新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南（第三版）附件：新型冠狀病毒檢測標本送檢表比較成熟、易于實施的核酸檢測方法。比較成熟、易于實施的核酸檢測方法。一、標本采集一、標本采集（一）采集對象。新型冠狀病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集其他需要進一步篩查檢測的環境或生物材料（如溯源分析）（一）采集對象。新型冠狀病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集其他需要進一步篩查檢測的環境或生物材料（如溯源分析）培訓（培訓合格）和具備相應的實驗技能。采樣人員個人防護裝備personal培訓（培訓合格）和具備相應的實驗技能。采樣人員個人防護裝備personalprotectiveequipmnPPE）N95及以上防護口罩、護目鏡、連體防護服、雙層乳膠手套、防水靴套；如果接觸了患3.3.44．根據實驗室檢測工作的需要，可結合病程多次采樣。（三）標本采集種類。（三）標本采集種類。（包括上呼吸道標本和下呼吸道標本）；重癥病例優先采集下呼吸道標本（如支氣管或肺泡灌洗液等）；出現眼部感染癥狀的病例，需采集眼結膜拭子標本；出現腹（包括上呼吸道標本和下呼吸道標本）；重癥病例優先采集下呼吸道標本（如支氣管或肺泡灌洗液等）；出現眼部感染癥狀的病例，需采集眼結膜拭子標本；出現腹采集。其他研究材料依據設計需求采集。其他研究材料依據設計需求采集。標本種類：標本種類：11．上呼吸道標本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物等。22液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標本。3737EDTA抗凝劑的真空釆血管采集血液。盡早（盡早（7）3～4標本不進行核酸檢測。標本不進行核酸檢測。55本。6．便標本：出現腹瀉癥狀的患者需采集便標本。6．便標本：出現腹瀉癥狀的患者需采集便標本。（四）標本采集方法。（四）標本采集方法。12123ml（也可使用等滲鹽溶液、組織培養液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。2121拭子以同樣的方法采集另一側鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。3氣管，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并3氣管，接通負壓，旋轉收集器頭部并緩慢退出，收集抽取的粘液，并3ml1（50ml上來替代收集器）。443ml50ml5（5（30cm深處），注入5ml1（亦可用50ml）。6部插入右肺中葉或左肺舌段的支管，將其頂端契入支氣管分支開口，6部插入右肺中葉或左肺舌段的支管，將其頂端契入支氣管分支開口，30~50ml100~250ml300。7．血液標本：建議使用含有EDTA抗凝劑的真空釆血管采集血5ml7．血液標本：建議使用含有EDTA抗凝劑的真空釆血管采集血5ml301500～2000rpm105ml301500～2000rpm離心10993-5ml；1010進入采樣管中，尾部棄去，懸緊管蓋。其他材料：依據設計需求規范采集。其他材料：依據設計需求規范采集。（五）標本包裝。（五）標本包裝。11本采集管里，擰緊。容器外注明樣本編號、種類、姓名及采樣日期。22標準。3.涉及外部標本運輸的，應根據標本類型，按照A類或B類感染性物質進行三層包裝。3.涉及外部標本運輸的，應根據標本類型，按照A類或B類感染性物質進行三層包裝。（六24（六244℃保存；（冰箱暫存）43（七）標本送檢。（七）標本送檢。用干冰等制冷方式進行保藏。用干冰等制冷方式進行保藏。11．上送標本：各?。ㄗ灾螀^、直轄市）首例檢測結果陽性、疑病預防控制所進行檢測復核，并附樣本送檢單（見附件）病預防控制所進行檢測復核，并附樣本送檢單（見附件）2．病原體及標本運輸2．病原體及標本運輸2.12.1屬于AUN2814屬于AUN2814件Doc9284《危險品航空安全運輸技術細則》的PI602BUN3373，包裝符合國際民航組織文件Doc9284PI650分類包裝要求；通過其他交通工具運輸的可參照以上標準包裝。類的高致病性病原微生物菌（毒）類的高致病性病原微生物菌（毒）（原衛生45）辦理《準運證書》。2.22.2國際相關要求。國際相關要求。2.32.3的來源、種類、數量，編號登記，采取有效措施確保毒株和樣本的安全，嚴防發生無用、惡意使用、被盜、被搶、丟失、泄露等事件。的來源、種類、數量，編號登記，采取有效措施確保毒株和樣本的安全，嚴防發生無用、惡意使用、被盜、被搶、丟失、泄露等事件。二、新型冠狀病毒的實驗室檢測二、新型冠狀病毒的實驗室檢測新型冠狀病毒感染的常規檢測方法是通過實時熒光RT-PCR鑒對新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框新型冠狀病毒感染的常規檢測方法是通過實時熒光RT-PCR鑒對新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框1a（openreadingframeORF1ab）和核殼蛋白nucleocapsidprotenN）。22（ORF1ab、N）特異性實時熒光RT-PCR檢測結果均為陽性。如果出現單個靶標陽性的檢測結果，則需要重新采樣，重新檢測。性的因素，包括：樣本質量差，比如口咽等部位的呼吸道樣本；樣本收集的過早或過晚；沒有正確的保存、運輸和處理樣本；技術本身存在的原因，如病毒變異、PCR抑制等。性的因素，包括：樣本質量差，比如口咽等部位的呼吸道樣本；樣本收集的過早或過晚；沒有正確的保存、運輸和處理樣本；技術本身存在的原因，如病毒變異、PCR抑制等。三、實時熒光RT-PCR三、實時熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸（一）目的。規范實時熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核（一）目的。規范實時熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的工作程序，保證實驗結果的正確可靠。（二）范圍。適用于實時熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒（二）范圍。適用于實時熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸。（三）職責。（三）職責。復核。復核。（四）樣本接收和準備。核對被檢樣本姓名、性別、年齡、編號及檢測項目等；待檢樣本的狀態如有異常，需注明；待檢樣本應存放于-70℃冰箱保存。（四）樣本接收和準備。核對被檢樣本姓名、性別、年齡、編號及檢測項目等；待檢樣本的狀態如有異常，需注明；待檢樣本應存放于-70℃冰箱保存。（五）檢測項目。（五）檢測項目。（RT-PCR方法）推薦選用針對新型冠狀病毒的ORF1ab、N基因區域的引物和探針。推薦選用針對新型冠狀病毒的ORF1ab、N基因區域的引物和探針。靶標一（ORF1ab靶標一（ORF1ab正向引物（F）：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA正向引物（F）：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA反向引物（R反向引物（R）：ACGATTGTGCATCAGCTGA熒光探針（P熒光探針（P）：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'靶標二（N靶標二（N正向引物（F）：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT正向引物（F）：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT反向引物（R反向引物（R）：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG熒光探針（P熒光探針（P）：5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'核酸提取和實時熒光RT-PCR反應體系及反應條件參考相關廠核酸提取和實時熒光RT-PCR反應體系及反應條件參考相關廠家試劑盒說明。Ct。陽性：Ct陽性：Ct37-40Ct注：如果用的是商品化試劑盒，則以廠家提供的說明書為準。注：如果用的是商品化試劑盒，則以廠家提供的說明書為準。四、病原生物安全實驗活動要求四、病原生物安全實驗活動要求原微生物進行管理，具體要求如下：原微生物進行管理，具體要求如下：（一）病毒培養：指病毒的分離、培養、滴定、中和試驗、活?。ㄒ唬┎《九囵B：指