分子育種技術(shù)在中國地方豬種選育中的應(yīng)用日期：2012-08-13作者：\o"此看此作者所有的文章"楊曉瓊連林生

來源：《上海畜牧獸醫(yī)通訊》.-2012，（3）.-18-20點(diǎn)擊：141

在動物基因組測序計(jì)劃的推動下，豬的育種技術(shù)已從常規(guī)育種方法過渡到以分子標(biāo)記輔助選擇(Marker-assistedselection，MAS)技術(shù)主導(dǎo)的現(xiàn)代分子選育，朝著快速改變基因型的方向發(fā)展。我國地方豬種因蘊(yùn)藏豐富有益功能基因，日益成為培育優(yōu)庭豬種后代、提高優(yōu)良性狀選擇效率的研究重點(diǎn)。1

分子育種研究的內(nèi)容和特點(diǎn)

傳統(tǒng)育種主要利用表型來推斷基因型、估計(jì)育種值，時(shí)間長、成本高，不能選擇基因型純合的個(gè)體。分子標(biāo)記技術(shù)利用RFLP、RAPD、AFLP、EST、SSR、SCAR以及STS、mtD-NA等標(biāo)記形式，對不同發(fā)育時(shí)期的個(gè)體、器官甚至細(xì)胞作檢測，直接反映DNA的序列差異，標(biāo)記位點(diǎn)豐富，遍及整個(gè)基因組，多態(tài)性高，遺傳穩(wěn)定，不受環(huán)境及基因表達(dá)與否的限制。分子選育通過尋找影響數(shù)量性狀的主效基因或緊密連鎖的基因標(biāo)記，定向篩選滿足特定需求的基因型，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)選育準(zhǔn)確率低的缺點(diǎn)，大大提高選擇的準(zhǔn)確性。

國外對分子標(biāo)記基因的研究非常活躍，已在豬19條染色體中發(fā)現(xiàn)了豐富的DNA多態(tài)性，豬的連鎖圖譜已有超過5000個(gè)標(biāo)記、放射雜交圖譜定位了4000余個(gè)標(biāo)記基因。借助基因圖譜和QTL掃描，鑒別出了許多影響經(jīng)濟(jì)性狀的QTL。2006年豬數(shù)據(jù)庫從93種出版物收集了236個(gè)不同性狀的1263個(gè)基因，2007年有110種出版物確定了1675個(gè)基因位點(diǎn)。到2010年4月，豬的QTL數(shù)據(jù)庫PigQTLdb中已記載了5732個(gè)QTL座位，涉及日增重、背膘厚度和瘦肉率等558種性狀。研究結(jié)果顯示，分子育種與常規(guī)育種相結(jié)合，可大幅提高育種效率和進(jìn)度；加快培育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、抗病、高效的瘦肉型豬，成為現(xiàn)代遺傳育種的研究重點(diǎn)。2

我國地方豬種進(jìn)行分子選育的必要性

我國豬種資源豐富，收入聯(lián)合國糧農(nóng)組織物種多樣性系統(tǒng)的中國豬品種數(shù)目為150個(gè)，約占世界總數(shù)的三分之一。據(jù)2004年11月出版的《中國畜禽遺傳資源狀況》統(tǒng)計(jì)，認(rèn)定的地方豬種有72個(gè)，其中34個(gè)為國家級畜禽遺傳資源保護(hù)品種。地方豬種在生長、胴體和肉質(zhì)等方面具有不同的種質(zhì)特性和性狀差異，大多數(shù)品種繁殖力強(qiáng)、肉質(zhì)鮮美、抗逆性強(qiáng)、肉質(zhì)參數(shù)明顯優(yōu)于國外品種。世界很多著名豬種都有我國地方豬的血統(tǒng)，如公元27～395年古羅馬通過引進(jìn)中國華南豬改良當(dāng)?shù)刎i而育成羅馬豬；18世紀(jì)(明代)英國通過引進(jìn)廣東豬改良本地豬而育成約克夏和巴克夏；現(xiàn)代美國、法國、英國、日本等國都引進(jìn)中國豬種，從而培育出了產(chǎn)仔率高和肉質(zhì)好的優(yōu)良豬種。

