腫瘤免疫學檢驗準確性的指標靈敏度與特異度等課件概述腫瘤免疫學檢驗主要涉及腫瘤免疫學診斷和腫瘤患者免疫功能狀態的評估。而目前臨床上用于腫瘤免疫學診斷項目主要是腫瘤標記物檢測，但目前使用腫瘤標記物都是腫瘤非特異性標記物，不僅由腫瘤細胞產生，存在腫瘤患者血液和體液中；也可以正常體細胞產生，健康者血液和體液中也會存在一定量腫瘤標記物，因此，如果將腫瘤標記物作為腫瘤診斷指標時，對臨床上使用的腫瘤標記物進行生物參考區間評價和診斷性能評價就顯得非常重要，本單元主要以AFP和PSA為例以達到舉一反三作用。概述腫瘤免疫學檢驗主要涉及腫瘤免疫學診斷和腫瘤患者免疫功能實驗一

血清AFP參考區間建立實驗實驗一

血清AFP參考區間建立實驗

實驗室應為檢驗項目提供可靠的參考區間，才能使臨床對健康普查者的檢驗結果作出判斷，對病人檢驗結果有大致的了解，發揮檢驗報告的作用。因此獲得檢驗項目可靠的參考區間是實驗室的重要任務。參考區間的評價一般包括參考區間的建立和參考區間的驗證實驗。

實驗室應為檢驗項目提供可靠的參考區間，才能使臨床對健康普查實驗目的掌握血清AFP參考區間建立實驗的原理和方法學，以ModularAnalyticsE170自動電化學發光免疫分析系統測定AFP參考區間的建立流程為例加以說明。實驗目的掌握血清AFP參考區間建立實驗的原理和方法學，以Mo實驗原理先確定AFP參考區間建立時的納入人群的標準，選擇參考個體，按該項目的檢測要求收集標本并在檢測系統性能良好的狀態下進行AFP濃度的檢測，收集檢測結果，統計分析，確定化學發光免疫分析系統AFP測定的參考區間。實驗原理先確定AFP參考區間建立時的納入人群的標準，選擇參考試劑與器材選用與檢測儀器相配套的試劑、校準品及其他輔助試劑。按照納入人群的標準，選擇參考人群的新鮮血清標本。試劑與器材選用與檢測儀器相配套的試劑、校準品及其他輔助試劑。操作步驟根據文獻和實驗研究，總結對該項目檢測結果產生的生物變異和分析干擾的因素，供選擇參考個體時用。確定參考個體的選擇原則（或排除非參考個體的原則），編寫與之對應的調查表。依據調查表和其他有關記錄，挑選候選的參考個體。應按照項目在臨床使用的要求選擇參考個體，在選擇參考個體對象時，要兼顧各年齡段，同時應考慮是否有分組的必要（最常見的是分年齡組和性別組）。依據排除原則，剔去不符要求的候選對象。操作步驟根據文獻和實驗研究，總結對該項目檢測結果產生的生物變將采集標本前和采集時對受檢查的要求，詳細告訴各個受檢參考個體，做好準備，要求予以配合。規范地采集標本，做好分析前的標本預處理。按照相應規程做好標本采集、處理、運送和保存，此外，還應考慮標本采集時的環境條件，標本采集者技術熟練要求和服務態度等。在良好的控制條件下，用事先指定的分析方法對標本進行檢測，獲得參考值結果。分析樣品的檢驗方法應有方法學可靠性評價，測定過程有完整質量控制措施將采集標本前和采集時對受檢查的要求，詳細告訴各個受檢參考個體結果計算和分析繪制分布圖，了解數據的分布特性。若數據呈高斯正態分布，或者數據經轉換后亦呈高斯分布，可按士1.96S表示95％數據分布范圍，或者士2.58S表示99％分布范圍等確定參考限和參考區間。結果計算和分析繪制分布圖，了解數據的分布特性。若數據呈高斯參考對象群體值的特定百分數（通常是95％）非參數和參數分析：是否正態分布確定參考范圍的最小樣本量隨機至少120個觀察對象參考對象群體值的特定百分數（通常是95％）注意事項

