PAGEPAGE34EvaluationWarning:ThedocumentwascreatedwithSpire.Docfor.NET.項目建議書項目領域：：生物技術項目名稱：：移植排斥反反應的預預測、診診斷試劑劑盒的開開發生產產單位：陜西瑞奇生生物科技技有限公公司基本信息1..項目負負責人基基本情況況姓名胡軍性別男出生年月1962..10學歷研究生學位博士獲得最終學位院校第四軍醫大大學所學專業移植免疫學學現從事專業業移植免疫學學職稱講師職務務/主要工作經經歷1982--19889年，在在河南省省確山縣縣衛生防防疫站從從事流行行病防治治工作。1989--19992年，在第四軍醫大學微生物學教研室病毒及其免疫專業讀碩士學位。1992--19996年在在第四軍軍醫大學學微生物物學教研研室從事事病毒及及其免疫疫和移植植免疫的的研究工工作。1996--19999年，在在第四軍軍醫大學學西京醫醫院心血血管病研研究所移移植免疫疫學專業業讀博士士學位。1999--20001年在第第四軍醫醫大學西西京醫院院心血管管病研究究所從事事移植免免疫學研研究。2001年年至今，從從事生物物技術產產品的開開發研究究，主要要從事移移植免疫疫學產品品的開發發工作。主要工作成成績從事過的主主要重大大項目情情況、研研究成果果和獲知知識產權權情況（不不限字數數）1、軍隊重重大課題題《心肺肺聯合移移植臨床床研究》220022.055-20005..12主要參參加者。項項目進展展順利。2、《心臟臟移植臨臨床與基基礎研究究》項目目的主要要參加者者，已獲獲得陜西西省科技技進步一一等獎。3、已獲得得國家發發明專利利一項，已申請的發明專利一項，準備申請的專利兩項。2.項目基基本信息息項目內容摘摘要（限限5000字）：：器官移移植排斥斥反應預預測、診診斷產品品的開發發生產器官移植是是臨床上上發展最最迅速的的一個領領域，據據權威機機構預測測，到二二十一世世紀中葉葉，外科科手術的的一半都都將是器器官置換換。世界界上已有有70多多萬人接接受了器器官移植植，而且且這個數數字還在在以每年年5萬多多例的速速度增加加，但臨臨床上對對器官移移植病人人的選擇擇及移植植后排斥斥反應的的無創診診斷、監監測手段段等尚未未建立起起來；這嚴重重制約了了器官移移植的發發展和水水平的提提高。本項目把基基因工程程技術和和傳統免免疫學方方法及新新建立的的免疫學學方法結結合起來來，制備備世界通通用的HHLA抗抗原標準準細胞，為為器官移移植前的的供、受體搭搭配，移移植后排排斥反應應的預測測、診斷斷提供快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無創的科科學檢測測方法，該該方法目目前已用用于臨床床心臟移移植的排排斥反應應的診斷斷，經過過大量的的臨床活活檢對照照有很好好的一致致性，該該方法的的最佳反反應條件件也已基基本建立立，目前前只需制制備出通通用檢測測試劑盒盒生產所所需的原原材料即即可進行行產品的的大規模模生產。該該項目的的成功填填補了世世界器官官移植領領域的空空白，對對急性排排斥反應應的早發發現、早早診斷、早早治療，明明顯提高高移植患患者的生生存質量量，延長長存活期期限均具具有革命命性的重重要作用用。不但但具有廣廣泛的社社會效益益，而且且還具有有巨大的的經濟效效益。該該試劑盒盒的出現現會大力力推動器器官移植植領域的的發展，終終將使全全球器官官移植的的總體水水平有明明顯提高高。本項目原材材料的制制備使用用的技術術是目前前最先進進的基因因工程技技術；其其所用的的混合淋淋巴細胞胞培養方方法是目目前免疫疫學專家家公認的的，反映映機體細細胞免疫疫狀態最最好的體體外模型型；所用用的混合合淋巴細細胞反應應抑制試試驗是我我們近期期才新建立的的一個細細胞免疫疫學檢測測的新方方法，并并已申請請專利，故故本項目目產品短短期內被被其他更更先進的的技術和和方法所所取代的的可能性性不大。所所使用的的主要原原材料和和主要技技術均立立足國內內，采購購渠道通通暢。器官移植排排斥反應應預測、診診斷、監監測領域域在世界界上屬于于一個尚尚未開發發的領域域,尚未未有與排排斥反應應診斷有有關的試試劑盒推推出,我們申申請國內內外專利利后可保保護200年。目目前排斥斥反應預預測試劑劑盒已獲獲國家發發明專利利，正在在申請美美、日、德德、英、印印五國的的專利；；排斥反反應診斷斷試劑盒盒已申請請國家發發明專利利。本產產品的出出現將搶搶占全球球器官移移植領域域產品的的至高點點。本項目產品品以出口口為主，市市場約44-5億億美元//年（市市場上無無同類競競爭產品品）。預預計總投投資約550000萬元人人民幣，首首期投資資需10000--15000萬元元人民幣幣。投資資到位后后18--24個個月可具具備批量量投產條條件，生生產能力力為年產產80萬萬套，投投產一年年后年產產1500萬套。屆屆時，年年銷售收收入200億元人人民幣，稅稅收3億億元人民民幣，凈凈利潤88億元人人民幣。產產品上市市后一年年可收回回全部投投資。二、項目情情況1、研究的的目的及及意義、應應用需求求、研究究開發的的必要性性（不限限字數）1.1項目目研究的的目的、意意義針對危害人人類健康康的各器器官的終終末期疾疾病，器器官移植植是目前前唯一的治療手手段。