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文檔簡介

1.2基因工程的基本操作程序（二）1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）轉化：目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內穩定存在和表達的過程。1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）1、將目的基因導入植物細胞（1）導入細胞的種類（2）導入方法農桿菌轉化（最常用）體細胞雙子葉植物和裸子植物其他植物可用酚類物質處理后用農桿菌轉化1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）1、將目的基因導入植物細胞（2）導入方法基因槍法花粉管通道法1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）2、將目的基因導入動物細胞（1）導入細胞的種類（2）導入方法顯微注射法最好是受精卵細胞1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）3、將目的基因導入微生物細胞（1）微生物作為受體的優勢（2）導入方法Ca2+處理①繁殖速度快，可大量生產②生產成本低胰島素原的人工合成

1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）3、將目的基因導入微生物細胞（3）原核生物作為受體細胞產生的蛋白質沒有空間結構，需要在體外加工。1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）生物種類植物細胞動物細胞微生物細胞導入方法農桿菌轉化法（最常用）基因槍法花粉管通道法顯微注射法Ca2+處理法（感受態細胞發）受體細胞受精卵或體細胞受精卵原核細胞（細菌）1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因導入受體細胞（轉化transformation）生物種類植物細胞動物細胞微生物細胞轉化過程將目的基因插入Ti質粒的T-DNA上→Ca2+處理導入農桿菌細胞→侵染植物細胞→目的基因整合到受體細胞的染色體上DNA上→植物組織培養→試管苗表達目的基因→產生相應性狀。將含有目的基因的表達載體提純→取受精卵→顯微注射→獲得導入目的基因的受體細胞→早期胚胎培養→胚胎移植→獲得新性狀的動物。Ca2+處理細胞→感受態細胞→重組的基因表達載體與感受態細胞混合→感受態細胞吸收DNA分子完成轉化→目的基因表達，獲得新性狀。1.2基因工程的基本操作程序第四步：目的基因的檢測與鑒定抗蟲鑒定、抗病鑒定活性鑒定等抗原－抗體雜交法分子雜交法DNA分子雜交法受體是否具有轉基因特征個體水平目的基因是否翻譯目的基因是否轉錄目的基因是否導入分子水平方法檢測對象DNA分子限制片段限制性酶切割瓊脂糖電泳轉移至硝酸纖維素膜上與放射性標記DNA探針雜交放射自顯影帶有DNA片段的凝膠凝膠濾膜用緩沖液轉移DNA吸附有DNA片段的膜DNA分子雜交32P-抗體裂解細胞，表達蛋白轉移

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