支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作2支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作目錄CONTENTS123BALF標本保存運送形態學檢查病原學檢查3支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作支氣管肺泡灌洗液（BALF）

BALF是通過支氣管鏡向支氣管肺泡內注入生理鹽水并進行抽吸，收集肺泡表面液體，通過檢查細胞成分、可溶性物質和感染性病原體，診斷肺部相關疾病、評價療效和預后。

標本包括：BALF和保護性毛刷（PSB）

4支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作適應癥肺部感染，特別是免疫受損患者肺部機會性感染的病原體診斷。肺部不明原因陰影、疑似肺部感染或需與其他疾病鑒別。5支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF采集BALF收集：由專科醫生采集。用于病原學分析的標本需用無菌容器收集；細胞學分析需選擇塑料容器或硅化的玻璃容器以減少細胞的黏附。送檢量至少5毫升（10-20毫升最佳）。6支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作2023年1月6日7檢測目的轉運條件保存條件檢測方法細菌無菌容器，室溫，≤2h

4℃，≤24h

革蘭染色定量培養奴卡菌革蘭染色弱抗酸染色培養軍團菌培養（BCYE營養培養基、GVPC及MWY篩選培養基）核酸檢測抗原檢測（DFA）真菌無菌容器，室溫，≤2h

4℃，≤24h

KOH壓片、熒光白染色真菌培養曲霉KOH壓片或熒光白染色真菌培養半乳甘露聚糖抗原試驗（GM）肺孢子菌六胺銀染色核酸檢測抗原檢測隱球菌墨汁染色真菌培養隱球菌莢膜多糖抗原分枝桿菌無菌容器，室溫，≤2h4℃，≤24h涂片抗酸染色(萋-尼染色、熒光染色)分枝桿菌培養核酸檢測（XpertMTB/RIF）病毒病毒轉運培養基，室溫，≤2h4℃，≤5d；-70℃，?5d核酸檢測病毒抗原檢測（DFA、膠體金法）分離培養寄生蟲無菌容器，室溫，≤2h4℃，≤24h直接鏡檢核酸檢測抗原檢測（ELISA、ICT）支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本運送與保存室溫條件下2h內送至實驗室。若延遲送檢，可將標本放置于2～8℃保存，但不可超過24h。8支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF臨床應用9支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF診斷的疾病彌漫性間質性肺病2314職業性肺部疾病延遲符5肺部感染肺部腫瘤兒科肺部疾病10支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作延遲符形態學檢查（細胞分類）11支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作12支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作13支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作14支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作15支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作17支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作纖毛上皮細胞油鏡18支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作細胞學分類的臨床意義中性粒細胞比例增高為主時，見于各種細菌或真菌等感染；淋巴細胞比例增高為主時，見于病毒性肺炎、結節病或過敏性肺炎。嗜酸粒細胞比例增高為主時，見于嗜酸粒細胞浸潤癥、支氣管哮喘等。19支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作20支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作延遲符病原學檢查21支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測顯微鏡檢查

革蘭染色及BALF質量評價：建議使用細胞離心機制片，取適量BALF標本600～1000r/min離心10～20min,進行革蘭染色。低倍鏡下若鱗狀上皮細胞占全部細胞比例>1%，提示標本被上呼吸道分泌物污染；柱狀上皮細胞>5%時,提示BALF并非來自于遠端氣腔。觀察革蘭染色結果及白細胞情況，如果見到噬菌現象，須報告吞噬細菌的中性粒細胞占或全部中性粒細胞的比例，通常數值為5%時可作為肺炎診斷的閾值。22支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測抗酸染色：

用于檢測分枝桿菌，弱抗酸染色可用于檢測奴卡菌。氫氧化鉀(KOH)壓片：

用于真菌，特別是絲狀真菌的形態學觀察。墨汁染色：

用于隱球菌的檢測。六胺銀染色：

常用于肺孢子菌的檢測。免疫熒光顯微鏡：

可用于軍團菌、肺孢子菌及病毒的檢測。23支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測一般細菌培養（定量培養）：（1）渦旋震蕩BALF標本30～60s。（2）定量接種：用經校準的加樣器（或定量接種環）取10μl的BALF標本，分別點種于血平板和巧克力平板上且密集劃線，有條件時最好采用滅菌L型玻棒涂布平板。還可取100μlBALF接種于麥康凱或中國藍培養基。（3）孵育：將接種的平板放在二氧化碳培養箱（5%～10%CO2）中，35℃培養48h。24支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測一般細菌培養（定量培養）：（4）結果判定：分別對不同形態的菌落進行計數，乘上稀釋倍數即為此細菌的菌落數。菌落計數BALF≥104CFU/ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時認為是可能的病原菌，但不能機械使用該閾值，還要結合患者的實際情況及有無使用抗菌藥物等因素綜合判斷。

25支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測真菌培養：BALF標本1500～1800×g，離心15～20min，沉淀物混勻后接種于沙保平板上，30℃和35℃孵育7d，懷疑雙相真菌時應使用帶螺帽的培養基，孵育6周。特殊病原菌培養：BALF離心后的沉淀物還可用于分枝桿菌、軍團菌及病毒等的培養。26支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測核酸檢測：

用于病毒、軍團菌、肺孢子菌或分枝桿菌等的檢測。真菌抗原：

半乳甘露聚糖試驗（GM試驗）主要用于曲霉的檢測；目前有關BALF檢測隱球菌莢膜抗原的研究證據較少，可考慮作為診斷的補充手段。27支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作BALF標本病原體實驗室檢測渦旋震蕩30～60s沉淀物混勻后特殊病原菌培養：分枝桿菌真菌軍團菌病毒等真菌抗原：半乳甘露聚糖隱球菌莢膜多糖抗原BALF接種10μlBALF上清液顯微鏡檢查：不染色鏡檢革蘭染色抗酸染色弱抗酸染色六胺銀染色墨汁染色KOH壓片免疫熒光染色核酸檢測：病毒軍團菌肺孢子菌分枝桿菌等定量培養適量BALF標本600~1000r/min離心10~20min剩余的BALF標本1500～1800×g離心15～20min革蘭染色標本質量評估28支氣管肺泡灌洗液相關實驗室操作臨床意義微生物學涂片檢查：BALF中的沉淀物進行革蘭染色、抗酸染色及真菌的特殊染色，對細菌、分枝桿菌、真菌及寄生蟲的檢出有較大意義。微生物學培養：在嚴格無菌操作下采集的BALF進行直接接種培養或取其沉淀物進行培養，對檢測細菌及真菌具有較大的臨床意義，BALF細菌培養計數≥104CFU/ml或無菌防污染BALF≥103CFU/ml時具有臨床診斷意義。灌洗液中GM測定：取5~10ml灌洗液置于無菌容器中