器官移移植術前前排斥反反應的預預測、術術后排斥斥反應的的監測與與診斷，以以及最大大限度地地減少甚甚至避免免病理排排斥反應應的發生生等是臨臨床器官官移植急急需解決決的問題題，也是是國內外外共同關關注的熱熱點和難難點問題題。本項項目通過過基因工工程技術術和細胞胞工程技技術，建建立HLLA抗原原標準細細胞檢測測平臺，為為器官移移植前的的供受體體搭配、移移植后排排斥反應應的預測測、監測測、診斷、預預防和技技術服務務保障提提供快捷捷、敏感感、特異異、可靠靠、無創的科科學檢測測方法。該項目目的成功功填補了了世界器官官移植領領域的空空白，對對排斥反反應的早早發現、早早診斷、早早治療，明明顯提高高移植患患者的生生存質量量，延長長存活期期限均具具有革命命性的重重要作用用。不但但具有廣廣泛的社社會效益益，而且且還具有有巨大的的經濟效效益。該該試劑盒盒的出現現會大力力推動器器官移植植領域的的發展，終終將使全全球器官官移植的的總體水水平有明明顯提高高。由于該項目目填補了了世界器官官移植領領域的空空白，它它的出現現將搶占占全球器器官移植植領域產產品的至至高點。將使我國在世界生物技術產品領域擁有一席之地。為我國生物技術的產業化發展開辟一個新領域，對促進我國生物技術產業向多元化發展具有重要意義。1.2應用用需求及及研究開開發的必必要性器官移植是是目前臨臨床上發發展最迅迅速的一一個領域域,有有人預測測,到到二十一一世紀中中葉,外科手手術的一一半都將將是器官官置換..目前前世界上上已有770多萬萬人接受受了器官官移植,,而且且這個數數字還在在以每年年近5萬的的速度增增加,但目前前臨床上上對器官官移植病病人的選選擇都是是通過HHLA抗抗原配型型來比較較供受體體差異的的大小，這這種比較較只是對對供受體體HLAA抗原的的客觀存存在的差差異性進進行比較較，不能能反映他他們各自自HLAA抗原組組合的功功能狀況況，而不不同的抗抗原組合合具有不不同的免免疫反應應性，所所以，原原來的方方法不能能反映一一個人的的HLAA抗原組組合對人人類某一一個HLLA抗原原的免疫疫反應性性。而本本方法是是一個功功能性檢檢測方法法，是了了解一個個人的HHLA抗抗原組合合對各種種不同特特定抗原原反應性性的方法法。這一一方法所所得結果果更接近近人體內內實際的的免疫反反應狀況況。目前前對移植植后排斥斥反應的的確定主主要是通通過有創創，痛苦苦、非特特異的活活檢穿刺刺方法。臨臨床上急急需的快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無創的科科學手段段尚未建建立。再再者器官官移植后后,受體體需終生生使用免免疫抑制制劑,但服用用該藥的的劑量過過大不僅僅導致費費用增加加(一般般一年需需數萬元人人民幣)),且且受體易易患感染染性疾病病及惡性性腫瘤等等,服服用劑量量過小又又會導致致移植器器官被排排斥而失失去功能能,如如何對具具體的個個體選擇擇合適的的用藥劑劑量是長長期以來來困擾臨臨床醫生生的一個個難題。多多年來指指導用藥藥的“金指標標”一直是是上述的的活檢穿穿刺,但由于于活檢穿穿刺費用用高且有有創、痛痛苦,不易為為病人接接受,而且穿穿刺本身身具有危危險性,,不宜宜多做,,故移移植后在在醫生未未察覺的的情況下下突然因因排斥反反應使移移植器官官失去功功能而導導致病人人死亡情情況屢有有發生。再再如,許多病病人在移移植后,,由于于經濟原原因而停停用免疫疫抑制劑劑,結結果發現現其中有有些病人人停藥后后并不發發生排斥斥反應,,也就就是說這這些病人人對供體體器官產產生了免免疫耐受受，在未未停藥的的患者中中，實際際上可能能有不少少患者已已對供體體器官產產生了耐耐受。然然而，由由于沒有有一個科科學的指指標去檢檢測并說說明該患患者已對對供體器器官產生生了耐受受，所以以，醫生生很難確確定停用用免疫抑抑制劑的的時機，從從而，使使移植后后停用免免疫抑制制劑成為為一種冒冒險。因因此，本本方法將將對器官官移植前前的供受受體選擇擇、移植植后的排排斥反應應的確定定以及停停用免疫疫抑制劑劑時機的的掌控有有革命性性的貢獻獻。器官移植是是治療許許多器官官終末期期疾病的的唯一方方法。在在器官移移植后，供供受體間間HLAA抗原的的差異將將引起排排斥反應應，排斥斥反應仍仍是目前前影響心心、肝、腎腎、骨髓髓等器官官或細胞移植后11年、55年、110年存存活率的的主要因因素，如果有有一個在在移植以以前可以以挑選供供受體使使之合理理搭配((即挑選選那些移移植后可可能發生生排斥反反應較輕輕或不發發生排斥斥反應的的供受體體進行移移植,這一點點對骨髓髓移植尤尤為重要要)、在在移植后后能檢測測有無排排斥反應應發生、移移植器官官有無淋淋巴細胞胞慢性浸浸潤及受受體對供供體器官官有無免免疫耐受受發生等等的無創創檢測方法法,對對指導臨臨床醫生生合理調調整免疫疫抑制劑劑用量、使之適適時停藥藥(將大大大減輕輕病人的的經濟負負擔),,提高高病人生生存質量量，降低低移植病病人的死死亡率,,延長長移植器器官的存存活時間間具有重重要意義義,這將將有力推推動器官官移植事事業的發發展。