為確保參考范圍數據的可靠性，建議至少取120個參考值數據，若還需分組統計，則每個分組應有120個數據。數據中的疑似離群點的判斷，建議將疑似離群點和其相鄰點的差值D和數據全距R相除，D/R若大于等于1/3考慮為離群點。若有2個或以上疑似離群點，可將最小的疑似離群點作如上處理，若都大于1/3，則所有疑似點都剔去；若都小于1/3，則保留所有數據。若有離群點被剔除后，應即將其他數據補上。若數據不呈高斯正態分布，則可用非參數法處理。最常見的是以百分位數法確定2.5％和97.5％位數的參考限，以此確定95％參考區間。注意事項

為確保參考范圍數據的可靠性，建議至少取120個參考方法評價建立參考區間是實驗室開展新的檢驗項目前必然要進行的一項工作，但由于其需要標本例數多，對人群的納入標準要求嚴格；大多實驗室參照試劑說明書、教材、或其它權威資料轉移為本實驗室的參考區間，但需對此類選用的參考區間進行驗證評審。采用簡單的方法予以證實，如選取20位健康者，有90%以上的測定結果在參考區間內，即說明實驗室選用的參考區間有效。方法評價建立參考區間是實驗室開展新的檢驗項目前必然要進行的一思考題

請設計建立AFP參考區間的抽樣人群的納入標準？溫州醫學院陶志華思考題

請設計建立AFP參考區間的抽樣人群的納入標準？溫州醫實驗二

血清PSA診斷前列

腺癌的性能評價實驗實驗二

血清PSA診斷前列

腺癌的性能評價實驗PSA（前列腺特異性抗原）是一個分子量大約為34000道爾頓的糖蛋白。在正常的、良性肥大的和惡性變的前列腺組織內以及前列腺液和精液內均可發現PSA。血清PSA作為前列腺癌診斷指標時，具有較好診斷靈敏度，但存在診斷特異度較低問題，目前，不推薦將PSA檢測作為對普通人群或對無癥狀患者的癌癥篩查項目，也不應當作為判斷是否存在惡性疾病的一個絕對性依據。有必要對臨床使用的血清PSA診斷前列腺癌的效能進行評價。PSA（前列腺特異性抗原）是一個分子量大約為34000道爾實驗目的本實驗項目是如何評價定量檢測項目對疾病診斷價值。本實驗以血清PSA定量測定為例，評價血清PSA對前列腺癌診斷價值。實驗目的本實驗項目是如何評價定量檢測項目對疾病診斷價值。本實實驗原理對選擇的納入研究對象的患者采取血液，進行PSA定量檢測；對納入研究對象的患者采取前列腺組織穿刺病理檢查，將研究對象分為前列腺癌組和前列腺增生組。根據PSA定量檢測結果制作ROC曲線，根據不同cutoff值，評價其診斷的的準確性（靈敏度、特異度、診斷準確度等）和有效性（陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比、陰性似然比）。實驗原理對選擇的納入研究對象的患者采取血液，進行PSA定量檢臨床診斷試驗結果與患病情況的關系診斷試驗分定性試驗和定量試驗。定性試驗的結果分為陽性和陰性結果定量試驗結果也可根據臨床診斷截斷值轉化為陽性和陰性結果。臨床診斷試驗結果與患病情況的關系診斷試驗分定性試驗和定量試驗試驗結果與疾病的關系真陽性（truepositiveTP）假陽性（falsepositiveFP）真陰性（truenegativeTN）假陰性（falsenegativeFN）

罹患疾病情況

患病健康試

陽性

TP(a)FP(b)驗

陰性

FN(c)TN(d)試驗結果與疾病的關系真陽性（truepositive疾病診斷的金標準金標準（goldstandard）：是指通過活檢、尸檢、外科手術、隨訪等所作出的決定性診斷。診斷試驗：是指一般檢查方法，具有費用低，操作方便，對病人無損害，快速等優點。疾病診斷的金標準金標準（goldstandard）：是指診斷試驗性能評價指標

包括準確性和有效性兩方面的指標：準確性的指標：靈敏度與特異度等。有效性的指標：預告值和似然比等。診斷試驗性能評價指標包括準確性和有效性兩方面的指標：準確度評價指標