中國地方豬種蘊(yùn)藏著豐富的優(yōu)秀基因，不含氟烷敏感基因陰性純合子或頻率極低，天然抗病性、抗應(yīng)激特點(diǎn)與繁殖性能、肉品品質(zhì)相關(guān)基因最受國際關(guān)注，也最具民族特色和國際競爭力，是我國養(yǎng)豬業(yè)持續(xù)發(fā)展的堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)和潛在優(yōu)勢。

我國科學(xué)家在上世紀(jì)90年代初開始豬的基因組研究，用于探索、利用我國地方豬種遺傳資源。吳常信、李寧等(1994)不僅證實(shí)了Rothschild等人的研究結(jié)果，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)促卵泡素β亞基基因是控制豬產(chǎn)仔數(shù)的另-主效基因；1999年利用我國二花臉太湖豬與外國商業(yè)豬種約克夏雜交，構(gòu)建了亞洲最大的資源群，證明了雌激素受體(ESR)基因是一種廣泛存在的、控制豬產(chǎn)仔數(shù)的主效基因；創(chuàng)造性地建立了多種檢測豬高溫應(yīng)激綜合征的診斷技術(shù)；華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)等發(fā)現(xiàn)MC4R基因?qū)ωi的生長和瘦肉率性狀有顯著影響。隨著DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用，極大地促進(jìn)了DNA標(biāo)記輔助技術(shù)的實(shí)用化。

我國地方豬種研究成果的獲得，不僅引起了國際同行的關(guān)注，更有效推動了國內(nèi)家豬的分子選育。從注重提高生長速度、增加胴體瘦肉率等生長和胴體性狀選育到關(guān)注肉質(zhì)性狀選育，研究范圍不斷擴(kuò)大，特別是對產(chǎn)仔數(shù)和早期生長基因研究有了突破性進(jìn)展。通過對重要性狀的基因或主效基網(wǎng)進(jìn)行克隆、測序與定位及功能鑒定，利用不同品種資源的優(yōu)勢互補(bǔ)，已培育出多個(gè)中國特色地方豬種的專門化品系和配套系。近年利用能表達(dá)的融合基因、嵌合體、不同動物蛋白基因的DNA互補(bǔ)等技術(shù)，通過基因轉(zhuǎn)移進(jìn)行生長率、增重等重要生產(chǎn)性狀改良實(shí)踐，開展非常規(guī)性育種性狀(如生產(chǎn)人類藥用蛋白)和遺傳抗性育種研究。3

中國地方豬分子育種研究進(jìn)展

通過定位數(shù)量性狀位點(diǎn)(QTL)，分析候選基因與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)，評估候選基因間的互作和-因多效作用，一些遺傳力較低(如繁殖性狀)、費(fèi)用昂貴(如抗病性)、表型值在發(fā)育前早期難以測定(如瘦肉率)或限性表現(xiàn)(如產(chǎn)奶量)的候選基因，陸續(xù)被發(fā)掘、確認(rèn)(見表1略)，并開始應(yīng)用于育種實(shí)踐，有效提高了我國地方豬種在生長發(fā)育、胴體、肉質(zhì)、繁殖和抗病、毛色相關(guān)育種的選擇效率。

通過表1略可以看出，我國對影響豬的經(jīng)濟(jì)性狀基因研究主要集中在生長、繁殖性狀提高與肉質(zhì)性狀改良方面，抗病性基因研究較少，可能與控制抗病性遺傳受體基因的尋找和確定困難、疫苗研究費(fèi)用高及藥物治療實(shí)驗(yàn)周期長有關(guān)。3.1

