10.5其它吸光光度分析法10.5.1目視比色法用眼睛觀察比較溶液顏色深淺，以確定物質的含量。優(yōu)點：簡便，靈敏度高。缺點：準確度差未知樣品標準系列c1c2c3c4c5觀察方向空白pH試紙、糖試紙、蛋白試紙10.5.2示差光度法高濃度示差光度法（測高含量組分）A>0.8√低濃度示差光度法（測低含量組分）A<0.2高濃度示差光度法的原理:用濃度稍低于待測液的標準溶液作參比（c0<cx），調A=0，測量試液的吸光度A相對，求cxAx=εbcxA0=εbc00A△cCx＝C0+△cA相對＝△A=Ax－A0＝εb(cx－c0)＝εb△c

（10－8）思考：

A<0.2時,如何測定例2.用硅鉬藍法測SiO2，以一含SiO20.016mg.mL-1的標準溶液作參比，測定另一含有0.100mg.mL-1SiO2的溶液，得T=14.4%，現有一未知濃度的SiO2試液，在相同條件下，測得T=31.38%，求試液中SiO2含量。解：設試液中SiO2的含量為xmg.mL-1A1=εb(0.100-0.016)=-lgT1=-lg14.4%A2=εb(x-0.016)=-lgT2=-lg31.8%兩式相除：X=0.066mg.mL-110.5.2示差光度法思考：示差法為什么能提高測量結果的準確度?常規(guī)法示差法TxT051050100

落在測量誤差較大的范圍T051050100Tx/TS

落在測量誤差較小的范圍結論：示差法測量的吸光度A落在測量誤差較小的范圍內，因而準確度提高。示差法的測定誤差<0.5%標尺擴大倍數作業(yè):P3388，9,1310.5其它吸光光度分析法10.5.3

雙波長吸光光度法1、基本原理只用一個樣品池光源單色器1單色器2檢測器切光器狹縫吸收池設測量波長λ1和參比波長λ2的光強度相等，則：當λ1和λ2接近時，則：背景吸收Ab1≈Ab2（10－10）∴△A∝c定量分析依據λ1λ22、雙波長吸光光度法的優(yōu)點以試液本身對某波長光的吸收作參比，消除了背景吸收、光散射及兩個吸收池不匹配引起的誤差，提高了測量的選擇性和準確度。3、雙波長吸光光度法的應用渾濁試液中組分的測定(2)單組分的測定(3)兩組分共存時的分別測定10.5其它吸光光度分析法A21XY例：Y

共存時,測定X干擾組分有等吸收λ1和λ2的選擇：是關鍵要求：待測組分的△A足夠大，△λ要盡量小,以提高精密度。

測量波長－λmaxMR等吸收點法消除了y對x的干擾10.5其它吸光光度分析法XY122/A/nmX－苯酚；Y—2，4，6三氯苯酚例：測定苯酚兩個等吸收點：λ2

，λ2/λ2更接近λ1→精密度好測量波長—λ1參比波長—λ210.5其它吸光光度分析法練習：P33915T分別測x、y測x：測量波長λ1，參比波長λ2測y：測量波長λ1/，參比波長λ2/要求：干擾組分必須有吸收峰A0YX…1/………………2/….………………......1……………..210.5其它吸光光度分析法10.5.4

導數光度分析法在雙波長分光光度計上，將不同波長的兩束單色光λ1和λ2同時快速交替掃描，并保持Δλ不變，可獲得一階導數光譜:1、導數分光光度法的原理—吸收曲線的斜率10.5其它吸光光度分析法將A=εbc對λ進行n次求導，得:A和ε與λ有關A的各階導數值∝C待測，且在ε的n階導數值最大時靈敏度最高——導數光譜法定量分析的基礎。10.5其它吸光光度分析法n階導數光譜:an=0bc二階導數d三階導數一階導數…………......……….….....e四階導數特點：（1）吸收曲線上的最大吸收對應于奇數階導數光譜中的零，對應于偶數階導數光譜中的極值（極大或極小）。

（2）隨著n增大，峰形變尖銳，峰數和谷數增加。使分辨率提高，信噪比減小。常用二階導數光譜10.5其它吸光光度分析法2、導數光譜法的優(yōu)點將吸光度看作一個冪函數，有干擾組分時，據吸光度的加和性：

A=C0+C1λ+C2λ2+C3λ3+…+Uλn(1)（C為常數）對λ求導：A′=C1+2C2λ+3C3λ2+…＋U′λn－1

（2）

即一個線性背景干擾被消除了。A〞=2C2+6C3λ+U〞λn-2

（3）

則C0+C1λ項消失了，余類推。

即較高階的導數消除了階次較低的背景干擾。（1）消除背景干擾有渾濁背景時，用一階導數消除干擾。高渾濁樣品，用二階以上導數消除干擾。10.5其它吸光光度分析法(2)提高靈敏度及放大弱吸收峰

