第七章定量基礎

BBBBB=基線BVBV=峰谷點B

PBP=基線滲透BHHH=水平基線(基線漂移）各種積分事件校正（定量） 校正即是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應組分的濃度或含量 當檢測器靈敏度針對不同的組分而變化；及檢測器對同一組分不同含量響應值發(fā)生變化時須做校正校正方法*面積百分比法AREA%

*峰高百分比法HEIGHT%

歸一化法NORM%

外標法ESTD

內標法ISTD*不是校正方法面積百分比法AREA% AREA(pk)AREA%= x100%AREA(pk) 假定檢測器響應都相同所有組分都流出所有組分都被檢測到優(yōu)點

缺點無需做校正 以上所有的假定簡單、快速的定量過程 需測量所有的組分進樣量不要求嚴格 所有的面積都必須準確校正因子絕對響應時間RF=含量/面積校正檢測器響應與組分的含量及其它組分的存在無關含量 100 100200面積 3000 2500 4000歸一化法(NORM) RF(pk)xAREA(pk) NORM%= x100%[RF(pk)xAREA(pk)] 假定所有組分都流出所有組分都被檢測到優(yōu)點

缺點簡單、快速的定量過程 所有組分峰都要流出進樣量不要求嚴格 需測量所有的組分 必須校正所有的峰

外標法（ESTD） 含量＝面積(pk)xRF(pk) 優(yōu)點 校正檢測器的響應 只對欲分析的組分峰做校正 無需所有峰都能被檢測到 缺點 進樣量必須準確 儀器必須有良好的穩(wěn)定性 需定期做再校正外標法校正過程首先準備一個混合標樣，其中感興趣組分的濃度須準確知道運行標準樣品建立校正表運行待測樣品并使用校正表分析它需要時進行再校正單級校正對每一峰只做一次校正單級校正中做了如下假設： 響應因子不會因為某峰對應物質的含量 變化而發(fā)生變化 響應曲線須通過原點含量響應值(A或H)含量響應值

A或HA(istd)或H(istd)多級校正對每一峰需做至少兩次校正可以補償檢測器對不同含量的樣品組分而給出 非線性響應。響應曲線可以不通過原點定量分析多級校正過程首先準備一個混合標樣，其濃度應高于欲分析物 的濃度將濃標樣等梯度稀釋，其中最低濃度低于待測物的濃度運行每一級稀釋好的標樣在每一級上進行校正運行待測樣品并使用校正表分析它需要時進行再校正線性擬合（最小二乘法）含量響應值(A或H)點到點校正曲線含量響應值(A或H)非線性擬合含量響應值(A或H)含量響應值(A或H)含量響應值(A或H)含量響應值(A或H)內標法（ISTD）

RF(pk)面積(pk)含量＝

RF(ISTD)面積(ISTD)優(yōu)點進樣量不嚴格要求.內標的加入消除了由于進樣量、儀器不穩(wěn)定等因素帶來的系統(tǒng)誤差。只對欲分析的組分峰做校正缺點必須加一個組分進到樣品，易增加面積測量誤差。*內標含量=*內標含量面積(pk)面積(ISTD)RF’選擇內標物的標準樣品中不存在化學性質與樣品相似與樣品有相同的濃度范圍不會與樣品發(fā)生反應在感興趣組分附近流出*可得到分離良好的、干凈利落的峰色譜性質穩(wěn)定可迅速容易得到定量方法總結 優(yōu)點 缺點AREA% 無需校正 檢測器的響應必須一致 進樣量不嚴格要求 所有組分峰都須流出 所有組分峰都須被檢測到 所有面積都須準確NORM% 進樣量不嚴格要求 所有組分峰都須流出 所有組分峰都須測定 必須校正所有的峰ESTD 校正檢測器的響應 進樣量必須準確 只對感興趣峰做校正 儀器需有很好穩(wěn)定性 無需所有峰都流出 無需所有峰都被檢測到

ISTD 進樣量不嚴格要求 必須在所有樣品中加入 只對感興趣峰做校正 一個組分 校正檢測器的響應 樣品和標樣的準備工作 更加復雜本章將學到:如何設置并調試定量數據如何編輯定量結果如何產生定量報告定量數據分析步驟3:查找限定離子步驟2:保留時間窗口內查找目標離子步驟1:在信號窗口內查找峰積分化學工作站定量概念分析標準物分析未知物建立標準曲線由曲線計算含量ResponseAmountStd1UnknownUnknownamtUnknownresponseStd2定量過程連同校正表下載方法文件.下載第一個標準數據文件選擇

Calibrate/SetUpQuantitation.設置定量數據資料選擇Calibrate/SetUpQuantitation...定量數據資料表參考峰窗口：用于內標非參考縫窗口：用于其它化合物相關窗口：允許目標離子與限定離子的保留時間之差默認值+/-：峰起點與終點須在此范圍內濃度單位內標濃度是否用RTE積分單擊"InsertAbove"輸入化合物輸入化合物(續(xù))內標指令用于:增加新級別級別再校正刪除級別更新校正表10。00010。000再校正分別選擇對濃度和保留時間是否再校正分別對濃度和保留時選擇再校正的方式（取代或平均）選擇再校正的級別選擇Recalibrate化合物信息-第1頁化合物信息-第2頁化合物信息-第3頁校正曲線校正曲線自動定量數據庫定量報告選項“MultiView”窗口結果演示交叉定量1.選擇Method/EditMethod...2.選定"QuantReport"3.選定報告格式和目的地4.保存方法!!自動生成定量報告使用Qedit手動再積分當前數據聲明顯示在所有報告中!修改數據狀態(tài)使用下列工具:TraceModeQuantLocateaPeak/LocateallCompoundsEasyID如果peaks/限定離子找不到,檢查:1.積分2.數據文件中的質量數3.時間范圍4.信號相關窗口如果出現奇怪的校準曲線,檢查:1.數量2.積分事件3.響應定量數據庫故障排除查找峰/查找所有化合物修正保留時間校正離子比率設置信號萃取窗口EasyID點擊Quantitate/TraceModeQuant對痕量樣品進行處理，列出所有相關化合物和內標的定量過程詳細資料TraceModeQuant當每個化合物的變化相一致時