1、貴州省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)植物性農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素殘留量的測(cè)定液相色譜一質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用法編制說明(征求意見稿)一，工作況1.1目的意義植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(Plant Growth Regulator)調(diào)節(jié)作物正常生理作用和代謝過程的一類農(nóng)藥。近 年來(lái)，在我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)加工中的應(yīng)用日益廣泛，已經(jīng)成為增加蔬菜水果產(chǎn)量、改善品質(zhì)、提高 經(jīng)濟(jì)效益的重要手段之一。然而隨著研究的深入，有關(guān)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑安全性的報(bào)道也增多。例 如植物天然激素赤霉素，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)赤霉素可能影響動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，甚至導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生癌變。植 物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在水果、蔬菜以及茶葉中的殘留問題也逐漸受到關(guān)注，因此，歐盟、日本、韓國(guó)、 澳大利亞等多個(gè)國(guó)家都制

2、定了不同農(nóng)產(chǎn)品(蔬菜水果)中的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。赤霉素是目前我國(guó)比較常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，赤霉素也是天然植物激素，對(duì)水果、蔬菜和 茶葉生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。此外，赤霉素還可以改善水果品質(zhì)，延長(zhǎng)貯藏期。赤霉素的理化性質(zhì)詳見 表1。目前我國(guó)還未指定赤霉素的限量標(biāo)準(zhǔn)，目前澳大利亞、美國(guó)、韓國(guó)及日本等水果蔬菜進(jìn)出口 大國(guó)制定了農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素的限量標(biāo)準(zhǔn)涉及多達(dá)110多種農(nóng)產(chǎn)品。而在我國(guó)，目前在水果中赤霉 酸殘留量的測(cè)定已有食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 23200.21-2016)夕卜，北京市在豆芽產(chǎn)品中制定了檢測(cè) 方法標(biāo)準(zhǔn)(DB11/T 379-2006)夕卜，目前還沒有其他的方法標(biāo)準(zhǔn)。表1赤霉素的物理化學(xué)性質(zhì)名稱化學(xué)

3、文摘號(hào)CAS No.分子量水溶性(mg/L) logKpKa結(jié)構(gòu)式1 礦 OH赤霉素77-06-5346.385X1030.244.0/ =oKCHHOCH H OOH據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前關(guān)于赤霉素檢測(cè)方法文獻(xiàn)方法多達(dá)70多種，主要包括液相色譜法(HPLC)、 液相色譜法-質(zhì)譜法(HPLC-MS)等，應(yīng)用最廣泛的是HPLC。赤霉素的方法標(biāo)準(zhǔn)主要采用高效液 相色譜方法，如在水果中赤霉酸殘留量的測(cè)定已有食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.21-2016)，豆芽 中赤霉酸殘留量的測(cè)定已有北京市地方標(biāo)準(zhǔn)(DB11/T 379-2006)。日本厚生勞動(dòng)省制定的“LC/MS 農(nóng)用化學(xué)品同時(shí)檢測(cè)方法II”采用液

4、相色譜一質(zhì)譜法能夠同時(shí)檢測(cè)赤霉素、唾苯隆及氯毗脲等三 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。1.2任務(wù)來(lái)源承擔(dān)單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所主要起草人：金芬、王靜、邵華、金茂俊、余永新、鄭鷺飛、王珊珊、史曉梅、張鵬1.3主要工作過程項(xiàng)目主持單位組織專家成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，并負(fù)責(zé)編制起草工作，確定標(biāo)準(zhǔn)的主要技術(shù) 內(nèi)容。編制組成立后，進(jìn)行了廣泛的調(diào)查和研究工作，主要包括以下幾個(gè)方面：（1）了解目前國(guó)際上不同種類蔬菜、水果、茶葉中赤霉素的限量值。（2）收集國(guó)內(nèi)外有關(guān)蔬菜、水果、茶葉中赤霉素測(cè)定方法和標(biāo)準(zhǔn)等資料。比較研究了國(guó)內(nèi)外 的不同測(cè)定方法的有缺點(diǎn)，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改善，為方法最終的確定提供了大量