功能基因多態(tài)性與生產(chǎn)性狀關(guān)聯(lián)研究3.1.1

生長發(fā)育及胴體性狀相關(guān)基因

中國地方豬生長發(fā)育相關(guān)的候選基因研究主要涉及初生重、生長速度以及日增重等，包括FUTl、GHRH、GHR、POUlFl、Mef2、TG、POMC、IGF、MYOG、CETP、GH、MSTN、CCK和Leptin等功能基因。

宋成義等(2001)研究了GH基因部分突變位點(diǎn)對生產(chǎn)性能的影響，發(fā)現(xiàn)姜曲海豬GH基因ApaI酶切突變位點(diǎn)G4G4基因型個(gè)體0～70日齡日增重與70日齡體重極顯著高于G3G3/G3G4基因型個(gè)體(P<0.01)。柳淑芳等(2002)證明FSHβ基因座位在萊蕪豬種中與控制豬產(chǎn)仔數(shù)的主效基因緊密連鎖，優(yōu)勢基因AA純合子比BB純合子母豬平均每胎多產(chǎn)仔l(wèi).2頭。楊仕柳等(2004)對129頭湘黃豬Atrn基因進(jìn)行檢測分析，發(fā)現(xiàn)BB基因型豬的平均日增重、背膘厚和估測瘦肉率明顯優(yōu)于AB基因型豬。孔路軍等(2005)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，瘦肉型豬血清中Ob基因含量顯著高于脂肪型豬，Ob基因mRNA表達(dá)豐度和kptin濃度呈高度正相關(guān)，兩者與初產(chǎn)母豬血清FSH、LH和總產(chǎn)仔數(shù)成正相關(guān)，與初生個(gè)體重呈負(fù)相關(guān)。劉劍鋒等(2005)發(fā)現(xiàn)中畜黑豬I系H-FABP基因座HH和hh2種基因型間個(gè)體170日齡體重差異顯著。姚國佳等(2006)對仔豬皮下脂肪Leptin的表達(dá)量進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)l～56日齡的仔豬leptin表達(dá)量呈現(xiàn)先高后低的趨勢。趙曉楓等(2007)對金華豬IGF15’調(diào)控序列微衛(wèi)星座位研究發(fā)現(xiàn)274bp和286bp等位基因有利于提高初生重，280bp的等位基因有利于第二胎出生窩重的提高。魯紹雄等(2007)以MYOG基因作為撒壩豬生長性狀的候選基因，研究發(fā)現(xiàn)4月齡體重和45日齡至6月齡日增重有顯著影響，以AB型最高，AA型最低。鞠慧萍(2007)研究蘇太豬FuTl基因，發(fā)現(xiàn)AG型個(gè)體平均繁殖性能均高于GG型個(gè)體，且AG型個(gè)體的1胎斷奶窩重、2胎斷奶窩重、3胎總產(chǎn)仔數(shù)和6胎斷奶窩重顯著高于GG型個(gè)體。魏麟等(2007)證實(shí)湖南黔邵花豬CETP各基因型對生長性狀的影響差異顯著，對膘厚的影響差異極顯著，Aa基因型對初生重、45日齡重、6月齡重、體高、體長等性狀的影響較大，AA基因型較小。金甲正等(201l)研究GH基因多態(tài)性對三江白豬仔豬初生重的影響，證實(shí)AB基因型的仔豬初生重顯著高于AA、BB基因型的仔豬，而AA基因型和BB基因型的仔豬之間差異不顯著(P>0.05)。3.1.2

繁殖性狀相關(guān)基因

中國地方豬繁殖性狀候選基因的研究，尤其是與豬產(chǎn)仔數(shù)性狀相關(guān)的候選基因研究取得了較大進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)基因與豬下丘腦-垂體-卵巢軸分泌的激素及其受體、激活素、抑制素以及早期胚胎發(fā)育有關(guān)。主要有ESR、FSHβ、OPN、PRLR、RBF4、RARG、NCOAl、MTNRlA、GnRH、GnRHR、LH、LHR、FSHR等基因。