所以,隨隨著接受受器官移移植的患患者的不不斷增加加及移植植免疫學學的迅速速發展,,建立立一套完完善的移移植前對對供受體體選擇,,移植植后監測測受體對對供體特特異性免免疫狀態態的無創創檢測方方法,對供體體器官的的長期存存活已變變得越來來越重要要。但在在本方法法出現以以前,臨床上上尚沒有有一個快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無創的科科學的指指標來指指導移植植前供體體的挑選選,移移植后排排斥反應應和免疫疫耐受的的診斷,,及免疫疫抑制劑劑用量調調整的方方法。2．主要研研究開發發內容、擬擬解決的的技術難難點、創創新突破破點以及及預期達達到的目目標、主主要經濟濟技術指指標和水水平（不不限字數數）2.1本項項目研究究開發的的主要內內容：將傳統免疫疫學檢測測方法和和現代分分子生物物學技術術有機結結合，建建立一套套可應用用于臨床床器官移移植排斥斥反應預預測的快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無創的科科學方法法；在進進行傳統統免疫學學研究過過程中建建立一個個全新的的免疫學學方法，應應用于排排斥反應應的臨床床診斷。主主要研究究內容有有：(1)排斥斥反應預預測：它是運用分分子生物物學技術術，建立立表達HHLA--Ⅰ類和Ⅱ類抗原原的標準準細胞株株，使每每株細胞胞上只表表達一個個HLAA抗原。再再把這些些幾乎包包含了人人類全部部HLAA抗原的的細胞株株的細胞胞分別放放入細胞胞培養板板各孔之之中，制制成標準準細胞板板作為抗抗原板，用用該抗原原板通過過混合淋淋巴細胞胞培養方方法來檢檢測受體體對哪些些HLAA抗原反反應強、對對哪些HHLA抗抗原反應應弱，從從而指導導我們為為受體挑挑選合適適的供體體器官，以以減少移移植后排排斥反應應的發生生。其主主要研究究內容包包括：A、HLAA抗原缺缺失細胞胞系（作作為HLLA抗原原表達的的空白細細胞載體體）的選選擇與鑒鑒定，已已完成。B、通過EEB病毒毒感染的的方法建建立包含含已知人類類全部HHLA抗抗原的幾幾十個細細胞系（該該項工作作已經基基本完成成），并并分別從從這些細細胞中提提取mRRNA進進行反轉轉錄，再再通過PPCR方方法從反反轉錄的的cDNNA中克克隆出目目的基因因進行測測序，該該項工作作正在進進行中，已已經完成成了其中中一部分分。C、選擇一一種能在在真核細細胞中表表達、并并且能整整合到宿宿主細胞胞基因組組中的逆逆轉錄病毒表表達載體體，構構建HLLA抗原原表達載載體，該該項工作作正在進進行中（已已構建出出10余余個抗原原表達載載體）。D、把HLLA抗原原表達載載體經包包裝后轉轉染入細細胞中表表達（正正在進行行中）。E、篩選穩穩定表達達某一個個HLAA抗原的的細胞建建株、并并進行鑒鑒定。F、重復上上述工作作，建立立分別表表達不同同HLAA抗原近近1000個亞型型抗原的的細胞株株。G、探索用用這些細細胞株作作為刺激激細胞進進行混合合淋巴細細胞反應應的最佳佳條件。H、建立這這些細胞胞株的大大規模培培養條件件，用這這些細胞胞制備包包含人類類全部HHLA抗抗原的檢檢測板。I、用這種種HLAA抗原檢檢測板，通通過混合合淋巴細細胞反應應為器官官移植受受者挑選選供體，同同時對移移植后的的患者進進行監測測，發現現已對供供體器官官產生免免疫耐受受的患者者，并指指導其逐逐漸停用用免疫抑抑制劑。J、建立用用這些細細胞株作作為刺激激細胞進進行混合合淋巴細細胞反應應抑制試試驗的最最佳條件。(2)排斥斥反應等等的診斷斷：在進行移植植免疫學學的研究究過程中中，我們們又建立立了一個個全新的的免疫學學方法，由由于其實實驗方法法與混合合淋巴細細胞反應應相似，反反應結果果和混合合淋巴細細胞反應應結果完全全相反，暫暫時我們們把它叫叫做混合合淋巴細細胞反應應抑制試試驗，該該實驗可可以用來來檢測外外周血中中活化淋淋巴細胞胞的特異異性，故故使用上上述HLLA抗原原板即可可檢測器器官移植植受者體體內有無無HLAA抗原活活化的淋淋巴細胞胞，從而而判斷體體內有無無排斥反反應發生生。該方方法不但但可以用用于診斷斷排斥反反應，也也可能用用于各種種傳染病病的診斷斷和預防防。⑴挑選上述述已被EEB病毒毒轉化的的細胞株株中相互互不具有有相同抗抗原的細細胞株，以以他們為為載體，通通過上述述基因工工程的方方法，把把其它的的未包含含在所挑挑選的載載體中的的HLAA抗原分分別轉入入其中并并表達，使使一個細細胞表達達盡可能能多的HLAA抗原。從從而使這這些細胞胞株表達達幾乎人人類全部部的HLLA抗原原。⑵用這些表表達較多多HLAA抗原的的細胞株株制備HHLA抗抗原板，通通過混合合淋巴細細胞反應應抑制試試驗對器器官移植植病人進進行排斥斥反應監監測,并并探索其其最佳反反應條件件。⑶選擇上述述兩種細細胞板中中的一種種細胞板板進行混混合淋巴巴細胞反反應抑制制試驗，對對器官移移植后的的患者進進行排斥斥反應監監測、診斷和預預防。