5、的數(shù)據(jù)支撐。（3）調(diào)查了國(guó)內(nèi)許多單位蔬菜、水果、茶葉中中赤霉素測(cè)定方法的儀器設(shè)備和使用情況，為 方法的普適性提供依據(jù)。（4）為確定方法分析步驟、儀器測(cè)試條件及方法技術(shù)參數(shù)的評(píng)價(jià)，本單位和相關(guān)協(xié)作實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行了大量的方法研究、驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、為標(biāo)準(zhǔn)的起草制定了可靠的第一手資料。在廣泛的調(diào)查研究和必要的試驗(yàn)驗(yàn)證的工作基礎(chǔ)上，根據(jù)GB/T 1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第 一部份：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則及GB/T 20001.4-2001標(biāo)準(zhǔn)編寫第四部份：化學(xué)分析方法所 !定的標(biāo)1制1標(biāo)確1標(biāo)準(zhǔn)的論據(jù)2.1編制原則本標(biāo)準(zhǔn)的編寫制定過程以提高測(cè)試方法選擇性、精密度、靈敏度、準(zhǔn)確度和分析效率，降 低分

6、析成本為總原則，力求反映科學(xué)技術(shù)的先進(jìn)成果和先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)。遵循了標(biāo)準(zhǔn)制定過程中的先進(jìn) 性、經(jīng)濟(jì)性和適用性原則。在標(biāo)準(zhǔn)的制定過程中嚴(yán)格遵循國(guó)家有關(guān)方針、政策、法規(guī)和規(guī)章，嚴(yán)格執(zhí)行強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。與同體系標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)的各種基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)以及配套使用的取樣、試劑規(guī)格等標(biāo)準(zhǔn)相銜 接，遵循了政策和協(xié)調(diào)統(tǒng)一性原則。在標(biāo)準(zhǔn)制定過程中力求做到：技術(shù)內(nèi)容的敘述正確無(wú)誤；文字表達(dá)準(zhǔn)確、簡(jiǎn)明、易懂；標(biāo)準(zhǔn) 的構(gòu)成嚴(yán)謹(jǐn)合理；內(nèi)容編排、層次劃分等符合邏輯與規(guī)定。2.2確定主要技術(shù)內(nèi)容的依據(jù)目前，赤霉素的測(cè)定，日本厚生勞動(dòng)省已經(jīng)有標(biāo)準(zhǔn)方法。此方法為“LC/MS農(nóng)用化學(xué)品同時(shí) 檢測(cè)方法II”。該方法在樣品的提取凈化部分采用乙

7、腈提取，鹽酸-氯化鈉水溶液液液萃取，硅膠固 相萃取小柱凈化，前處理方法相對(duì)比較繁瑣。而基質(zhì)分散固相萃取法相對(duì)于固相萃取法來(lái)說更加 快速、環(huán)保。目前已經(jīng)有很多基于基質(zhì)分散固相萃取前處理的檢測(cè)方法面世。最著名的為美國(guó) QuEChERS方法，該方法在農(nóng)藥多殘留的測(cè)定上顯示了快速、簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)；但該方法在 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用上還研究較少。因此，在現(xiàn)有日本厚生省方法及美國(guó)的QuEChERS方法基礎(chǔ) 上，我們對(duì)樣品的提取凈化過程進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，研究確定了使用相對(duì)簡(jiǎn)單快速的前處理的液相 色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，該方法可有效的測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素（水果和蔬菜）。茶葉和茶青樣品含有 茶多酚等，具有更多水溶

8、性的雜志，更深的色素，除去色素對(duì)于方法的準(zhǔn)確性和精密度均有提高， 因此，在現(xiàn)有文獻(xiàn)方法的基礎(chǔ)上，我們對(duì)茶葉和茶青的提取凈化過程進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，研究確定了使用相對(duì)簡(jiǎn)單快速的前處理的液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，該方法可有效的測(cè)定茶青和茶葉中赤 霉素。三、方法的確定3.1稱樣量的確定本方法參考日本厚生勞動(dòng)省方法確定稱樣量為5-20g和QuEChERS方法的稱樣量。在日本厚 生勞動(dòng)省“LC/MS農(nóng)用化學(xué)品同時(shí)檢測(cè)方法II”方法中稱樣量為5-20 g,提取溶劑乙腈的體積為 50 mL；而QuEChERS方法的稱樣量為10 g,提取溶劑的體積為10mL。我們對(duì)不同稱樣量的提取 效果進(jìn)行了比較，確定了蔬菜水果

