1.高效液相色譜分析方法的建立2.高效液相色譜儀常見問題及處理方法3.制備型高效液相色譜技術4.高效液相色譜-質譜聯用技術（HPLC-MS）1高效液相色譜儀常見問題

及處理方法2吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器手動/自動進樣器檢測器泵系統3材料：不銹鋼燒結，孔徑10μm故障：堵塞表現：管路中不斷有氣泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗注意點：吸濾頭拆下時不得將塑料管剪斷一、吸濾頭4二、高壓泵5單向閥結構吸液沖程排液沖程出口單向閥進口單向閥泵頭拋光面透明塑料墊片寶石球流動相單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進口單向閥泵頭1.單向閥6故障1：寶石球粘附于墊片表現：泵無法吸液或排液，流路不通，柱壓低或沒有。措施：1）用針筒抽單向閥的出口以產生負壓，使寶石球與墊片分開2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗故障2：寶石球或塑料墊片受污導致密封不好。表現：系統壓力波動大措施：拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗。常見故障：7故障：密封圈磨損而導致密封不良現象：系統壓力波動大或漏夜措施：更換密封圈注意點：更換密封圈拆卸泵頭前，柱塞桿復位（P－SET）2.柱塞密封圈流動相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈8三、手動進樣閥91.構造及使用原理10故障1：轉子密封損壞現象：漏液原因：

a擰的太緊b樣品太臟（過濾不充分）c針頭損壞或未使用液相色譜專用注射器解決措施：更換轉子密封，并在使用時注意保養。故障2：載樣困難原因：定量環堵塞解決措施：清洗或更換定量環2.常見故障11樣品過濾：12故障：系統壓力過高、峰型變差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留時間改變等。解決措施：清洗、填補、更換正相柱清洗溶劑：

正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等反相柱清洗溶劑：：

甲醇、乙腈、氯仿、異丙醇、0.05mol/L稀硫酸注意：應排除操作不當引起的假象。四、色譜柱13色譜柱的維護1.在使用新柱之前，最好用強洗脫溶劑在低流量下(0.2-0.3ml/min)沖洗30min，長時間未用的分析柱也要同樣處理。2.定期使用強洗脫溶劑沖洗柱子。3.使用緩沖鹽作為流動相后，要先用水（含有少量甲醇5~10%）沖洗，再用有機溶劑（甲醇）沖洗。4.凈化樣品。5.分離條件優化（防止鬼峰出現）。6.不使用時，兩頭要蓋上蓋子，避免固定相干枯。7.使用預柱。8.避免流動相組成及極性的劇烈變化（梯度洗脫）9、避免壓力脈沖的劇烈變化14肩峰或分叉峰產生的原因：1.柱子劣化（柱頭處產生不均勻的空隙）2.樣品變化（生成氧化物、分解物等）判斷標準：

所有的峰都產生有肩峰或分叉時則為柱子劣化。延長柱壽命方法：（更新）

1、倒（反）沖柱2、換過濾片3、修補柱頭

15柱的補修填料的取出16恢復實例171.更換氘燈（紫外檢測器）

判斷氘燈能量：設定220nm波長，檢查參比池能量，如能量低于800，需更換氘燈。（詳細參照說明書）操作注意點：

不要用手直接接觸氘燈表面五、檢測器2.清潔樣品池表現：樣品池和參比池能量相差較大；檢查方法：不同的儀器有具體的檢查方法；措施：用針筒注入異丙醇，清洗樣品池；如污染嚴重，拆開樣品池，將透鏡等放入異丙醇中超聲波清洗。181.溶劑的過濾濾膜類型：

聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶劑。

尼龍66濾膜：

適用于絕大多數有機溶劑和水溶液，可以用于強酸，不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，適用于水溶性樣品和有機溶劑。六、其他問題191）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積；2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形；3）氣泡過多可使泵壓力不穩甚至停止工作；4）檢測器中的氣泡產生基線波動，①示差折光檢測器——使折射率變化②UV檢測器（200nm以下）——溶解氧氣有吸收③熒光檢測器——溶解氧氣有熒光猝滅作用2.脫氣：除去流動相中溶解或因混合而產生的氣泡。氣泡對測定的影響：脫氣的方法1.超聲波脫氣法2.使用氟樹脂膜的減壓脫氣法20氟樹脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流動相使用氟樹脂膜的減壓脫氣法213.緩沖液選擇緩沖液的步驟1、確定最佳分離狀態時的流動相pH；2、選擇具有與流動相的pH相近的pKa的緩沖液（即使濃度稀也具有較強的緩沖能力）；3、確認檢測波長下緩沖液是否有較大的吸