⑷對混合淋淋巴細胞胞反應抑抑制試驗驗方法在在臨床感感染性疾疾病診斷斷方面的的應用進進行探索索性研究究，爭取取早日把把該方法法應用到到流腦、乙乙腦病毒毒、出血血熱病毒毒、水痘痘病毒、麻麻疹病毒毒、腮腺腺炎病毒毒、呼吸吸道合胞胞病毒、SSARSS病毒等等疾病的的診斷和和感染性性疾病疫疫苗接種種后的免免疫效果果評價方方面。2.2擬擬解決的的技術難難點：建立、篩選選穩定表表達單一一HLAA抗原的的各種細細胞株。表達HLAA抗原的的細胞株株的大規規模培養養技術。2.3創新新突破點點：（1）利用用基因工工程技術術建立百百余種分分別只表表達一種種HLAA抗原的的標準細細胞株，把把這些細細胞株和和傳統免免疫學技技術結合合建立人人類混合合淋巴細細胞反應應板，在在世界上上首次建建立一個個世界通通用的、體體外檢測測一個個個體對每每個HLLA抗原原反應性性的方法法。該方方法已獲獲國家發發明專利利（見附附件）。（2）建立立了一個個全新的的、可以以用來檢檢測機體體內活化化淋巴細細胞特異異性的免免疫學方方法（目目前世界界上還沒沒有一個個檢測體體內活化化淋巴細細胞特異異性的方方法），并并在世界界上推廣廣該方法法用于排排斥反應應的診斷斷和預防防。2.4預期期達到的的目標2.4.11過22-3年年的工作作，完成成上述HHLA--Ⅰ類抗原原、HLLA-‖‖類抗原原近1000個亞亞型抗原原的表達達、并使使之具備備生產條條件。通過3-44年的工作作，用于于移植前前挑選供供、受體使之之合理搭搭配的檢測試劑劑盒，用用于移植植后排斥斥反應監監測、診診斷的試試劑盒均均拿到生生產批號號，投放放并滿足足國內市市場的需需求，同同時開始始進軍國國外市場場。2.5主要要技術指指標和水水平：2.5.11主要技技術指標標：（1）表達達10多多種和表表達單種種HLAA抗原的的細胞株株，具有有穩定表表達、傳代能能力。（2）移植植前用于于預測，可可以了解解一個個個體對每每個HLLA抗原原分子的的反應性性；移植植后用于于診斷，可可以確定定受體對對供體所所含抗原原有無免免疫耐受受發生。（3）移植植后用于于診斷，不不但可以以確定排排斥反應應的發生生與否，而而且還可可以確定定受體對對哪一個個HLAA抗原產產生了排排斥反應應，精確確到每一一種抗原原亞型。（4）建立立哺乳動動物細胞胞大規模模培養的的技術平平臺，建建立和掌掌握500升、3300升升動物細細胞大規規模培養養的技術術條件。2.5.22水平：：①預測、診診斷排斥斥反應的的試劑盒盒達到世世界領先先水平。②有關細胞胞大規模模培養的的技術達達到國內內先進水水平。2.6經經濟指標標：①預測、診診斷排斥斥反應的的試劑盒盒國內上上市后年年利稅達達到一億億元人民民幣。出出口年創創匯4-6億美金金。②各種傳染染性疾病病檢測試試劑盒投投放市場場后，可可創造不不少于排排斥反應應檢測試試劑盒所所能創造造的效益益。綜上分分折，本本項目預預計投資資50000萬元元，首期期投資需需10000-115000萬元人人民幣。投投資到位位后188-244個月可可具備批批量投產產條件，生生產能力力為年產產80萬萬套，投投產一年年后年產產1500萬套。屆屆時，年年銷售收收入200億元人人民幣，稅稅收3億億元人民民幣，凈凈利潤88億元人人民幣。產產品上市市后一年年可收回回全部投投資。33、預期期可獲得得的發明明專利等等知識產產權情況況（不限限字數）①目前已獲獲得國內內發明專專利一個個，專利利號為：：0011137747..6(見見符件))，其在美、英英、德、日日、印度度的專利利申請正正在進行行中。②我們建立立的免疫疫學新方方法的也也已申請請專利。44、項目目國內外外發展現現狀與趨趨勢，國國內現有有技術基基礎，與與項目有有關的技技術領域域的國內內外專利利申請和和授權情情況以及及其他知知識產權權情況((附有關關查新結結論)（不不限字數數）4.1國內內外技術術現狀及及發展趨趨勢目前,臨臨床器官官移植后后對移植植排斥反反應的最最終診斷斷主要靠靠活組織織穿刺檢檢查來確確定,如如心臟移移植，目目前急性性排斥反反應仍然然是影響響心臟移移植病人人長期存存活的主主要因素素，病人人接受心心臟移植植后，世世界上各各移植中中心的普普遍做法法是通過過心內膜膜活檢來來監測或或診斷排排斥反應應，尤其其是移植植后第一一年內，可可能要進進行多次次心內膜膜活檢，由由于活檢檢穿刺具具有一定定的創傷傷和危險險，而且且還要昂昂貴的費費用，病病人比較較痛苦，不不易為醫醫生和病病人所接接受，所所以國內內大多數數心臟移移植單位位都很少少正規地地給患者者做定期期活檢。為為建立一一個風險險小，快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無創、費用低低、醫生生和病人人都樂于于接受的的排斥反反應的監監測、診診斷的科學方法法，國內內外研究究人員都都進行了了大量工工作。他他們先后后對心肌肌鈣蛋白白T、心心肌鈣蛋蛋白I[[1,22,3,,4]，降降鈣素前前體，腫腫瘤壞死死因子、IIL－22、ILL－6[[5,66]、nntoppterrin[[7]、CC反應蛋蛋白[88]及eechoocarrdioograaphiicffuncctioonallinndiccesorstrresss-veeloccityyreelattionnlooopss[9,,10,,11]]、bbraiinnnatrriurretiicppepttidee[122]等等在器官官移植排排斥反應應診斷中中的意義義進行了了大量研研究，結結果均不不理想。