ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T18636—2017

代替

GB/T18636—2002

藍舌病診斷技術

Diagnostictechniquesforbluetongue

2017-11-01發布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T18636—2017

目次

前言

…………………………Ⅲ

范圍

1………………………1

規范性引用文件

2…………………………1

臨床診斷

3…………………1

流行病學

3.1……………1

臨床癥狀

3.2……………1

病理變化

3.3……………2

結果判定

3.4……………2

病毒分離

4…………………2

器材

4.1…………………2

試劑

4.2…………………2

試驗程序

4.3……………2

病毒鑒定

4.4……………4

結果判定

4.5……………4

免疫酶染色

5………………4

器材

5.1…………………4

試劑

5.2…………………4

試驗程序

5.3……………4

試驗成立條件

5.4………………………5

結果判定

5.5……………5

抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗

6(AC-ELISA)……………5

器材

6.1…………………5

試劑

6.2…………………5

樣品

6.3…………………5

試驗設計

6.4……………5

試驗程序

6.5……………5

試驗成立的條件

6.6……………………6

結果判定

6.7……………6

定型微量中和試驗

7………………………6

器材

7.1…………………6

試劑

7.2…………………6

試驗準備

7.3……………7

篩檢試驗程序

7.4………………………7

試驗成立的條件

7.5……………………8

結果判定

7.6……………8

蝕斑及蝕斑抑制定型試驗

8………………8

器材

8.1…………………8

Ⅰ

GB/T18636—2017

試劑

8.2…………………9

蝕斑試驗程序

8.3………………………9

蝕斑抑制試驗程序

8.4…………………9

結果判定

8.5……………9

反轉錄聚合酶鏈式反應

9(RT-PCR)……………………9

器材

9.1…………………9

試劑

9.2…………………10

試驗程序

9.3……………10

試驗成立的條件

9.4……………………11

結果判定

9.5……………11

熒光檢測

10RT-PCR……………………11

器材

10.1………………11

試劑

10.2………………11

試驗程序

10.3…………………………12

閾值設定

10.4…………………………13

試驗成立的條件

10.5…………………13

結果判定

10.6…………………………13

瓊脂免疫擴散試驗

11(AGID)…………13

器材

11.1………………13

試劑

11.2………………13

試驗程序

11.3…………………………14

結果判定

11.4…………………………14

競爭酶聯免疫吸附試驗

12(C-ELISA)…………………15

器材

12.1………………15

試劑

12.2………………15

試驗程序

12.3…………………………15

讀數和抑制率計算

12.4………………16

試驗成立的條件

12.5…………………16

結果判定

12.6…………………………16

診斷結果判定

13…………………………16

疑似病例

13.1…………………………16

確診病例

13.2…………………………16

隱性感染

13.3…………………………16

附錄規范性附錄細胞培養液的制備

A()………………17

附錄規范性附錄免疫酶染色試驗用溶液的配制

B()…………………18

附錄規范性附錄酶聯免疫試驗和定型微量中和試驗用溶液的配制

C()……………19

附錄資料性附錄方法

D()Karber……………………21

附錄規范性附錄蝕斑及蝕斑抑制定型試驗

E()………22

附錄規范性附錄試驗用溶液和引物的配制

F()RT-PCR……………23

附錄規范性附錄熒光引物和探針的合成與配制

G()RT-PCR……24

附錄規范性附錄瓊脂平板的制備

H()…………………25

Ⅱ

GB/T18636—2017

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準代替藍舌病診斷技術與相比除編輯性修改外

GB/T18636—2002《》,GB/T18636—2002,,

主要技術變化如下

:

增加了臨床診斷

———;

增加了反轉錄聚合酶鏈式反應檢測方法

———(RT-PCR);

增加了熒光檢測方法

———RT-PCR。

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國動物衛生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位云南省畜牧獸醫科學院中華人民共和國深圳出入境檢驗檢驗局

:、。

本標準主要起草人李華春朱建波花群義肖雷宋建領李樂高林苗海生

:、、、、、、、。

本標準歷次版本發布情況為

:

———GB/T18636—2002。

Ⅲ

GB/T18636—2017

藍舌病診斷技術

1范圍

本標準規定了藍舌病診斷的技術方法和試驗程序

(Bluetongue,BT)。

本標準適用于反芻動物藍舌病的診斷流行病學調查及檢疫所述方法包括臨床診斷病原分離和

、。、

鑒定病原核酸檢測以及血清學檢測其中

、,:

病毒分離適用于從動物的血液臟器和精液中分離藍舌病病毒

———、(BluetongueVirus,BTV);

免疫酶染色和抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗

———(AntigenCaptureEnzyme-LinkedImmunosorbent

適用于對分離到的病毒進行血清群的鑒定

Assay,AC-ELISA);

定型微量中和試驗和蝕斑及蝕斑抑制定型試驗適用于對分離到的進行血清型的鑒定

———BTV;

反轉錄聚合酶鏈式反應和熒光

———(Reverse-TranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)

檢測適用于動物的血液臟器和精液中核酸的檢測也適用于對分離到的病毒

RT-PCR、BTV,

進行血清群鑒定

;

瓊脂免疫擴散試驗和競爭酶聯免疫吸附試驗

———(AgarGelImmunodiffusion,AGID)

適用于血清樣品中抗

(CompetitionEnzyme-LinkedImmunosorbentAssay,C-ELISA)BTV

體的檢測

。

2規范性引用文件

下列文件中對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()