ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T31807—2015

棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofPhymatotrichopsisomnivoraDuarHennebert

(gg)

2015-07-03發布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

GB/T31807—2015

*

中國標準出版社出版發行

北京市朝陽區和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區三里河北街號

16(100045)

網址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

20159

*

書號

:155066·1-49877

版權專有侵權必究

GB/T31807—2015

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位中華人民共和國寧波出入境檢驗檢疫局中華人民共和國珠海出入境檢驗檢疫

:、

局中國檢驗檢疫科學研究院

、。

本標準主要起草人張慧麗張衛東段維軍徐瑛陳先鋒崔俊霞杜洪忠吳品珊

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31807—2015

棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標準規定了棉花根腐病菌的檢疫鑒定方法

。

本標準適用于棉花根腐病寄主植物的植株種子及介質的檢疫鑒定

、。

2儀器設備和主要試劑

21儀器設備

.

顯微鏡解剖鏡天平感量計制冰機純水儀渦旋振蕩器臺式離心

、、(1/100g,1/10000g)、pH、、、、

機高速冷凍離心機低溫冰箱冷藏冷凍冰箱超凈工作臺儀電泳儀水平電泳槽凝膠成像儀

、、、、、PCR、、、、

微量移液器

(2μL、20μL、100μL、200μL、1000μL)。

22主要試劑

.

除另有規定外所有試劑均采用分析純包括無菌雙蒸水次氯酸鈉液氮蛋白酶氯化鎂氫氧

,。、、、K、、

化鈉醋酸銨氯化鉀無水乙醇溴化乙錠三氯甲烷異丙醇異戊醇Taq聚合酶混合

、、、、、、、、DNA、dNTP

物緩沖液瓊脂糖相對分子質量標準物提取緩沖液

、10×PCR、、DNA、CTAB、Tris/EDTA/SDS

硼酸鹽緩沖液緩沖液等分離培養基產孢培養基馬

(TES)、TrisEDTA(TBE)、Tris/EDTA(TE)。、、

鈴薯葡萄糖瓊脂培養基配制方法及步驟見附錄

(PDA)C。

3病菌的鑒定

31癥狀檢查

.

將可疑植株的根部在解剖鏡下鏡檢將帶有菌絲索或菌核的病根挑出種子類樣品從中挑選夾帶

,。,

的植株殘體尤其是根部病殘體介質土借助濕篩挑出其中的菌核參見附錄

,。(B)。

32病原菌的分離培養

.

321病根上菌絲索的分離培養

..

在解剖鏡下將病根上覆蓋的菌絲索挑下用無菌水洗滌菌絲片段洗凈后置于分離培養基上

,,,,

黑暗培養每天觀察待長出菌絲后挑取菌絲尖端轉移到平板上純化

28℃,,,PDA。

322病殘體上病原菌的分離培養

..

在自來水下將病殘體洗凈切取病健交界處組織用次氯酸鈉進行表面消毒無菌水沖洗

,,1%3min,

次滅菌濾紙吸干表面水分后置于分離培養基上黑暗培養每天觀察待長出菌絲后挑取菌

3,,,28℃,,