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文檔簡介

實驗(shíyàn)九酪氨酸酶的動力學第一頁，共11頁。1.學會(xuéhuì)測定酶反應速度的基本方法。2.掌握測定米氏常數Km值的原理和方法?！灸康?mùdì)和要求】第二頁，共11頁。【實驗(shíyàn)原理】酪氨酸酶催化(cuīhuà)的反應為：475nm第三頁，共11頁。常用單位時間內、產物的濃度(nóngdù)增加量表示。一、酶活力測定(cèdìng)—酶反應初速度的測定(cèdìng):TimeProductConcentrationv=dC/dtA=εCd:3600M-1cm-1d:1cm確定(quèdìng)酶反應時間！第四頁，共11頁。二、底物(dǐwù)濃度[S]對酶反應速度：一級反應混合級反應零級反應Effectofsubstrateconcentrationontheinitialvelocityofanenzyme-catalyzedreaction.?VmaxKm第五頁，共11頁。Km值測定(cèdìng):雙倒數作圖法第六頁，共11頁。（一）酶反應初速度的測定(cèdìng)：---酶反應時間的確定在比色杯中，按下表依次(yīcì)加入試劑：【實驗(shíyàn)方法】加入酶液后立即混勻，并每隔15秒讀取475nm處的吸光值。L-多巴（mL）1磷酸緩沖液（mL）1.97酪氨酸酶（mL）0.03注：酪氨酸酶5U/l第七頁，共11頁。繪制產物濃度C-Time反應曲線，觀察酶反應初速度，確定(quèdìng)酶反應時間。一般在30~120秒左右。時刻（秒）A時刻（秒）A0135151503016545180601957521090225105240120255各時刻(shíkè)的吸光值記錄在下表：第八頁，共11頁。（二）米式常數(chángshù)的測定：在比色杯中(bēizhōnɡ)，采用已確定的酶反應時間X，分別記錄各管反應開始時A0和X秒鐘后的A1。管號15mML－多巴(ml)磷酸緩沖液（ml）

酪氨酸酶（ml）

10.22.770.0320.32.670.0330.42.570.0340.52.470.0350.62.370.03每管反應(fǎnyìng)體系仍為3ml。第九頁，共11頁。記錄(jìlù)數據于下表：利用雙倒數(dǎoshù)作圖法，橫坐標為1/S，縱坐標為1/v，分別求出Vmax和Km。管號L－多巴濃度（mM）A0A1ΔA（A1-A0）V（mM/min）12345第十頁，共11頁。【思考題】1.

為什么酶活力測

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