1、細胞全能性的定義？原因？2、植物組織培養的原理？基本流程？條件？培養基成分？3、脫分化、再分化的實質？俞傷組織的特點？4、植物體細胞雜交技術的原理？去壁的方法？誘導原生質體融合的方法？原生質體融合的實質？原生質體融合完成的標志？植物體細胞雜交技術完成的標志？優勢？5、植物繁殖的新途徑有？列舉微型繁殖、人工種子的優點？如何使作物脫毒？6、作物新品種的培育包括？單倍體育種的流程？優點？7、怎樣培育突變體？8、怎樣進行細胞產物的工廠化生產？動物細胞培養和核移植技術專題2動物細胞工程動物細胞培養動物細胞融合生產單克隆抗體動物細胞核移植動物細胞工程常用技術其中動物細胞培養技術是其他動物細胞工程技術的基礎動物細胞培養1.動物細胞培養概念：從動物機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞,然后,放在適宜的培養基中,讓這些細胞生長和增殖。2、原理：細胞增殖動物組織塊制成細胞懸液傳代培養胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞幼齡動物的器官組織或胚胎用胰蛋白酶等處理貼壁細胞適宜條件，原代培養3、動物細胞培養的過程細胞增殖能力強，分裂旺盛，容易培養使細胞與培養液充分接觸，利于吸收營養，排出代謝廢物加入培養液細胞間的物質主要是蛋白質細胞生長特點：細胞貼壁、接觸抑制強調：動物細胞生長特性（一）：細胞貼壁：在懸液中分散的細胞貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。培養瓶或培養皿壁要求：表面光滑、無毒、易于貼附。接觸抑制：貼壁生長的細胞生長到表面相互接觸后，細胞停止分裂增殖（形成一個單層）。接觸抑制強調：動物細胞生長特性（二）：原代培養：動物組織消化后的初次培養稱為原代培養。傳代培養：貼滿瓶壁的細胞，需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續培養，讓細胞繼續增殖。10-50代，增值緩慢，以至停止，部分細胞的細胞核型可能發生變化；50代以后，少部分細胞克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，即變為癌細胞。強調：原代培養與傳代培養總結：動物細胞培養過程胚胎或幼齡動物的組織、器官制成細胞懸液剪碎，用胰蛋白酶處理10代細胞轉入培養瓶50代細胞傳代培養無限傳代單個細胞加培養液稀釋傳代10代以內，遺傳物質不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長緩慢以至于完全停止，部分細胞核型可能發生變化分瓶傳代培養培養細胞特點：細胞貼壁、接觸抑制50代后，少部分細胞獲得不死性，遺傳物質已經改變，等同于癌細胞。原代培養4、動物細胞培養的條件:1）無菌無毒

的環境：

適宜的溫度：36.5±0.5℃適宜的酸堿度：PH：7.2-7.4液體合成培養基：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。4）氣體環境：2）營養：3）溫度和pH：“95％空氣+5％CO2”的混合氣體培養箱。氧氣是細胞代謝必須的；CO2維持培養液的PH首先對培養液和所有培養用具無菌處理；通常培養液中添加抗生素防止培養過程中污染；此外定期更換培養液以清除代謝產物，防止對培養細胞造成危害。5、動物細胞培養技術的應用（閱讀課本46-47頁）:1）生物制品的生產如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2）基因工程技術中常用的受體細胞3）檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性4）細胞的生理、藥理、病理研究

如用于篩選抗癌藥物

比較項目植物組織培養動物細胞培養原理培養基性質培養基特有成分培養結果細胞的全能性細胞增殖植物組織培養和動物細胞培養的比較固體培養基液體培養基蔗糖植物激素葡萄糖動物血清大量產生細胞或細胞產物獲得新個體或細胞產品1、動物細胞培養能否像植物組織培養那樣最終培養成新個體？不能，動物細胞培養只能使細胞數目增多，不能發育成新的動物個體2、怎樣利用動物的細胞獲得完整的動物個體？動物細胞核移植想一想二、動物體細胞核移植技術

和克隆動物

將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中。使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育為動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。1、動物核移植：克隆：指從一個共同的祖先，通過無性繁殖的方式產生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細胞或個體。克隆包括三個層次

分子水平：如PCR擴增DNA

細胞水平：如動物細胞培養

個體水平：如克隆動物1、動物細胞工程常用的技術手段有哪些？其中哪項技術是其他技術的基礎？2、動物細胞培養的原理、過程？其中制成細胞懸液的目的？3、動物細胞生長的特性？4、原代培養和傳代培養有什么區別？5、動物細胞培養的條件？培養箱中加入5%的二氧化碳的目的是什么？6、動物細胞培養技術的應用？7、動物核移植的概念、原理？◆取供體細胞傳代培養10代以內的細胞.為什么？◆用的是減Ⅱ中期細胞，為什么？◆胚胎移植2、核移植流程供體：優質高產奶牛受體：普通奶牛（卵母細胞的采集與培養）

1.體積大，易操作。2.含有促使細胞核表達全能性的物質和營養條件。10代以內的細胞一般能保持正常的二倍體核型供體細胞（供核）細胞培養體細胞

卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質）去核無核卵母細胞注入細胞融合重組細胞構建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳物質基本相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.生殖方式：無性生殖核移植過程3、你認為用上述體細胞核移植方法生產的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？不是。1）克隆動物的細胞質遺傳物質來自于受體卵母細胞；2）生物的性狀不僅與遺傳物質有關，還受環境影響3.體細胞核移植技術的應用前景1、在畜牧業中可以加速家畜遺傳改良的進程.2、保護瀕危物種.3、醫藥衛生領域生產醫用蛋白質及組織器官的移植.4、了解胚胎發育和衰老過程；追蹤研究疾病的發展過程和治療疾病4、體細胞核移植技術存在的問題

（閱讀課本50頁）成功率低動物幼體產出概率＜10％克隆動物存在著健康問題克隆動物的食品安全性問題存在爭議知識結構

動物細胞培養和核移植技術動物細胞培養動物體細胞核移植技術和克隆動物核移植技術和克隆動物的概念體細胞核移植技術的過程體細胞核移植技術的應用前景體細胞核移植技術存在的問題1、動物細胞工程技術的基礎是A.動物細胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細胞培養D2、用于動物細胞培養的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這