經過求導后，微弱吸收帶被顯著地放大。(3)提高選擇性

對相互重疊的吸收峰，求導后各峰的半峰寬減小，相互之間的差別增大，大大提高了選擇性。（4）能確認寬闊吸收帶的λmax

導數階數越高，吸收峰越尖銳，帶寬減小，故能準確的找到λmax。導數光度法能解決干擾物質的吸收光譜重疊、消除膠體和懸浮散射影響及背景吸收，提高了光譜的分辨率。10.5其它吸光光度分析法3、導數光譜法峰值的測量

dA/dλ∝C待測，從導數光譜上測出峰值，即可定量。ptz（1）峰谷法：測量兩相鄰峰與谷之間的距離p,作為峰值進行定量(常用）。

（2）基線法（正切法）：對相鄰兩個極大峰或極小峰作公切線，測量中間極值至切線的距離t。（3）峰零法：極值到基線間的距離Z（適于對稱的導數光譜）。10.5其它吸光光度分析法特別適合于化學性質相似的無機元素的測定、渾濁樣品分析(不受波長范圍的限制)、痕量組分的分析等。4、導數光譜法的應用10.5其它吸光光度分析法10.6吸光光度法的應用10.6.1試樣中微量組分的測定微量鐵的測定鄰二氮菲法總磷的測定在HNO3介質中，與鉬酸銨生成磷鉬藍法蛋白質的測定考馬斯亮藍法氨基酸的測定茚三酮法(紫色化合物)1、單組分測定

A－c曲線法AC………..………CxAx2、多組分的測定AABAB利用吸光度的加和性：解聯(lián)立方程得cA、cB分別由純A、純B在λA和λB處測A后計算求出。10.6吸光光度法的應用10.6.2弱酸和弱堿離解常數的測定HA?H++A-HAAAAHAAA=AHA+AA-AHA和AA-分別為有機弱酸HA在強酸和強堿性時的吸光度，它們此時分別全部以[HA]或[A-]形式存在。pKa=pH+lg

AA--AA-AHAlg

AA--AA-AHA對pH作圖即可求得pKa

配制一系列不同pH,濃度C相同的溶液1、半中和法在HA

處測吸光度pH<pKa-1C≈[HA]pH>pKa+1C≈[A-]pH=pKa[HA]/[A-]=1時測得A2測得A1A′ApHA2A1pKa

b=1cm令HA在高酸度時吸光度為AHA，則cHA≈[HA]2、截距法P335為HA在強堿性時的吸光度，則cHA≈[A-]（10－9）代入上式整理得：先配制一系列總濃度c相同而pH不同的HA溶液，分別用酸度計精確測出pH，再用光度計在酸式HAor堿式A-有最大吸收處的波長處測出各溶液ApH直線截距為pKa10.6吸光光度法的應用10.6.3絡合物組成的測定1、摩爾比法（飽和法）M+nR?MRn1:13:1c(R)/c(M)A1.02.03.0

MR3MR固定cM，從0開始增大cR測A，求絡合比。固定cM+cR＝C（常數），連續(xù)改變cR/cM，測A。2、等摩爾連續(xù)變化法（Job）00.51.0ACM/CMR01.0ACM/C0.33MR2兩曲線外推交于一點，對應cR/cM=n10.6.3絡合物組成的測定3、絡合物穩(wěn)定常數的測定絡合物離解使A<A000.51.0ACM/CA0實測M+R?MR離解度練習：P33914T解：ZrO2++2R?ZrOR2（注：如顯色劑總濃度是2.5×10-5,則c=1.25×10-5）10.6吸光光度法的應用作業(yè)：P3386第10章吸光光度法小結1、了解物質顏色產生的原因及吸收光譜。λ與C無關2、吸光光度法的基本原理－光電效應，檢測透過光的強度掌握朗伯－比爾定律的數學表達式及有關計算A=εbc=-lgT靈敏度：摩爾吸光系數

εL.mol-1.cm-1

；吸光系數aL.g-1.cm-1

；S；與λ有關3、顯色條件的選擇：酸度、濃度、溫度、時間4、掌握光度測量條件的選擇

波長：吸收最大，干擾最小；A=0.2－0.8

；參比溶液5、理解偏離朗伯－比爾定律的原因。當T=36.8%orA=0.434時，濃度測量相對誤差最小6、掌握示差法的原理、計算。理解示差法能提高測量結果準確度的原因。7、理解光度法測定弱酸、弱堿離解常數和絡合物穩(wěn)定常數的原理和方法。8、了解雙波長、導數光度法的原理。第10章吸光光度法小結