從1993年開始，我國科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)了我國特有地方品種二花臉太湖豬(世界上產(chǎn)仔數(shù)最高的品種)存在著產(chǎn)仔數(shù)主效基因，并精細(xì)確定了FSHβ基因是控制豬產(chǎn)仔數(shù)的主效基因，F(xiàn)SHβ基因BB型母豬較AA型母豬總產(chǎn)仔數(shù)平均每胎可多產(chǎn)出1.5～2.0頭，而活產(chǎn)仔數(shù)平均每胎則多產(chǎn)出1.0～l.5頭。杜立新等(2002)對中國優(yōu)良地方豬種萊蕪豬等FSHβ序列分析證明，F(xiàn)SHβ基因座位存萊蕪豬種中與控制豬產(chǎn)仔數(shù)的主效基因緊密連鎖，優(yōu)勢基因AA純合子比BB純合子母豬平均每胎多產(chǎn)仔1.2頭。歐陽克蕙等(2004)采用開放式群體繼代選育法和分子生物技術(shù)結(jié)合選育大約克夏母系，在其核心群內(nèi)淘汰了氟烷敏感基因，頭胎產(chǎn)仔數(shù)增加0.88頭，產(chǎn)活仔數(shù)增加0.80頭，公母豬達(dá)100kg體重時(shí)日齡分別縮短17.14d和14.62d。李永輝(2005)對NCOAl基因與豬產(chǎn)仔性狀的相關(guān)及序列分析，發(fā)現(xiàn)NCOA1基因?qū)Ξa(chǎn)仔性狀有顯著影響，A等位基因?yàn)閮?yōu)勢有利基因。劉衛(wèi)東等(2006)證實(shí)FSHβ基因B等位基因和ESR基因A等位基因具有增加總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)的效應(yīng)，其加性效應(yīng)分別為1.515和1.325。劉蟬娟(2007)對萊蕪黑豬等豬種進(jìn)行ESR和FSHβ基因多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)ESR基因在引進(jìn)豬種中以AA型出現(xiàn)頻率高，地方豬種以BB型頻率高；FSHβ基因在引進(jìn)豬種的基因型中以BB型出現(xiàn)頻率高，地方豬種AA型出現(xiàn)頻率高。張浩等(2007)對藏豬ESR、FSHβ和PRLR3個(gè)繁殖性狀主效基因位點(diǎn)的基因型多態(tài)性研究表明，優(yōu)勢基因型分別為BB型、AB型和AA型。管峰等(2007)分析豬Prepro-orexin基因第62位多態(tài)性位點(diǎn)在二花臉、香豬、淮豬和姜曲海豬4個(gè)品種中的多樣性與不同基因型對二花臉豬產(chǎn)仔數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)各等位基因頻率和基因型頻率在不同品種間存在顯著差異。張冰等(2007)對陸川豬leptin基因進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(SNPs)檢測，發(fā)現(xiàn)了2個(gè)SNPs位點(diǎn)在第3469堿基處發(fā)生T→C突變和3714堿基處發(fā)生T→G突變，其中T3714GSNP對陸川豬產(chǎn)仔數(shù)影響顯著(P<0.05)。劉軒等(2010)通過分析76頭藏豬單基因和多基因合并對繁殖性狀的影響，發(fā)現(xiàn)FSHβ、ESR和PRLR基因不同基因型繁殖性狀差異顯著，多基因聚合效應(yīng)高于單基因效應(yīng)。王國棟(2010)利用微陣列技術(shù)篩選大白豬和二花臉豬經(jīng)產(chǎn)母豬排卵差異表達(dá)基因，發(fā)現(xiàn)EarI多態(tài)位點(diǎn)與所有胎次的總產(chǎn)仔數(shù)(TNB)、產(chǎn)活仔數(shù)(NBA)顯著相關(guān)，基因加性效應(yīng)差異顯著。3.1.3

肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因

肉質(zhì)品質(zhì)好是我國地方豬種突出的優(yōu)良特性之一，也是我國地方豬分子育種選擇的一個(gè)重點(diǎn)。與肉質(zhì)品質(zhì)相關(guān)的基因主要有：CAST、HSL、LPL、CAPN、FABP、MYOD、Hal、RN、MC4R、DGATl等基因。

方美英等(1999)發(fā)現(xiàn)我國地方品種豬不含Hal與RN基因或頻率極低，地方豬種除楓涇豬帶有0.100氟烷基因頻率外，在其他豬種均未發(fā)現(xiàn)。吳楨方(1998)研究發(fā)現(xiàn)HSL和LPL基因可以作為豬背膘厚選擇的分子標(biāo)記。孫博興等(2000)將常規(guī)選擇指數(shù)法與應(yīng)激敏感基因型選擇法相結(jié)合，應(yīng)用于軍牧l號白豬四、五世代核心群的選種中，使應(yīng)激敏感基因頻率下降了12%。雷明剛等。(2001)分析了豬HSL基因外顯子1區(qū)多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)不同品種豬間存在多態(tài)性，通城豬和清平豬AA和AG兩種基因型等位基因A、G的頻率分別是9l.67%、8.33%和89.83%、10.7%。劉桂蘭等(2002)采用PCR、RFLP技術(shù)發(fā)現(xiàn)MC4R基因型頻率在不同品種群體中的分布不同，MC4R基因與豬胸腰椎間膘厚、臀部膘厚、平均背膘、眼肌寬度、眼肌面積、皮率呈顯著性相關(guān)。劉桂蘭等(2003)分析了影響豬瘦肉量的IGF2基因第8內(nèi)含子部分片段酶切位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)B位點(diǎn)酶切未突變個(gè)體均比酶切突變的個(gè)體背膘薄18.28%，肥肉率低22.43%，瘦肉率高8.71%；A位點(diǎn)具有相同的影響趨勢。姜勛平等(2005)用PCR-RFLP方法檢測139頭雜交豬FUTl基因型間肉質(zhì)和胴體性狀差異，發(fā)現(xiàn)AA基因型豬3個(gè)部位肌肉pH值均比AG基因型的高，肌肉系水力、肉色值、瘦肉率顯著高于AG豬(P<0.05)，表明FUTl基因的AA基因型對肉質(zhì)和胴體性狀具有顯著的正遺傳效應(yīng)。朱礪等(2005)分析Myf-6基因在12個(gè)中、外豬種及部分雜交群體中的分布情況，發(fā)現(xiàn)Myf-6基因具有增加胴體瘦肉率和眼肌面積，降低胴體脂肪含量，改善胴體品質(zhì)的遺傳效應(yīng)。肖石軍等(2006)對影響豬生長肥育性狀的MC4R主效基因的研究表明：MC4R基因G等位基因在中國地方豬種中呈高頻分布，GG基因型個(gè)體的胸、腰、臀部膘厚較AA基因型和AG基因型個(gè)體厚，GG基因型個(gè)體的240日齡重、至240日齡平均日增重大于AA基因型個(gè)體．GG基因型個(gè)體的腹脂率高于AA基因型個(gè)體，差異顯著。李長龍等(2006)對梅山豬、蘇太豬研究表明，H-FABP、MCAR、ADDl三個(gè)基因的多態(tài)性分布在不同豬種間存在極顯著差異，這種差異可能是肌內(nèi)脂肪(IMF)或背膘(BF)不同的主要原因之一。耿忠誠(2006)研究了三江白豬H-FABP基因的5’上游區(qū)和第2內(nèi)含子區(qū)的遺傳變異,表明H-FABP基因的單倍體AAddbbHH基因型具有最高的IMF含量。程豐等(2006)利用PCR-RFLP技術(shù)對新榮昌I系豬的CAST基因進(jìn)行多態(tài)性分析，并就限制勝酶切位點(diǎn)多態(tài)性與新榮昌I系豬肉的嫩度、肉色、滴水損失、失水率、大理石紋和肌內(nèi)脂肪含量等肉質(zhì)性狀的相關(guān)性進(jìn)行了分析，首次發(fā)現(xiàn)CAST/MSpI酶切位點(diǎn)DD基因型與肌脂含量IMP存在顯著正相關(guān)；CAST-RsaI酶切位點(diǎn)EF基因型與失水率LAIR存在顯著負(fù)相關(guān)。王剛等(2007)對萊蕪豬和魯萊黑豬的研究發(fā)現(xiàn)，LPL基因是肌內(nèi)脂肪沉積的重要參與者。曲亮等(2008)分析HFABP和HSL基因多態(tài)性對蘇淮豬胴體性狀的影響，證實(shí)H-FABP、HSL基因可以作為胴體性狀的候選基因用于豬的輔助選育。3.1.4

