ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T36829—2018

甘蔗宿根矮化病菌

實時熒光PCR檢測方法

DetectionofLeifsoniaxylisubsp.xylibyreal-timePCR

2018-09-17發布2019-04-01實施

國家市場監督管理總局發布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

甘蔗宿根矮化病菌

實時熒光PCR檢測方法

GB/T36829—2018

*

中國標準出版社出版發行

北京市朝陽區和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區三里河北街號

16(100045)

網址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

書號

:155066·1-61319

版權專有侵權必究

GB/T36829—2018

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位福建農林大學國家甘蔗工程技術研究中心農業部甘蔗及制品質量監督檢驗測試

:、

中心農業部福建甘蔗生物學與遺傳育種重點實驗室

、。

本標準主要起草人高三基孫生仁王恒波傅華英黃美婷王錦達張慧麗陳如凱

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36829—2018

引言

本文件的發布機構提請注意聲明符合本文件時可能涉及到與甘蔗宿根矮化病菌實時熒光定量

,,

相關的專利的利用

PCR。

本文件的發布機構對于該專利的真實性有效性和范圍無任何立場

、。

該專利持有人已向本文件的發布機構保證他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下

,,

就專利授權許可進行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發布機構備案相關信息可以通過以下

。。

聯系方式獲得

:

專利持有人姓名王恒波

:。

地址福建省福州市倉山區上下店路號

:15。

請注意除上述專利外本文件的某些內容仍可能涉及專利本文件的發布機構不承擔識別這些專

,。

利的責任

。

Ⅱ

GB/T36829—2018

甘蔗宿根矮化病菌

實時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了甘蔗宿根矮化病菌Leifsoniaxylixyli實時熒光檢測方法的儀器與

(subsp.)PCR

設備試劑與材料樣品的采集與前處理檢測以及結果判斷與表述等

、、、。

本標準適用于可能帶有甘蔗宿根矮化病菌的活體寄主植物的快速檢測診斷

、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

十六烷基三甲基溴化銨

CTAB:(CetyltrimethylAmmoniumBromide)

值循環閾值

Ct:(CycleThreshold)

脫氧核糖核酸酶

DNase:(Deoxyribonuclease)

羧基熒光素

FAM:6-(6-Carboxy-Fluorescein)

甘蔗宿根矮化病菌Leifsoniaxylixyli

Lxx:(subsp.)

Part甘蔗宿根矮化病菌基因組上編碼的一種致病性基因

-1:(PathogenicityGene-1)

聚合酶鏈式反應

PCR:(PolymeraseChainReaction)

核糖核酸酶

RNase:(Ribonuclease)

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-(6-Carboxytetramethylrhodamine)

3甘蔗宿根矮化病菌基本信息

甘蔗宿根矮化病菌屬于微桿菌科Microbacteriaceae雷弗松氏細菌屬Leisonia成員拉丁文學名

f,

名稱為Leifsoniaxylixyli縮寫為甘蔗宿根矮化病菌其他信息參見附錄

subsp.,Lxx。A。

4方法原理

根據宿根矮化病菌的致病基因Pat-序列設計一對僅在該病菌Pat基因間保守的特異性引物和

1-1

一條特異性的熒光雙標記探針在實時熒光擴增反應中探針的熒光信號強度

TaqMan。PCR,TaqMan

伴隨著目標序列擴增產物的增加呈正比關系通過收集擴增過程的熒光信號值即可判斷試

PCR,PCR,

樣是否帶有目標序列

。

5儀器與設備

51實時熒光檢測儀激發檢測波長范圍可用染料和

.PCR:/350nm~750nm;SYBRGreenⅠ

探針升降溫速度均一性準確性溫度范圍

Ta