1.診斷靈敏度（sensitivity,Se）又稱敏感度、敏感性，指在患病者中，應用該診斷試驗檢查得到陽性結果的百分比。反映診斷試驗正確識別患病者的能力,該值愈大愈好。

靈敏度＝×100%

＝×100%

患病

TP(a)FP(b)

FN(c)TN(d)準確度評價指標1.診斷靈敏度（sensitivity2.診斷特異度(specificity,Sp)

又稱特異性，指在非某病者中，應用該試驗獲得陰性結果的百分比。反映正確鑒別非患者的能力，該值愈大愈好。

特異度＝×100%

＝×100%

健康TP(a)

FP(b)FN(c)

TN(d)2.診斷特異度(specificity,Sp)3.診斷準確度（accuracy，AC）

是指所有試驗個體中，診斷試驗能準確劃分患者和非患病者的百分比。反映診斷試驗正確診斷患者與非患者的能力。

診斷準確度＝×100%

＝×100%TP(a)FP(b)FN(c)TN(d)3.診斷準確度（accuracy，AC）試劑與器材用于定量PSA檢測的相應儀器與試劑。試劑與器材用于定量PSA檢測的相應儀器與試劑。操作步驟確定研究對象的納人排除標準：納入以前列腺增生為癥狀就診于本院泌尿外科的患者。排除膀胱炎癥和膀胱癌患者。確定金標準：采用前列腺組織穿刺病理檢查，根據病理結果將研究對象分為前列腺癌組和前列腺增生組。確定抽樣方法和樣本含量的確定估計：采用簡單隨機抽樣。根據檢驗水準α取值、患病率和允許誤差的要求，計算試驗所需要的病例數。操作步驟確定研究對象的納人排除標準：納入以前列腺增生為癥狀標本的采集與檢測：患者均于前列腺檢查前抽取非抗凝靜脈血，離心5min分離血清，測定血清PSA含量。測量采用單盲原則，在未知被測標本所代表患者的確診診斷的前提下完成所有的檢測工作。標本的采集與檢測：患者均于前列腺檢查前抽取非抗凝靜脈血，離心結果計算將病理檢查結果和PSA定量檢測結果分別輸入SPSS13.0軟件ROCCurve分析的statevaribale應變量(二分類變量)和Testvariable自變量(連續型變量)，Valueofstatevaribale中設定二分類變量的臨界點。運行結果：（1）ROC曲線,可直觀地看到曲線形狀;（2）areaunderthecurve：曲線下方的面積,包括面積值,顯著性分析,置信區間;（3）Coordinatesofthecurve：ROC曲線各點對應的靈敏度和誤判率。制作的ROC曲線。結果計算將病理檢查結果和PSA定量檢測結果分別輸入SPSS1計算診斷效能評價指標：根據臨床診斷需求，確定臨床診斷截斷值，再確定:診斷準確性評價指標診斷靈敏度、診斷特異性和診斷特異性等診斷有效性評價指標陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比和陰性似然比等結果計算計算診斷效能評價指標：結果計算實驗結果根據實驗結果，正確評價在本院使用PSA定量檢測對前列腺癌的診斷價值？實驗結果思考題

如何保證實驗過程中血清PSA定量檢測結果一致性和準確性？如何制作ROC曲線？溫州醫學院陶志華思考題如何保證實驗過程中血清PSA定量檢測結果一致性和準確病案討論

腫瘤免疫學檢測病案討論

腫瘤免疫學檢測某患者，男，38歲。乙型肝炎病史十年，因急性黃疸收治入院，入院后當天就進行血漿置換治療。實驗室檢查為：病案討論一某患者，男，38歲。乙型肝炎病史十年，因急性黃疸收治入院，實驗室檢測結果檢查時間血清學檢查項目AFP（ng/ml）Alb（g/L）T-Bil(μmol/L)D-Bil(μmol/L)I-Bil(μmol/L)ALT（U/L）入院時28.017.5238.7237.31.41680.4入院第2天47.222.3214.9213.11.81370.9入院第4天68.826.4147.5145.42.1860.9入院第7天112.729.287.484.92.5234.9參考范圍<20.035.0-52.00-20.00-6.83.0-15.05.0-55.0實驗室檢測結果檢查血清學檢查項目AFPAlbT-BilD-B問題該患者初步臨床診斷是什么？依據是什么？患者血清AFP結果變化如何解釋？是實驗室檢測誤差所致還是患者體內真實變化？患者血清AFP測定結果變化預示患者病情變化如何？是病情惡化還是病情好轉？為什么？溫州醫學院陶志華問題該患者初步臨床診斷是什么？依據是什么？溫州醫學院