抗病性相關(guān)基因

豬群對大多數(shù)疾病的抗性受微效多基因與環(huán)境共同影響。提高飼養(yǎng)管理水平和應(yīng)用藥物疫苗可有效控制疾病，而利用抗病育種從遺傳上提高畜禽對病原的抗性、加強(qiáng)免疫功能，對控制和消滅傳染病更具治本功效。

受抗病育種潛在經(jīng)濟(jì)效益以及制作人類疾病動物模型誘人前景的影響，尋找與免疫相關(guān)的控制綜合抗病力候選基因，培育整體免疫力高的品種正成為研究熱點(diǎn)。有關(guān)豬抗性基因的研究主要集中在于擾素基因、干擾素受體基因、NRAMP基因、FUT基因、抗流感病毒基因、MHC等位基因、豬大腸桿菌K88和F18受體基因等方面，包括SLA、BPI、NRAMPl、INF、Mxl、RYRl、ETEC等基因。

國內(nèi)近年開始將抗病育種技術(shù)研究應(yīng)用于多種畜禽疾病防治，并在生產(chǎn)實(shí)際中成功克服了豬的應(yīng)激綜合征。晏學(xué)明等(2004)研究表明，杜洛克、長白、大白、漢普夏和皮特蘭5個(gè)豬種在FUTl基因座位存在多態(tài)性，抗性基因型AA分布頻率為0.028，長白豬與大白豬基因型頻率差異極顯著，與皮特蘭豬之間差異顯著。劉鑫等(2006)試驗(yàn)表明，豬13號染色體上與F4受體緊密連鎖的微衛(wèi)星SW458座位AC基因型，在沙子嶺、大白兩個(gè)豬種中無黏附表型，有望作為ETECF4抗性選育的遺傳標(biāo)記。袁樹楷(2007)在榮昌豬BPI基因外顯子3區(qū)段檢測到一個(gè)新的SNP位點(diǎn),認(rèn)為該位點(diǎn)的突變對榮昌豬BPI蛋白功能及機(jī)體天然免疫力有重要影響，可能成為豬機(jī)體抗某些革蘭氏陰性病原菌或其引起的疾病的分子標(biāo)記。張澈君等(2009)采用高通量的基因芯片新技術(shù)篩選豬抗病基因標(biāo)記及其應(yīng)用的研究，發(fā)現(xiàn)SNP基因位點(diǎn)與豬呼吸與繁殖綜合征(豬藍(lán)耳病，PRRS)臨床癥狀顯著相關(guān),并篩選出7個(gè)與豬藍(lán)耳病(PRRS)臨床癥狀相關(guān)的SNP位點(diǎn)標(biāo)記，RYR位點(diǎn)可用于判斷抗應(yīng)激性能；FUTl基因位點(diǎn)可用于判斷大腸桿菌性能；P2-EHMT2可用于判斷抗體高低的標(biāo)記。朱弘焱等(2010)證實(shí)Mxl基因頻率存存差別，荷包豬群體免疫水平高于大白豬，且攜帶更多Mxl抗病性基因。邢鳳(2011)利用基因芯片技術(shù)對豬感染PRRSV后肺臟組織基因表達(dá)譜差異進(jìn)行研究，證實(shí)不同豬種對PRRSV反應(yīng)不同，在被PRRSV感染后，肺組織中表達(dá)的基因具有較大差異。3.2

