗體挑選的重要性：有利于早期發現和確認具有臨床意義的抗體，并可以在配血前鑒定此不規則抗體，獲得充足的時間來選擇缺少相應抗原的相配合的血液，防止因找不到相合的血液而造成患者病情的延誤。2021/1/1277抗體挑選方法1、試管法2、凝膠卡法3、凝聚胺法4、酶法5、其它方法2021/1/12782021/1/12792021/1/12802021/1/12812021/1/1282抗體挑選試驗抗體挑選試驗〔試管法〕：患者兩滴血清+挑選細胞〔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ〕、三洗的自身細胞各一滴立即離心看結果。結果分析：陽性：IgM型抗體、冷抗體、蛋白凝集、自身抗體等情況。陰性：需要進一步鑒定2021/1/1283鹽水介質中陽性如何處理IgM型抗體：患者血清+譜細胞進展特異性檢查，一般以抗-M、抗-Lea、抗-Leb、抗-P1、早期形成的抗-D、E等抗體。冷抗體、蛋白凝集的處理：把陽性試管及玻片、生理鹽水放入37℃水浴箱中，放置15分鐘以上，離心試管看結果，假如變成陰性，則證明有可能是冷抗體存在；假如仍出現陽性結果，則進展鏡檢，有可能出現蛋白凝集現象，往玻片上滴入經過預溫的生理鹽水3-5滴，經過搖勻，觀察結果，假如凝集散開，則證明可能是異常的蛋白凝集現象。〔在實驗過程中注意控制室溫〕自身抗體：自身紅細胞與自身血清發生反響。2021/1/1284經過上述步驟后仍需要進展IgG抗體篩查：將試管放入37℃水浴箱中，孵育30分鐘以上，用生理鹽水進展三洗，最后一遍扣干上清液，參加多價抗人球蛋白試劑〔間接抗人球蛋白法〕，離心看結果，假如出現陽性結果，則需要進一步進展譜細胞的檢查，確定有無特異性；假如出現陰性結果，則根本排除常規IgG抗體存在的可能性。2021/1/1285案例

抗篩細胞ⅠⅡⅢ