商業無菌檢驗作業指導書1.0目的規定了王老吉涼茶商業無菌檢驗使其按標準化進行操作。2.0適用范圍王老吉涼茶的微生物檢測。3.0術語（無）4.0職責微生物檢驗員負責按作業指導書進行檢驗。5.0工作流程圖（無）6.0內容及要求6.1設備和儀器：6.1.1冰箱：0℃-4℃6.1.2恒溫培養箱：36℃±1℃55℃±1℃6.1.3顯微鏡6.1.4電子秤6.1.5接種環6.1.8pH計6.1.9滅菌試管6.1.10吸管6.1.11平皿φ90mm6.1.12酒精燈6.1.13滅菌鑷子6.2培養基和試劑6.2.1革蘭氏染色液6.2.2瓊脂營業培養基6.2.3溴甲酚紫葡萄糖肉湯6.2.475%酒精編寫人/日期審核人/日期批準人/日期修改人/日期修改標志修改次數商業無菌檢驗作業指導書6.3操作步驟6.3.1抽樣方法殺菌冷卻完畢后每殺菌釜抽樣2罐。抽樣時應記錄殺菌釜使用循環次數、釜號、籃數和抽樣日期、時間,當遇殺菌異常(未達到殺菌條件)、生產流程積壓、停電等特殊情況和新產品時,依實際情況而定。6.3.2稱重：用電子秤稱重，精確到0.1g，稱重前對樣品進行記錄編號。6.3.3保溫將全部樣罐按下述規定溫度時間進行保溫。溫度/℃36±1時間/d10755±1保溫過程中,每天進行溫度巡查，并檢查罐頭外觀,看是否有胖聽或泄漏等異常現象，如有立即剔出分析,同時上報上級。6.3.4開罐檢驗保溫到期后，將外觀正常產品取出，檢查毛重、pH、感官檢查等項目，并及時記錄，當遇pH值異常、感官異常的產品，須擴大抽樣并反饋上級。6.3.5異常罐的細菌學檢查對于胖聽、泄漏、懷疑為酸敗罐及其它異常樣品均須進行檢查:胖聽罐可用75%酒精檫拭消毒（胖聽罐不能燒），漏罐處理方式同胖聽罐，但泄漏端應朝上；其余產品均須先用0.1%的新潔爾滅溶液浸泡15min進行消毒，用干凈布擦干后放于超凈工作臺上，用75％酒精棉擦拭面蓋端，并點燃進行灼燒消毒；用滅菌的衛生鑷子開啟樣品（胖聽罐先用經滅菌的衛生打孔器打孔將罐內氣體釋放，但不可傷及卷邊結構）。6.3.6留樣開罐后，用滅菌吸管以無菌操作取出內容物10ml-20ml，移入滅菌試管中內，保存于冰箱中，待該批罐頭檢驗得出結論后可隨之棄去。編寫人/日期審核人/日期批準人/日期修改人/日期修改標志修改次數商業無菌檢驗作業指導書6.3.7pH測定取經過留樣后剩下的樣品立即進行pH測定，與同一殺菌釜理化檢驗樣品的pH值相比，看是否有顯著的差異。若pH發生明顯變化,應保存該樣品的空罐做密封實驗。6.3.8感官檢查在光線充足，空氣清潔無異味的檢驗室中將罐頭內容物傾入燒杯內，由有經驗的檢驗人員對產品的外觀、色澤、狀態和氣味等進行觀察和嗅聞，并進行品嘗檢查是否有異味；鑒別飲料有無腐敗變質的跡象。6.3.9涂片染色鏡檢6.3.9.1涂片對感官出現明顯變化、pH變化超過0.5，保溫前后重量變化超過1克，以及出現其它異常變化的樣品，均應進行涂片染色鏡檢。6.3.9.2染色鏡檢用革蘭氏染色法染色，鏡檢，至少觀察5個視野，記錄細菌的染色反應、形態特征以及每個視野的菌數。與同批的正常樣品進行對比，判斷是否有明顯的微生物增殖現象。6.3.10接種培養保溫期間出現的胖聽、泄漏,或開罐檢查發現pH、感官質量異常、腐敗變質,進一步鏡檢發現有異常數量細菌的樣罐,均應及時進行微生物接種培養；對需要接種培養的樣品用無菌吸管吸取1ml分別接種培養。接種培養基，管數及培養條件如下：培養基管數培養條件/℃時間/h96-12024-72庖肉培養基222236±1（厭氧，嗜溫）55±1（厭氧，嗜熱）36±1（需氧，嗜溫）55±1（需氧，嗜熱）庖肉培養基溴甲酚紫葡萄糖肉湯（帶倒管）溴甲酚紫葡萄糖肉湯（帶倒管）96-12024-72編寫人/日期審核人/日期批準人/日期修改人/日期修改標志修改次數商業無菌檢驗作業指導書6.3.11微生物的判定對有微生物生長的管進行觀察，并涂片染色鏡檢，按所發現的微生物判定需氧、厭氧，嗜熱、嗜溫，是否有芽胞等類型。對確定有微生物增殖的樣品的包裝罐應進行密封性試驗，具體操作按空罐的密封性試驗操作方法進行。6.4結果判定6.4.1樣品經保溫實驗未胖聽或泄漏；保溫后開罐,經感觀檢查、pH測定或涂片鏡檢，或接種培養，確證無微生物增殖現象，則該釜產品應判斷為商業無菌檢驗合格。如有一個樣品不符合上述規定則該釜產品應判為商業無菌檢驗不合格。/