病案討論二某患者，男，65月，因大便硬結，便秘，小便不暢而且次數增多而就診，醫生進行常規體檢后，開了檢驗醫囑，檢查結果為：血常規結果正常，肝功能和腎功能檢查項目結果也正常，但血清總PSA為24.5ng/ml(參考范圍為<4.0ng/ml),血清CEA為2.1ng/ml(參考范圍為<5.0ng/ml)。行前列腺組織活檢結果為：沒檢到前列腺癌細胞。該患者一個月后，在同一家醫院檢驗科復查結果為：血清總PSA為3.2ng/ml,血清CEA為1.6ng/ml。病案討論二某患者，男，65月，因大便硬結，便秘，小便不暢而問題為什么血清總PSA檢測結果不一致？第一次血清總PSA結果升高可能原因是什么？影響血清總PSA測定結果因素有哪些？

該患者下步應該進行哪些檢查或隨訪？溫州醫學院陶志華問題為什么血清總PSA檢測結果不一致？第一次血清總P腫瘤免疫學檢驗準確性的指標靈敏度與特異度等課件概述腫瘤免疫學檢驗主要涉及腫瘤免疫學診斷和腫瘤患者免疫功能狀態的評估。而目前臨床上用于腫瘤免疫學診斷項目主要是腫瘤標記物檢測，但目前使用腫瘤標記物都是腫瘤非特異性標記物，不僅由腫瘤細胞產生，存在腫瘤患者血液和體液中；也可以正常體細胞產生，健康者血液和體液中也會存在一定量腫瘤標記物，因此，如果將腫瘤標記物作為腫瘤診斷指標時，對臨床上使用的腫瘤標記物進行生物參考區間評價和診斷性能評價就顯得非常重要，本單元主要以AFP和PSA為例以達到舉一反三作用。概述腫瘤免疫學檢驗主要涉及腫瘤免疫學診斷和腫瘤患者免疫功能實驗一

血清AFP參考區間建立實驗實驗一

血清AFP參考區間建立實驗

實驗室應為檢驗項目提供可靠的參考區間，才能使臨床對健康普查者的檢驗結果作出判斷，對病人檢驗結果有大致的了解，發揮檢驗報告的作用。因此獲得檢驗項目可靠的參考區間是實驗室的重要任務。參考區間的評價一般包括參考區間的建立和參考區間的驗證實驗。

實驗室應為檢驗項目提供可靠的參考區間，才能使臨床對健康普查實驗目的掌握血清AFP參考區間建立實驗的原理和方法學，以ModularAnalyticsE170自動電化學發光免疫分析系統測定AFP參考區間的建立流程為例加以說明。實驗目的掌握血清AFP參考區間建立實驗的原理和方法學，以Mo實驗原理先確定AFP參考區間建立時的納入人群的標準，選擇參考個體，按該項目的檢測要求收集標本并在檢測系統性能良好的狀態下進行AFP濃度的檢測，收集檢測結果，統計分析，確定化學發光免疫分析系統AFP測定的參考區間。實驗原理先確定AFP參考區間建立時的納入人群的標準，選擇參考試劑與器材選用與檢測儀器相配套的試劑、校準品及其他輔助試劑。按照納入人群的標準，選擇參考人群的新鮮血清標本。試劑與器材選用與檢測儀器相配套的試劑、校準品及其他輔助試劑。操作步驟根據文獻和實驗研究，總結對該項目檢測結果產生的生物變異和分析干擾的因素，供選擇參考個體時用。確定參考個體的選擇原則（或排除非參考個體的原則），編寫與之對應的調查表。依據調查表和其他有關記錄，挑選候選的參考個體。應按照項目在臨床使用的要求選擇參考個體，在選擇參考個體對象時，要兼顧各年齡段，同時應考慮是否有分組的必要（最常見的是分年齡組和性別組）。依據排除原則，剔去不符要求的候選對象。操作步驟根據文獻和實驗研究，總結對該項目檢測結果產生的生物變將采集標本前和采集時對受檢查的要求，詳細告訴各個受檢參考個體，做好準備，要求予以配合。規范地采集標本，做好分析前的標本預處理。按照相應規程做好標本采集、處理、運送和保存，此外，還應考慮標本采集時的環境條件，標本采集者技術熟練要求和服務態度等。在良好的控制條件下，用事先指定的分析方法對標本進行檢測，獲得參考值結果。分析樣品的檢驗方法應有方法學可靠性評價，測定過程有完整質量控制措施將采集標本前和采集時對受檢查的要求，詳細告訴各個受檢參考個體結果計算和分析繪制分布圖，了解數據的分布特性。若數據呈高斯正態分布，或者數據經轉換后亦呈高斯分布，可按士1.96S表示95％數據分布范圍，或者士2.58S表示99％分布范圍等確定參考限和參考區間。結果計算和分析繪制分布圖，了解數據的分布特性。若數據呈高斯參考對象群體值的特定百分數（通常是95％）非參數和參數分析：是否正態分布確定參考范圍的最小樣本量隨機至少120個觀察對象參考對象群體值的特定百分數（通常是95％）注意事項