基因的克隆與功能分析

隨著中國地方豬種基礎(chǔ)研究的深入，一些影響地方豬種優(yōu)良性狀的重要功能基因陸續(xù)被發(fā)掘，并開始應(yīng)用于分子遺傳特性、功能和表達(dá)的研究與生產(chǎn)。

1989年中國農(nóng)業(yè)大學(xué)開始將豬生長激素基因轉(zhuǎn)入湖北豬受精卵中，1990年首批轉(zhuǎn)生長激素基因豬在湖北省農(nóng)科院誕生，經(jīng)過幾個(gè)世代的觀察，其生長速度和飼料利用率分別比同窩非轉(zhuǎn)基因豬提高13.4%和10%。陳福祥等(2004)克隆了廣西巴馬豬、貴州香豬及云南小耳豬DQA基因的cDNA，測序發(fā)現(xiàn)了3個(gè)豬DQA新的等位基因。楊秀芹等(2005)獲得了東北民豬MSTN基因編碼序列，并進(jìn)行了核苷酸測序研究。高鳳山等(2006)以巴馬小型豬為研究對象，從脾臟克隆，其SLA-2等位基因，氨基酸同源性分析顯示與其它SLA-2、SLA-3和SLA-l序列的同源率分別為88.4%～96.4%、88.3%～90.5%和87.7%～92.7%。劉源(2006)對豬DGATl和Ob基因進(jìn)行SNP掃描和多態(tài)性分析，對萊蕪豬DGAT1外顯子6至外顯子8共476bp的序列進(jìn)行了克隆、測序，發(fā)現(xiàn)一個(gè)影響萊蕪豬群體初生重位點(diǎn)基因。趙獻(xiàn)芝(2007)定位微衛(wèi)星標(biāo)記SW2116與豬多趾基因存在連鎖關(guān)系，并對豬多趾候選基因Lmbrl基因進(jìn)行了克隆。林莉等(2007)對中國4個(gè)小型豬五指山豬、貴州香豬、滇南小耳豬和藏豬的GH基因進(jìn)行了克隆測序，發(fā)現(xiàn)4個(gè)品種小型豬和長白豬、雅南豬、內(nèi)江豬的核苷酸序列共有63處發(fā)生變異，變異率為2.9%。袁樹楷(2007)首次克隆得到了榮昌豬BPI基因全長cDNA序列，并在榮昌豬BPI基因外顯子3區(qū)段檢測到一個(gè)新的SNP位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)第397位的G→A突變可能對榮昌豬BPI蛋白功能及機(jī)體天然免疫力有重要影響。何小平(2008)分離克隆了LPINl、LPIN2和LPIN3三個(gè)基因，通過克隆、染色體定位、組織表達(dá)譜分析、多態(tài)位點(diǎn)檢測及與胴體和肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)LPINl基因編碼區(qū)的TaqI多態(tài)位點(diǎn)與眼肌面積、板油率和肌內(nèi)脂肪含量存在顯著相關(guān)。

孫金海等(2010)通過利用轉(zhuǎn)誘導(dǎo)型生長激素開展相關(guān)基因豬培育，獲得15頭體內(nèi)被轉(zhuǎn)入綠色熒光蛋白基因(EGFP)和豬生長激素基因(pGH)轉(zhuǎn)基因豬。賴良學(xué)等(2011)利用2A短肽序列，通過一次克隆即成功培育出8頭能夠同時(shí)表達(dá)4種熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因克隆豬，實(shí)現(xiàn)了多基因在高水平上的協(xié)同表達(dá)，標(biāo)志我國轉(zhuǎn)基因克隆豬技術(shù)達(dá)到國際領(lǐng)