目目前，臨臨床移植植排斥反反應的診診斷主要要靠臨床床醫生的的經驗、一一些移植植器官的的功能性性指標((一旦發發現器官官功能有有改變,,就表明明器官的的損傷已已相當嚴嚴重了，時機太晚！)和一些非特異的免疫學指標(如白細胞移動抑制試驗,C反應蛋白檢測,淋巴細胞轉化試驗,淋巴細胞亞群分析及一些細胞因子監測等的結果)。雖然一些大的移植中心試圖把混合淋巴細胞培養、CTL殺傷實驗等細胞免疫的特異性指標引入器官移植后排斥反應的臨床診斷,但由于他們未建立標準細胞株,所以他們只能把一個一個供體的脾細胞凍存起來作為刺激細胞或靶細胞,而且只能做一對一的檢查,即一個供體對一個受體做檢查,由于每一個凍存脾細胞中B淋巴細胞的比例不同(只有B淋巴細胞表面才表達二類抗原)及他們凍存的細胞各自的狀態不同，還有人們對活化淋巴細胞對抗原再刺激的反應增強、減弱的條件了解不足（對反應原理不清楚）等,使他們的結果也不相同,缺少可比性和穩定性。有時即使是對同一個人的檢測，同一中心不同時間做的結果也不一樣，所以，對于把混合淋巴細胞反應方法用于診斷器官移植排斥反應的研究也越來越少。到目前為止，世界上其他研究單位尚未建立一個合適的排斥反應診斷方法。4.2國內內現有的的技術基基礎：生物技術可可能是國國內少數數幾個接接近于國國外技術術水平的的領域之之一，基基礎較好好；本項目目所使用用的技術術均為生生物工程程領域的的成熟技技術，現現有技術術基礎已已完全滿滿足該項項目的要要求；研研究組大大部分技技術人員員都是相相關領域域的專家家，如有足足夠資金金支持，完成該項目無大的困難。1.HowwarddJ，SSmevvenB，JJefrreyE,etal..Nooninnvassiveedeetecctioonoofrrejeectiionoftraanspplannteddheearttswwithhinndiuum-1111--labbeleedllympphoccytee.Ciircuulattionn,119877,775:8868--8766．2.NaarullaJJ,AAciooERR,NNaruulaN,AAnneexinn-Vimaaginngffornonninvvasiivedettecttionnoffcaardiiacalllogrrafttreejecctioon.NattMeed220011Deec;77(122):113477-5223.PattrciiaKK，DoonalldWW，AnnnaMorriarrty,,etal．．Immmunoologgicaalmmoniitorringgoffthhecardiiactraanspplanntppatiientt.Chhestt,19988,,94：：8344-8336.4.ReaaderrJAA,BBurkkeMMM，CouunihhamP，etal．．Nonninvvasiivemonnitoorinngoofhhuammncardiiacalllogrrafttreejecctioon.TTrannspllanttatiion,,19990,550:229-330.5.VallenttineeHAA、Foowl航航MB，HHunttSAA,ettall．ChhanggesinDopppleereechoocarrdioograaphiiciindeexessoffleeftvenntriicullarfunnctiionaspottenttiallmaarkeersofacuutecarrdiaacrrejeectiion..CCircculaatioon.19887，776(ssupppl.55)v--86．．6.AueerTTH，SSchrreieerGG,HuutteenHH,ettall.Affterrheeartttrranssplaantaatiooniintrramyyocaardiialeleectrrogrramforrmoonittoriingofalllogrrafttreejecctioon.TraanspplanntPProcc，19995,,27((3)：：19883-119855．7.F..Ibeererr,B..Graasseer,eetaal.Inttradduciingannewcliiniccalmetthoddfoornnoniinvaasivverrejeectiionmonnitoorinngaafteerhhearrtttrannslllanttatiiontocliiniccalpraactiice::Annalyysissoffpaaceddinntraamyeecarrdiaaleelettroggramm.TTrannspllanttPrroc,,19998,330,8895--89998.AnngerrmannnCCE,NNasssanK,eetaal.rrecoogniitioonoofaacutteccarddiaccallloggrafftrrejeectiionfroomsseriialinttegrreteedbaccksscattterranaalyssisinhummanheaarttraanspplanntrreciipieentss.CComppariisonnwiithconnvenntioonallecchoccarddioggrapphy..Ciircuulattionn.119977,955(1))：14409.MaarieePYY,AAngiioiM,CarrteaauxJP,,etal..DeetecctioonaandpreedicctioonoofaacuttehhearrtttrannspllanttreejecctioonwwithhthhemmyoccarddiallT22deeterrminnatiionprooviddedbyabblacck-bblooodmmagnnetiicrresoonannceimaaginngssequuencce.JAAmCColllCaardiiol20001MMar1;337(33):8825--31..10.MMulllenJC,,BeentlleyMJ,,SccherrrKKD,eetaal.TTropponiinTTanndIIarrennotrelliabblemarrkerrsoofccarddiacctrranssplaantrejjecttionn.EEurJCCarddiotthorracSurrg220022Auug;222(22):2233--711.WaahlaandeerHH,KKjelllsttrommC,,HoolmggrennD，eetaal.SSusttainnedeleevattedconncenntraatioonsofcarrdiaacttropponiinTTduurinngaacutteaalloograaftrejjecttionnaffterrheeartttrranssplaantaatiooniincchilldreen.Traanspplanntattionn20002Octt277;744(8)):11130--512.CChannceJJ,,SeegallJBB,WWalllerssonG,eetaal.CCarddiacctrropooninnTanddC--reaactiiveprooteiinaasmmarkkerssoffaccuteecaardiiacalllogrrafttreejecctioon.CliinCChimmAccta20001OOct;;3122(1--2)::31--95、項目擬擬采取的的研究方方法（或或技術路路線、實實施方案案）及其其可行性性和風險險分析（不不限字數數）5.1研究究方法：：⑴細胞培培養技術術⑵基因工工程技術術⑶病原微生生物培養養及純化化技術⑷單克隆隆抗體技技術⑸蛋白質純純化技術術⑹⑹免疫組組化技術術⑺混合淋巴巴細胞反反應⑻混合淋淋巴細胞胞反應抑抑制試驗驗5.2技術術路線圖圖1：篩選具有不同HLA抗原的個體，并用EB病毒轉化其B淋巴細胞利用基因工程技術、構建表達HLA抗原的雙順反子的逆轉錄病毒載體篩選具有不同HLA抗原的個體，并用EB病毒轉化其B淋巴細胞利用基因工程技術、構建表達HLA抗原的雙順反子的逆轉錄病毒載體細胞載體細胞載體從EB病毒轉化的B淋巴細胞中挑選出幾個彼此不具相同HLA抗原的細胞株作抗原載體從EB病毒轉化的B淋巴細胞中挑選出幾個彼此不具相同HLA抗原的細胞株作抗原載體轉染抗原空白載體細胞使一個細胞上只表達一種HLA抗原細胞轉染，增加HLA抗原表達的種類轉染抗原空白載體細胞使一個細胞上只表達一種HLA抗原細胞轉染，增加HLA抗原表達的種類篩選得到分別穩定表達各種HLA抗原的細胞株篩選得到穩定表達10種以上HLA抗原的細胞株篩選得到分別穩定表達各種HLA抗原的細胞株篩選得到穩定表達10種以上HLA抗原的細胞株兩類細胞分別進行大規模培養，并制備成相應的試劑盒兩類細胞分別進行大規模培養，并制備成相應的試劑盒用混合淋巴細胞反應：1、挑選供、受體使之合理搭配。用混合淋巴細胞反應：1、挑選供、受體使之合理搭配。2、免疫耐受的診斷用混合淋巴細胞反應抑制實驗監測診斷排斥反應美、歐歐臨床試試驗及市市場準入入、FDDA申請請5.3可行行性研究究：⑴基因的克克隆表達達是基因因工程的的基本技技術，研研究組有有一位基基因工程程專家專專門負責責該項工工作，無無大的技技術問題題；穩定定表達某某一HLLA抗原原細胞株株的篩選選也無大大的技術術難點，所所有的困困難就是是工作量量大；⑵項目研究究所使用用的混合合淋巴細細胞反應應方法是是經過幾幾十年驗驗證的、反反映體內內細胞免免疫狀態態的最好好的體外外模型，對對該方法法研究組組有多個個成員都都有豐富富的試驗驗經驗；；⑶混合淋巴巴細胞反反應抑制制試驗為為本研究究組自己己所建立立，其建建立時間間雖然較較短，但但經1000余人人次臨床床應用，550余人人次活檢檢病理對對照檢查查，二者者有很好好的一致致性。