為確保參考范圍數據的可靠性，建議至少取120個參考值數據，若還需分組統計，則每個分組應有120個數據。數據中的疑似離群點的判斷，建議將疑似離群點和其相鄰點的差值D和數據全距R相除，D/R若大于等于1/3考慮為離群點。若有2個或以上疑似離群點，可將最小的疑似離群點作如上處理，若都大于1/3，則所有疑似點都剔去；若都小于1/3，則保留所有數據。若有離群點被剔除后，應即將其他數據補上。若數據不呈高斯正態分布，則可用非參數法處理。最常見的是以百分位數法確定2.5％和97.5％位數的參考限，以此確定95％參考區間。注意事項

為確保參考范圍數據的可靠性，建議至少取120個參考方法評價建立參考區間是實驗室開展新的檢驗項目前必然要進行的一項工作，但由于其需要標本例數多，對人群的納入標準要求嚴格；大多實驗室參照試劑說明書、教材、或其它權威資料轉移為本實驗室的參考區間，但需對此類選用的參考區間進行驗證評審。采用簡單的方法予以證實，如選取20位健康者，有90%以上的測定結果在參考區間內，即說明實驗室選用的參考區間有效。方法評價建立參考區間是實驗室開展新的檢驗項目前必然要進行的一思考題

請設計建立AFP參考區間的抽樣人群的納入標準？溫州醫學院陶志華思考題

請設計建立AFP參考區間的抽樣人群的納入標準？溫州醫實驗二

血清PSA診斷前列

腺癌的性能評價實驗實驗二

血清PSA診斷前列

腺癌的性能評價實驗PSA（前列腺特異性抗原）是一個分子量大約為34000道爾頓的糖蛋白。在正常的、良性肥大的和惡性變的前列腺組織內以及前列腺液和精液內均可發現PSA。血清PSA作為前列腺癌診斷指標時，具有較好診斷靈敏度，但存在診斷特異度較低問題，目前，不推薦將PSA檢測作為對普通人群或對無癥狀患者的癌癥篩查項目，也不應當作為判斷是否存在惡性疾病的一個絕對性依據。有必要對臨床使用的血清PSA診斷前列腺癌的效能進行評價。PSA（前列腺特異性抗原）是一個分子量大約為34000道爾實驗目的本實驗項目是如何評價定量檢測項目對疾病診斷價值。本實驗以血清PSA定量測定為例，評價血清PSA對前列腺癌診斷價值。實驗目的本實驗項目是如何評價定量檢測項目對疾病診斷價值。本實實驗原理對選擇的納入研究對象的患者采取血液，進行PSA定量檢測；對納入研究對象的患者采取前列腺組織穿刺病理檢查，將研究對象分為前列腺癌組和前列腺增生組。根據PSA定量檢測結果制作ROC曲線，根據不同cutoff值，評價其診斷的的準確性（靈敏度、特異度、診斷準確度等）和有效性（陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比、陰性似然比）。實驗原理對選擇的納入研究對象的患者采取血液，進行PSA定量檢臨床診斷試驗結果與患病情況的關系診斷試驗分定性試驗和定量試驗。定性試驗的結果分為陽性和陰性結果定量試驗結果也可根據臨床診斷截斷值轉化為陽性和陰性結果。臨床診斷試驗結果與患病情況的關系診斷試驗分定性試驗和定量試驗試驗結果與疾病的關系真陽性（truepositiveTP）假陽性（falsepositiveFP）真陰性（truenegativeTN）假陰性（falsenegativeFN）

