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A80..

中華人民共和國國家標準

GB/T28646—2012

化學品

體外哺乳動物細胞微核試驗方法

Chemicals—Testmethodofmammaliancellmicronucleusinvitro

2012-07-31發布2012-12-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T28646—2012

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準同經濟合作與發展組織化學品測試導則體外哺乳動物細胞微核試

(OECD)No.487(2010)《

驗英文版技術性內容一致

》()。

本標準做了下列結構和編輯性修改

:

將原文中的簡介和初步考慮部分內容作為本標準的引言

———OECD487“”“”“”;

將原文中附錄定義中的部分內容作為本標準中的術語和定義

———OECD487“:”“2”;

增加了范圍一章

———。

本標準由全國危險化學品管理標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標準起草單位中國疾病預防控制中心職業衛生與中毒控制所遼寧省職業病防治院中國化工

:、、

經濟技術發展中心中國檢驗檢疫科學研究院

、。

本標準主要起草人孫金秀曲波林錚李雪飛白羽王曉兵李晞

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28646—2012

引言

本試驗的目的是通過檢測處于間期細胞的胞質中微核形成的頻率評價受試物

(micronuclei,MN),

的遺傳毒性微核可來源于無著絲粒的染色體斷片或在細胞有絲分裂后期不能遷往細胞兩極的整條染

。

色體該試驗用于檢測在細胞暴露受試物期間或暴露后受試物對經歷過分裂的細胞誘發斷裂和非整倍

。

體作用的活性[1-2]本標準規定在制定的操作規范中允許使用和不使用細胞胞漿移動阻斷劑松胞

。———

素兩種方式進行試驗在細胞有絲分裂期前加入可阻斷細胞質分裂

B(cytochalasinB,cytoB)。cytoB,,

使細胞為雙核細胞[3-4]從而可在完成了一次細胞分裂的細胞中進行微核的識別以及微核發生率的選

,

擇性分析如能提供所分析的細胞群發生了有絲分裂的證據時可按不使用進行試驗操作

。,cytoB。

另外使用本方法除了可以鑒定化學物誘發微核外還可應用胞漿移動阻斷劑著絲點免疫標記和

,,、、

著絲粒末端著絲粒探針雜交技術原位免疫熒光雜交技術

/(,fluorescenceinsituhybridisation,FISH),

提供染色體損傷和微核形成機制的信息[5-16]在觀察到微核形成增加并希望確定這種增加是斷裂作

。,

用還是誘發非整倍體作用可應用標記和雜交的技術進行操作

,。

微核損傷是可以傳遞到子細胞的而分裂中期細胞出現的染色體畸變是不能傳遞到下一代細胞

,;

由于所檢測到的間期細胞微核是比較客觀的因此試驗人員只需要測定細胞是否經過了分裂以及含微

,,

核的細胞有多少所以標本的制備分析記錄相對比較迅速而且也能實現自動化分析這使原來只能

。,、,;

對每個處理組計數分析數百個細胞增加到數千個細胞從而增加了試驗方法的檢測效力最后如果微

,。,

核來源于滯后的整條染色體本方法可對使用傳統的染色體畸變分析存在困難的誘發非

,(OECD473)

整倍體作用的化學物進行檢測分析[17]但是如果不使用等特異性技術體外微核試驗是不能

。,FISH,

鑒別化學物是誘發多倍體劑還是斷裂劑

。

體外微核試驗是在試管內體外條件下使用培養的人體或嚙齒類細胞進行的試驗由于本試驗同時

。

能檢測到非整倍體劑作用和斷裂劑作用因此可為探討體外條件下染色體的潛在損傷作用提供綜合

,

基礎

。

體外試驗通常需要使用外源性代謝活化系統外源性代謝活化系統不能完全模擬體內代謝條件

。。

應注意避免存在影響化學物固有的致突變活性的因素如值或滲透壓的明顯改變或者是在高濃

,pH、、

度下引起嚴重細胞毒性的條件進行試驗以免發生假陽性結果

,。

為了分析誘發微核作用最關鍵的是處理組和對照組培養物的細胞核必需已經經歷過或完成了核

,

分裂計數微核最有利的時期是受試物處理期間或處理后細胞已經完成一個有絲分裂的階段

。。

體外微核試驗應用多種細胞類型進行試驗都是非常有效的無論是在用或不用處理的情況

,cytoB

下如已經有大量的研究資料表明體外微核試驗應用各種嚙齒類細胞株和

;(CHO、V79、CHL/IU

和人體淋巴細胞都被確認是非常有效的[8,19-31]其中包括特別是由遺傳毒性技術科學委員會

L5178Y)。,

主持的國際有效性合作研究[8,19-22]和國際遺傳毒

(SociétéFran?aisedeToxicologieGénétique,SFTG)

性試驗工作組的報告

。

已有歐盟替代方法有效性[4,16]的歐洲中心

(EuropeanCentrefortheValidationofAlternative

一項權重證據回顧性的有效性研究所作的再評價的資料[2,33-34]并且該組織的專家

Methods,ECVAM),

顧問委員會認為體外微核試驗是科學有效的已經

(ECVAMScientificAdvisoryCommittee,ESAC)。

有使用類成淋巴細胞系[5]細胞株[36-37]和敘利亞地鼠胚胎細胞的報告[38]盡管這些細胞

TK6、HepG2,

尚未進行有效性研究

。

Ⅱ

GB/T28646—2012

化學品

體外哺乳動物細胞微核試驗方法

1范圍

本標準規定了化學品體外哺乳動物細胞微核試驗方法的術語和定義試驗原理試驗方法試驗數

、、、

據和報告

。

本標準適用于化學品體外哺乳動物細胞微核試驗

。

2術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

21

.

非整倍體誘導劑aneugen

()

通過與細胞有絲分裂和減數分裂周期相關的成分相互作用引起細胞或生物體非整倍染色體形成

,

的任何物質非整倍體誘導劑或過程

()。

22

.

非整倍體aneuploidy

染色體數與正常二倍體或單倍體染色體數不同其數目或是單條或多條的染色體的增多或減少

(),,

而不是整套染色體的偏移整套染色體的改變為多倍體

,。

23

.

細胞凋亡apoptosis

是細胞的程序化死亡其特點是細胞經一系列連續的崩解步驟變成被膜包圍的微粒然后被吞噬細

,,

胞吞噬或蛻落排除

。

24

.

細胞增殖cellproliferation

作為細胞有絲分裂的結果細胞的