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文檔簡介

姜振玲一、基因芯片概念基因芯片（genechip）又稱DNA芯片，是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段有序地、高密度地排列固定于支持物上，待測樣品核算分子經過標記，與固定在載體上的DNA陣列中的點按堿基配對原理同時進行雜交。雜交形式屬于固液雜交。通過激光共聚焦熒光檢測系統進行掃描以獲取樣品數量和序列信息。二、基因芯片的主要特征高通量－－提高信息量平行化－－提高信息的可比性微量化－－降低待測樣本的用量自動化－－提高工作效率低成本－－可迅速普及推廣三、基因芯片分類cDNA芯片寡核苷酸芯片寡核苷酸芯片和cDNA芯片的比較四、寡核苷酸芯片的特點序列經過優化，減少非特異雜交，能有效區分有同源序列的基因；減少二級結構；雜交溫度均一，提高雜交效率；合成產物濃度均一，避免因樣品濃度差異而造成的點樣量差異；無需擴增，防止擴增失敗影響實驗五、寡核苷酸芯片分類根據寡核苷酸應用方向的不同，可將其分為兩類：表達譜芯片：用于檢測基因的表達狀況（我公司目前使用的illumina表達譜芯片即為此類）檢測芯片:用于檢測特定基因是否存在（我公司使用的DRB檢測芯片為此類）六、寡核苷酸芯片的技術原理1.寡核苷酸表達譜芯片的技術方法流程：寡核苷酸探針的合成及純化與載體基片通過化學反應連接對照組樣本雜交

激光共聚焦掃描檢測及數據統計

篩選不同處理后表達的差異基因

實驗組樣本

RNA分離RNA反轉錄擴增標記完整RNA檢測:直接雜交探針Biotin標記cRNA地址序列**********23mer50mer微珠50mer基因特異性探針每個微珠連接有近百萬探針每種類型微珠～30倍重復探針設計:生物信息學分析挑選幾個候選探針,動力學反應掃描確定(專利)ScannedImageand

DataoutputanalyzedwithBeadStudio2、寡核苷酸檢測芯片技術方法流程寡核苷酸探針的合成及純化與載體基片通過化學反應連接雜交

檢測及數據分析處理標本（外周血或口腔粘膜）提取基因組DNAPCR擴增并用引物標記核酸分子雜交雜交前雜交后七、雜交結果的檢測方法激光共聚焦掃描DetectorConfocalpinholeFilterLaserbeamSubstrateObj

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