9、樣品等稱樣量為10 g。此外，在我國(guó)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室所配置的離 心機(jī)與離心管通常為50 mL,根據(jù)QuEChERS方法樣品量與提取溶劑1:1的比例，10 g的稱樣量 更易于操作，所以本實(shí)驗(yàn)確定樣品的稱樣量為10 g。而對(duì)柑橘類樣品的分析要求是果皮和果肉分 別測(cè)定殘留量，考慮到柑橘類樣品果皮部分密度較小，不易離心，且果皮部分的殘留量較果肉部 分高，所以柑橘類果皮的稱樣量確定為5 g。由于茶青和茶葉顏色較深，茶葉提取物中水溶性雜質(zhì)較多，色素、生物堿、脂多糖等大分子 雜質(zhì)水溶性雜質(zhì)較多，考慮到基質(zhì)干擾，因此茶葉的稱樣量為2 g，茶青的稱樣量為5 g。3.2提取液的確定依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，試驗(yàn)比較了乙

10、腈溶液以及乙月青-乙酸混合液兩種提取液對(duì)赤霉素的 提取效果，詳見表2。因?yàn)槌嗝顾亟Y(jié)構(gòu)中含有羧基，它們受PH的影響較大。當(dāng)在乙腈溶液中加入 0.1%的乙酸，果蔬樣品中赤霉素的提取效果和色譜峰型都有所改善；因此，在該試驗(yàn)中針對(duì)果蔬 等農(nóng)產(chǎn)品使用乙腈-0.1%醋酸水的混合溶液進(jìn)行提取和離心。而對(duì)于茶葉和茶青樣品，當(dāng)在乙腈溶 液中加入0.5%的乙酸，赤霉素的提取效果更好，因此，在該試驗(yàn)中針對(duì)茶葉等農(nóng)產(chǎn)品使用乙腈-0.1% 醋酸水的混合溶液進(jìn)行提取和離心。表2 不同提取溶液的提取效果提取溶液組成（V/V）赤霉素回收率（%）乙月青75.6乙青-0.1%醋酸94.3乙青-0.5%醋酸95.23.3基質(zhì)分散固

11、相萃取填料的選擇依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，試驗(yàn)比較了一種離子交換吸附劑（PSA）和兩種惰性吸附劑（ODS、石 墨化碳）共三種分散固相萃取的填料對(duì)樣品的凈化回收效果。在農(nóng)殘分析中，PSA主要是通過離子 交換作用除去樣品中的金屬離子、部分脂肪酸和糖，在本試驗(yàn)中，PSA為50mg時(shí)，對(duì)目標(biāo)物赤霉 素有很大程度的保留，影響了目標(biāo)物的回收效果，如表3所示，赤霉素的回收率僅為52.3%。顯然， 隨著PSA量的增大，赤霉素的回收率不斷降低，所以綜合考慮回收率及凈化效果，未使用PSA作 為凈化填料。此外，我們比較了不同濃度的GCB的凈化回收效果。在以往的農(nóng)殘分析中，GCB 主要用于去除葉綠素和類胡蘿卜素，對(duì)具有

12、平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥具有一定的吸附。18作為一種廣譜型的凈化填料，雖然它除雜能力沒有PSA好，但是綜合考慮回收率和凈化效果，本實(shí)驗(yàn)中選擇C你 18作為果蔬樣品凈化填料。表3不同分散固相萃取填料的凈化回收效果填料劑量（mg）赤霉素回收率（）C182011410010820098PSA5052.310043.715043.720040.55GCB20107.310088.6200783.4固相萃取柱的選擇依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法，以及基質(zhì)分散固相萃取方法中填料的凈化回收效果，初步選定了 兩種惰性吸附劑（ODS、石墨化碳）固相萃取柱對(duì)樣品的凈化回收效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外，我們比較了 不同濃度的ENVI-Carb

