安徽中醫藥大學藥學院本科生畢業論文（設計）開題報告表學生姓名：李超年級專業：11中藥（1）班學號：11311020指導教師：戴敏職稱/職務：教授畢業論文（設計）題目：丹皮酚對ApoE基因敲除小鼠早期動脈粥樣硬化抗氧化作用的研究立題依據（課題研究的目的與意義及國內外研究現狀）：動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）已成為嚴重威脅人們生命安全的重大疾病。動脈粥樣硬化病變形成機制復雜，其中炎癥與氧化應激被認為是AS的核心發病機制，參與AS發生、發展乃至惡化的全過程。氧化應激通過氧化修飾LDL，刺激組織因子的表達，誘導平滑肌細胞和巨噬細胞增殖，激活基質金屬蛋白酶和基質降解酶等多方面參與AS的進程。［1-2］SOD、MDA以及0X-LDL三個指標能從不同的方面反映氧化應激程度，SOD反映的是機體清除氧自由基的能力［3］，MDA反映的是細胞受氧自由基損傷的程度⑷，ox-LDL在參與泡沫細胞的形成，誘導平滑肌細胞增生、促進血小板粘附聚集、引起血栓形成等多個方面發揮重要的作用［5］。NO是檢測血管內皮功能的重要的血清指標之一［6］。因此本研究從氧化應激的角度出發，蹄選了具有代表性的MDA、SOD、OX-LDL等作為氧化應激的研究指標,探討丹皮酚對AS的抗氧化作用。丹皮酚（paeonol）為毛茛科植物牡丹的根皮的活性成分之一，具有抗炎、抗氧化、心血管保護作用等藥理作用，臨床多用于心腦血管、炎癥及免疫系統等疾病［7］。大量文獻表明丹皮酚可通過調節脂質代謝、抗脂質過氧化反應、保護動脈內皮細胞等途徑達到抗動脈粥樣硬化作用［8-9］。丹皮酚對早期動脈粥樣硬化具有一定的治療作用，其作用可能與減輕自由基的損傷、保護血管內皮細胞有關，可增強SOD活性［10］、減少MDA及ox-LDL水平，抑制健康人血清LDL的體外氧化修飾反應［11］。而丹皮酚分子上的酚羥基也與抗氧化作用有關。從病因學和病理學的研究所知，AS是受多種因素影響所形成的一類復雜的病理性變化，目前關于中醫藥治療AS的研究成為熱點。本研究擬以ApoE基因敲除小鼠為實驗對象,建立動脈粥樣硬化動物模型，觀察早期小鼠動脈內粥樣硬化發生、發展等病理生理情況,并觀察丹皮酚對動脈粥樣硬化抗氧化的作用。以AS的“氧化應激作用”為研究方向，觀察ApoE基因敲除小鼠治療前后血脂、脂蛋白、超氧化物歧化酶、丙二醛、氧化型低密度脂蛋白等含量的變化以及主動脈彩超檢査的結果。以期通過該研究明確丹皮酚對早期AS的抗氧化作用。從抗氧化作用方面探討丹皮酚防治AS的作用機理，同時評價其療效。該研究對于發掘丹皮酚在防治AS方面的優勢有非常重要的意義。課題研究內容：1、高脂飲食法復制ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化病理模型；2、測定方法及觀察指標；2.1切片及染色方法：HE染色并光鏡觀察主動脈病理學改變；2.2指標的檢測：采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，硫代巴比妥酸法（TBA）測定MDA含量，酶聯免疫吸附法（ELISA）測定氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）,硝酸還原酶法測NO含量，具體操作按試劑盒說明書進行。課題研究的條件（材料、主要實驗儀器設備等）：1、動物：6~8周齡ApoE基因敲除小鼠、同種屬空白鼠。2、藥物：丹皮酚。用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成適當濃度的混懸液。3、儀器：移液槍、電子分析天平、醫學凈化工作臺、CO2培養箱、低速普通離心機、光學顯微鏡、冰凍切片機、高速離心機、全自動生化分析儀、紫外分光光度計4、試劑：油紅O染料、血清丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒、胎牛血清。研究計劃與進度安排:2015年1月--2月完成相關文獻檢索；定實驗方案，書寫開題報告。2015年2月--4月按照既定實驗方案進行實驗研究。2015年4月--5月整理實驗資料，撰寫結題報告；完成畢業論文。主要參考文獻：徐也魯?動脈粥樣硬化一種慢性炎癥過程[J]?中國動脈硬化雜志,2001,9(2):93-95.LibbyP.Inflammationinatherosclerosis[J].Nature,2002,420:868-874.范黎?食藥用真菌:天然抗氧化劑的重要來源?微生物學通報，2011,38(6):957.陳瑗，周玫?氧化應激一一炎癥在動脈粥樣硬化發生發展中作用研究的新進展.中國動脈硬化雜志,2008,16(10):757-762.徐佳楊?氧化低密度脂蛋白與動脈粥樣硬化的研究[J].安徽醫藥,2011:152)228-230.⑹徐倩，曹凱，周曉慧等.丹皮酚對同型半胱氨酸損傷內皮細胞eNOS表達及NO水平的影響[J]?中成藥,2012,34(12):2286-2301郭齊,李貽奎，王志國等?丹皮酚藥理研究進展[J]?中醫藥信息,2009,26(1):20-24.戴敏,訾曉梅，彭代銀等?丹皮酚抗鵪鶉試驗性動脈粥樣硬化作用[J]?中國中藥雜志,1999,24(8):488-90.戴敏,李后開?丹皮酚對動脈粥樣硬化家兔血管平滑肌細胞增殖的影響[J]?中國藥理學通報,2006,22(5):587-591.王惠，騫秀芳,朱哲等?丹皮酚對動脈粥樣硬化大鼠抗氧化作用研究[J].實用中醫藥雜志,2014,30(11):998-9