罹患疾病情況

患病健康試

陽性

TP(a)FP(b)驗

陰性

FN(c)TN(d)試驗結果與疾病的關系真陽性（truepositive疾病診斷的金標準金標準（goldstandard）：是指通過活檢、尸檢、外科手術、隨訪等所作出的決定性診斷。診斷試驗：是指一般檢查方法，具有費用低，操作方便，對病人無損害，快速等優點。疾病診斷的金標準金標準（goldstandard）：是指診斷試驗性能評價指標

包括準確性和有效性兩方面的指標：準確性的指標：靈敏度與特異度等。有效性的指標：預告值和似然比等。診斷試驗性能評價指標包括準確性和有效性兩方面的指標：準確度評價指標

1.診斷靈敏度（sensitivity,Se）又稱敏感度、敏感性，指在患病者中，應用該診斷試驗檢查得到陽性結果的百分比。反映診斷試驗正確識別患病者的能力,該值愈大愈好。

靈敏度＝×100%

＝×100%

患病

TP(a)FP(b)

FN(c)TN(d)準確度評價指標1.診斷靈敏度（sensitivity2.診斷特異度(specificity,Sp)

又稱特異性，指在非某病者中，應用該試驗獲得陰性結果的百分比。反映正確鑒別非患者的能力，該值愈大愈好。

特異度＝×100%

＝×100%

健康TP(a)

FP(b)FN(c)

TN(d)2.診斷特異度(specificity,Sp)3.診斷準確度（accuracy，AC）

是指所有試驗個體中，診斷試驗能準確劃分患者和非患病者的百分比。反映診斷試驗正確診斷患者與非患者的能力。

診斷準確度＝×100%

＝×100%TP(a)FP(b)FN(c)TN(d)3.診斷準確度（accuracy，AC）試劑與器材用于定量PSA檢測的相應儀器與試劑。試劑與器材用于定量PSA檢測的相應儀器與試劑。操作步驟確定研究對象的納人排除標準：納入以前列腺增生為癥狀就診于本院泌尿外科的患者。排除膀胱炎癥和膀胱癌患者。確定金標準：采用前列腺組織穿刺病理檢查，根據病理結果將研究對象分為前列腺癌組和前列腺增生組。確定抽樣方法和樣本含量的確定估計：采用簡單隨機抽樣。根據檢驗水準α取值、患病率和允許誤差的要求，計算試驗所需要的病例數。操作步驟確定研究對象的納人排除標準：納入以前列腺增生為癥狀標本的采集與檢測：患者均于前列腺檢查前抽取非抗凝靜脈血，離心5min分離血清，測定血清PSA含量。測量采用單盲原則，在未知被測標本所代表患者的確診診斷的前提下完成所有的檢測工作。標本的采集與檢測：患者均于前列腺檢查前抽取非抗凝靜脈血，離心結果計算將病理檢查結果和PSA定量檢測結果分別輸入SPSS13.0軟件ROCCurve分析的statevaribale應變量(二分類變量)和Testvariable自變量(連續型變量)，Valueofstatevaribale中設定二分類變量的臨界點。運行結果：（1）ROC曲線,可直觀地看到曲線形狀;（2）areaunderthecurve：曲線下方的面積,包括面積值,顯著性分析,置信區間;（3）Coordinatesofthecurve：ROC曲線各點對應的靈敏度和誤判率。制作的ROC曲線。結果計算將病理檢查結果和PSA定量檢測結果分別輸入SPSS1計算診斷效能評價指標：根據臨床診斷需求，確定臨床診斷截斷值，再確定:診斷準確性評價指標診斷靈敏度、診斷特異性和診斷特異性等診斷有效性評價指標