5.4風險險分析：：排斥反應的的預測和和診斷方方面的試試劑盒原原材料的的制備，其其所用技技術均為為基因工工程的常常用技術術，理論論上本研研究沒有有太大的的、意想想不到的的困難和和技術風風險。其其所用的的檢測方方法：一一個是混混合淋巴巴細胞培培養，一一個是混混合淋巴巴細胞反反應抑制制試驗。前前一個已已建立近近30年年，是免免疫學界界公認的的、能夠夠反映機機體內細細胞免疫疫狀態的的最好的的方法；；后一個個雖然建建立時間間較短，但但用于臨臨床排斥斥反應檢檢測與目目前公認認的活檢檢對照具具有很好好的一致致性，而而且其體體外模型型也已建建立成功功，其反反應發生生的內部部機理也也已基本本清楚。6、預期研研究成果果應用轉轉化的前前景預測測及分析析（包括括國內外外應用或或市場現現狀、潛潛在用戶戶、市場場前景及及風險預預測，經經濟效益益和社會會作用、影影響分析析等）6.1市場場對該試試劑盒的的需求來來源①移植前對對供受體體進行挑挑選:每年年全世界界大約要要進行55萬例器器官移植植和骨髓髓移植,,除這這些受者者需檢查查外,每個受受者需從從多個有有意貢獻獻器官和和骨髓的的被選供供者中選選擇一個個合適的的供者,,故做做一例器器官移植植或骨髓髓移植需需作多個個檢查,,此項項每年大大約需110萬多多個試劑劑盒,共約330000萬美元元的市場場.②PRAA檢測::目目前每年年全世界界大約進進行5萬萬例器官官移植,,每個個受體移移植前均均需做PPRA檢檢測,此項每每年大約約需5萬萬個PRRA檢測測試劑盒盒,共共約2000萬美美元的市市場.但該項項檢測有有兩個公公司的產產品已經經投放市市場.③排斥反應應的診斷斷:目前全全世界已已有存活活移植患患者約550萬人,而而且每年年還在以以近5萬萬例的速速度增加加,按按常規使使用,接受器器官移植植1年以以內每年年需檢查查4次,,1年年以上每每年需檢檢查2次次,此此項每年年大約需需1200萬個試試劑盒,,共約約360000萬萬美元的的市場..④免疫耐受受檢測::服服用免疫疫抑制劑劑兩年以以后均可可檢測,,一年年檢測一一次,此項每每年大約約需檢測測試劑盒盒50萬萬個,共約1150000萬美美元的市市場.⑤自身免疫疫性疾病病的診斷斷需要。⑥臨床科研研工作的的需要。⑦腫瘤，乙乙肝等疾疾病患者者的細胞胞免疫功功能評價價等。⑧各種病毒毒性疾病病診斷的的需要。其市場也在5億美元左右。綜上分析，器器官移植植排斥反反應市場場預測診診斷市場場約為55億美元元，各種種病毒性性疾病診診斷試劑劑盒的市市場也有有約5億億美元，總總計該項項目所涵涵蓋的市市場在110億美美元以上上。6.2風險險分析：：①本項目所所使用的的技術是是目前最最先進的的基因工工程技術術；其所所用的混混合淋巴巴細胞培培養方法法是目前前免疫學學專家公公認的，反映機體細胞免疫狀態最好的體外模型；所用的混合淋巴細胞反應抑制試驗是我們近期才建立的一個免疫學方法，故本項目產品短期內被其他更先進的技術和方法所取代的可能性不大。②本項目研研究所涉涉及的基基礎技術術和研究究方法均均已成熟熟，足以以支撐本本項的實實施。③本項目所所使用的的主要原原材料立立足國內內，采購購渠道通通暢。④目前器官官移植排排斥反應應預測、診診斷、監監測領域域在世界界上屬于于一個尚尚未開發發的領域域,尚尚未有其其他有關關的試劑劑盒推出出,我我們申請請國內外外專利后后可保護護20年年。綜上所述，目目前在器器官移植植前的供供受體挑挑選，移移植后的的排斥反反應和免免疫耐受受性診斷斷方面尚尚無相應應產品出出售，本本項目產產品推向向市場后后屬獨家家經營，無無競爭產產品。6.3經濟濟效益：：6.3.11產品成成本分析析以下產品成成本分析析按500萬套/年年生產能能力計算算。制造成成本:全年制造成成本1224055萬萬元，其其中：直接材料774311.5萬元（按按小試階階段平均均耗用材材料計算算）((約占660%))直接工資118600.8萬元(約占占15%%)制造費用331122.7萬元(約占占25%%)其中：折舊舊及攤銷銷15112.77萬元((按新增增30776萬元元固定資資產計，折折舊按66年平均均攤銷))廠房租賃1160萬元燃料動力3320萬萬元運輸包裝3300萬萬元外出考察880萬元元其它5000萬元元期間費費用期間費用包包括管理理費用、財財務費用用、銷售售費用,,全年共共計4226733萬元管理費用：：參照本本企業實實際情況況按銷售售收入115%計計算，全全年計1148886萬元元；財務費用：：約為銷銷售收入入3%計計算,全全年約229777萬元銷售費用::(含含廣告推推廣費用用)參參照本企企業實際際情況按按銷售收收入255%計算算,全年年約2448100萬元6.3.22經濟濟效益分分析試劑劑盒項目目經濟效效益分析析表年度單位2007年2008年年生產能力套500000800000產銷率%%80%90%年銷售量套400000720000銷售收入萬元99240178632銷售成本萬元3721564506其中生產成本萬元1240519848銷售費用萬元2481044658銷售單價元24812481增值稅15%萬元1488626795銷售利潤萬元4713987331管理費用萬元1488626795財務費用萬元29775359利潤總額萬元2927655177企業所得稅萬元790514898凈利潤萬元21371402796.3.33項目投投資評價價本項目在提提出申請請之前,,即前期期研究階階段已投投入2440萬元元研發經經費,完完成中試試時的生生產能力力為800萬套//年,此此后,將將通過增增加資金金投入等等方式擴擴大生產產規模,,2年后后年達到到年生產產能力1150萬萬套/年年,投資資評價計計算期,,年計算算(固定定資產佘佘值為零零),則則本項目目投資評評價如下下:本項目的財財務內部部收益率率較高,,投資回回收期短短,經濟濟效益明明顯,是是見效快快、回報報高的好好項目,,項目的的投產,,既可以以給國家家稅源做做出較大大貢獻,,同時又又能出口口創匯..