1、無菌檢查法專業醫學知識宣講無菌檢查法專業醫學知識宣講無菌檢查法無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規定,僅表明了供試品在該檢驗條件下未發現微生物污染2無菌檢查法專業醫學知識宣講無菌檢查法無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、環境潔凈度2010版無菌檢查應在環境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區域內或隔離系統中進行2015版無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環境必須達到無菌檢查的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。3無

2、菌檢查法專業醫學知識宣講環境潔凈度2010版無菌檢查應在環境潔凈度10 000級下培養基硫乙醇酸鹽流體培養基主要用于厭氧菌的培養，也可用于需氧菌培養；胰酪大豆胨液體培養基用于真菌和需氧菌的培養。 制備好的培養基應保存在 225、避光的環境，若保存于非密閉容器中，一般在 3周內使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內使用。 4無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基硫乙醇酸鹽流體培養基主要用于厭氧菌的培養，也可用于需氧培養基PH區別2010版2015版改良馬丁培養基調節pH值使滅菌后為6.40.2胰酪大豆胨液體培養基調節 pH 使滅菌后pH值為 7.30.2營養肉湯培養基調節pH值使滅菌后為7.20.2

3、胰酪大豆胨瓊脂培養基 調節 pH使滅菌后在 25的pH 值為 7.30.2營養瓊脂培養基調節pH值使滅菌后為7.20.2沙氏葡萄糖液體培養基調節 pH使滅菌后在 25的pH 值為 5.60.2改良馬丁瓊脂培養基調節pH值使滅菌后為6.40.2沙氏葡萄糖瓊脂培養基調節 pH使滅菌后在25的pH值為5.60.25無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基PH區別2010版2015版改良馬丁培養基調節pH培養基的適用性檢查 無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基等應符合培養基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。 無菌性檢查 每批培養基隨機取

4、不少于 5 支（瓶），置各培養基規定的溫度培養 14天，應無菌生長。6無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基的適用性檢查 無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大培養基的適用性檢查 靈敏度檢查菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至胰酪大豆胨液體培養基中或胰酪大豆胨瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，3035培養 1824小時；接種白色念珠菌的新鮮培養物至沙氏葡萄糖液體培養基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上，2025培養 2448 小時，上述培養物用 pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含菌數小于 100c

5、fu（菌落形成單位）的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養 物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基上，2025培養 57 天，加入 35ml 含 0.05（v/v）聚山梨酯 80 的 pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含 0.05（v/v）聚山梨酯 80的 pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含孢子數小于 100cfu 的孢子懸液。7無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基的適用性檢查 靈敏度檢查7無菌檢查法專業醫學知識宣講無菌檢查法專業醫學知識宣講培訓課件培養基的適用性檢查 培養基接種 取

6、每管裝量為 12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養基 7 支，分別接種小于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各 2支，另 1支不接種作為空白對照，培養 3 天；取每管裝量為 9ml 的胰酪大豆胨液體培養基 7支,分別接種小于 100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各 2支，另 1支不接種作為空白對照，培養 5天。逐日觀察結果。9無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基的適用性檢查 培養基接種 9無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基接種直觀區別2010版2015版硫乙醇酸鹽流體培養基9支金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養基7支金黃色葡萄球菌、銅綠假單

7、胞菌、生孢梭菌改良馬丁培養基5支白色念珠菌、黑曲霉胰酪大豆胨液體培養基7支枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉10無菌檢查法專業醫學知識宣講培養基接種直觀區別2010版2015版硫乙醇酸鹽流體培養基9方法適用性試驗菌種及菌液制備 除大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC(B) 44102外，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培 養基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。 11無菌檢查法專業醫學知識宣講方法適用性試驗菌種及菌液制備11無菌檢查法專業醫學知識宣講方法適用性試驗薄膜過濾法取每種培養基規定接種的供試品總量按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一

8、次的沖洗液中加入小于 100cfu的試驗菌，過濾。加硫乙醇酸鹽流體培養基或胰酪大豆胨液體培養基至濾筒內。另取一裝有同體積培養基的容器，加入等量試驗菌，作為對照。置規定溫度培養 35 天，各試驗菌同法操作。 12無菌檢查法專業醫學知識宣講方法適用性試驗薄膜過濾法12無菌檢查法專業醫學知識宣講方法適用性試驗結果判斷與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。 如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，應采用增加沖洗量

9、、增加培養基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進行方法適用性試驗。 13無菌檢查法專業醫學知識宣講方法適用性試驗結果判斷13無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質允許，應采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗條件應與方法適用性試驗確認的方法相同。 無菌試驗過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應證明有效性，且對微生物無毒性。 14無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供供試品的無菌檢查檢驗數量 檢驗數量是指一次試驗所用供試品最

10、小包裝容器的數量檢驗量 是指供試品每個最小包裝接種至每份培養基的最小量（g 或ml）。15無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查檢驗數量 檢驗數量是指一次試驗所用供試品供試品的無菌檢查陽性對照 應根據供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗的菌液制備同方法適用性試驗，加菌量小于 100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查時每份培養基接種的樣品量。陽性對照管培養 4872 小時應生長良好。 陰性對照 供試品無菌檢

11、查時，應取相應溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。 16無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查陽性對照 應根據供試品特性選擇陽性對照供試品的無菌檢查薄膜過濾法 薄膜過濾法應采用封閉式薄膜過濾器。無菌檢查用的濾膜孔徑應不大于0.45m。直徑約為 50mm。根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。 水溶性供試液過濾前應先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一

12、般為 100ml，且總沖洗量不得超過 1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。 17無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查薄膜過濾法 17無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查水溶液供試品 取規定量，直接過濾，或混合至含不少于 100ml適宜稀釋液的無菌容器中，混勻，立即過濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1份濾器加入 100ml硫乙醇酸鹽流體培養基，1份濾器加入 100ml胰酪大豆胨液體培養基。18無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查水溶液供試品 18無菌檢查法專業醫學知

13、識宣講供試品的無菌檢查培養及觀察 將上述接種供試品后的培養基容器分別按各培養基規定的溫度培養 14天；一份置 3035培養，一份置 2025培養。培養期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后或在培養過程中，培養基出現渾濁，培養 14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中，培養 3 天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁；或取培養液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。 19無菌檢查法專業醫學知識宣講供試品的無菌檢查培養及觀察 19無菌檢查法專業醫學知識宣講培養及觀察直觀區別2010版2015版培養14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養

14、液適量轉種至同種新鮮培養基中，細菌培養2天、真菌培養3天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁培養 14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中，培養 3 天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁20無菌檢查法專業醫學知識宣講培養及觀察直觀區別2010版2015版培養14天后，不能從供試品的無菌檢查結果判斷 陽性對照管應生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效。 若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經確證無菌生長，判供試品符合規定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規定，除非能充分證明試驗結果無效，即生長的微生物非供試品所含。當符合下列至少一個條件時方可判試驗結果無效： （1）無菌檢查試驗所用的設備及環境的微生物監控結果不符合無菌檢查法的要