因此,,本項目目在經濟濟上是可可行的。6.4社會會效益分分析該項目屬生生物高技技術領域域，是傳傳統免疫疫學方法法和現代代分子生生物學技技術結合合的產物物；其產產品投入入市場將將大大延延長接受受器官移移植病人人的生存存時間，提提高生存存質量，將將產生巨巨大的經經濟效益益和社會會效益。該該項目開開發的成成功除每每年可為為國家增增加數億億美元的的利稅外外，更重重要的是是它將使使我國在世界界生物高高技術產產品開發發領域填填補空白白和占有有領先地地位；使使器官移移植技術術和水平平獲得突突破性發發展，使使我國器器官移植植產品占占領全球球同類產產品的至至高點；；作為我我國首個個出口歐歐美的生生物高技技術產品品，也將將對我省省生物高高技術產產業的發發展將具具有巨大大的推動動作用。本項目技術術高新，工工藝流程程長，對對上游生生物儀器器、生物物儀表、生生物設備備及生物物材料、高高分子材材料、包包裝材料料、運輸輸業有著著極大的的需求,,對上游游各產業業的發展展起著積積極的推推動作用用。對下下游器官官移植產產業提供供快捷、簡簡便、準準確、價價謙的預預測、診診斷試濟濟，提高高器官移移植反應應成活率率，降低低移植監監控的費費用，對對器官移移植事業業的發展展起到積積極的推推動作用用。同時時，由于于本項目目的產業業化，需需要高質質量的設設備、設設施，引引入人才才，招攬攬員工，對對本地的的經濟發發展和對對本地文文化的發發展起到到積極的的帶動作作用。投資計劃書書本項目計劃劃總投資資50000萬元元，投資資完成后后將擁有有一個全全國一流流的現代代化的生生物工程程研究所所（總面面積約115000平方米米）和一一個符合合美國FFDA要要求的GGMP生生物工程程產品生生產車間間（總面面積約550000平方米米）。其其投資擬擬分兩次次到位，第第一批110000萬元，建建立生物物工程研研究所；；第二批批40000萬元元，建立立生物工工程產品品生產廠廠。首期投入110000萬元，經經費主要要使用如如下：建立生物工工程研究究所：租租房15500平平方米；；地點：：佛山市市高新技技術產業業園；租租金：約約25萬萬元/年年；租期期：200年。人人員約330人。裝修：1550萬元元。購買設備（見見計劃購購置的重重要儀器器設備表表）：3350萬萬元-4450萬萬元；包包括基因因工程實實驗室：：1000萬元，細細胞工程程實驗室室50萬萬元，蛋蛋白質純純化實驗驗室1000萬元元，通用用儀器設設備1000萬元元-2000萬元元。申報國外專專利約880萬元元。科研經費2275萬萬元。研究所人員員工資及及辦公、運運轉費用用每年約約1200萬元。其其中聘請請的技術術人員基因工程實實驗室約約6人，年年需工資資約188萬（其其中一個個博士約約需工資資12萬萬元）。細胞生物學學、免疫疫學、蛋蛋白質純純化實驗驗室約88人，年年需工資資約300萬元（其其中3個個博士約約為244萬元）?；鹕暾?、國國內外生生物科技技信息搜搜集、信信息管理理約5人人，年需需工資約約12萬萬元（其其中一個個博士約約需工資資8萬元元）。總經理、副副總經理理、辦公公室主任任、財務務、打字字、司機機、人事事、勤雜雜等人員員工資每每年約225萬元元。總計每年約約需工資資85萬萬元，辦辦公經費費約355萬元，共共計1220萬元元。研究所三年年建設計計劃及目目標第一年，資資金到位位后購買買儀器、設設備、租租房、裝裝修；同同時招聘聘四醫大大的研究究人員開開始HLLA-‖‖類抗原原20個個DR亞亞型抗原原的表達達工作。半半年后儀儀器、設設備全部部到位，研研究所建建成，研研究人員員移入研研究所工工作；通通過一年年的工作作，初步步建立起起一支具具有較強強技術實實力的產產品開發發、生產產隊伍。第二年，完完善內部部管理；；理順各各方關系系；完善善資金申申請、信信息收集集、產品品開發、生生產隊伍伍的建設設；至少少完成HHLA--‖類抗原原20個個DR亞亞型抗原原的表達達、鑒定定工作，使使之達到到可進行行生產的的水平。至至少拿到到一項國國家的如如中小型型高新技技術企業業創新基基金等的的國家資資助。第三年，把把HLAA-‖類抗原原20個個DR亞亞型抗原原制成檢檢測試劑劑盒推向向市場，同同時申請請國家產產業化資資助；完完成HLLA-ⅠⅠ類抗原原約600個亞型型抗原的的表達、鑒鑒定工作作使之達達到可以以進行生生產的水水平；至至少拿到到一項國國家基金金資助。第第二批資資金開始始進入，