13、的凈化回收效果。在以往的農(nóng)殘分析中，GCB主要用于去除葉綠素和類胡 蘿卜素，對(duì)茶葉中的色素去除效果好。綜合考慮回收率和凈化效果，本實(shí)驗(yàn)中選擇ENVI-Carb作 為果蔬樣品凈化填料。表4不同分散固相萃取填料的凈化回收效果SPE柱劑量（mg）赤霉素回收率（）C1820341004420052ENVI-Carb2084.010088.6200903.4離心過濾將高速勻漿后的樣品于10000 r/min下離心5 min。吸取1-2 mL上述離心液清液，過0.2 pm濾 膜凈化。依據(jù)現(xiàn)有的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)方法，多采用聚丙烯（GHP）濾膜。而GHP濾膜的價(jià)格比較 昂貴，所以在本研究中比較了兩種不同材質(zhì)的濾

14、膜。一種是waters公司的聚丙烯（GHP）濾膜， 另一種是國(guó)產(chǎn)的有機(jī)相濾膜。通過比較發(fā)現(xiàn)，兩種濾膜對(duì)樣品的回收率及凈化效果沒有顯著性差 異。但國(guó)產(chǎn)的有機(jī)相濾膜的價(jià)格約為1元/個(gè)，比進(jìn)口的GHP濾膜的價(jià)格（16元/個(gè)）便宜的多。 所以，從成本角度考慮，本方法選用經(jīng)濟(jì)的國(guó)產(chǎn)有機(jī)相濾膜。3.5質(zhì)譜條件的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)依據(jù)赤霉素分子的結(jié)構(gòu)特征，分別選擇在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描（Q1掃描）， 確定母離子；在碎片離子掃描模式下，通關(guān)改變CE電壓條件，確定每種物質(zhì)的特征碎片離子峰， 最后優(yōu)化MRM定量分析質(zhì)譜參數(shù)如DP、FP、EP、CE和CXP等，以獲得更高的靈敏度。本實(shí)驗(yàn)使用的質(zhì)譜儀器為AB公司的A

15、PI5000，最后確定的質(zhì)譜條件如下：a）電噴霧電壓 （IS）：正離子模式4500 V；負(fù)離子模式-4500 V； b）霧化氣壓力（GS1）： 40 Psi； c）氣簾氣壓力 （CUR）： 5 Psi； d）輔助氣流速（GS2）： 40 Psi； e）離子源溫度（TEM）： 450 C； f）監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰 撞電壓（CE）、去簇電壓（DP）、碰撞室入口電壓（EP）、碰撞室出口電壓（CXP）如表5所示。表5赤霉素碎片離子信息化合物母離子（Q1）子離子（Q3）CE(V)DP(V)EP(V)CXP(V)赤霉素-345.2-143.1*-40-901015-221.2-30-901015注：*為定量離

16、子3.6色譜條件的選擇3.6.1流動(dòng)相梯度表6梯度洗脫程序表時(shí)間（min）5 mmol/L乙酸銨-0.5%乙酸水溶液（流動(dòng)相A）5 mmol/L乙酸銨-0.5%乙酸甲醇溶液（流動(dòng)相B）08515160403.56040650501045551559520595238515288515a）柱溫：40 C； b）流速：0.2 mL/min； c）進(jìn)樣體積：5L3.6.2含口次乙馥流動(dòng)相酸度的優(yōu)化選擇究比較了 5個(gè)不同乙酸濃度的流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫的效果，當(dāng)流動(dòng)相本研中不含乙酸的時(shí)候，赤霉延現(xiàn)素出3.6.2含口次乙馥流動(dòng)相酸度的優(yōu)化選擇究比較了 5個(gè)不同乙酸濃度的流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫的效果，當(dāng)流動(dòng)相本研

17、中不含乙酸的時(shí)候，赤霉延現(xiàn)素出象有現(xiàn)前延峰。隨著流動(dòng)相中乙酸濃度的增大，流動(dòng)相的pH也隨之減小所改善。當(dāng)流動(dòng)相中乙酸含量為0.1%時(shí)，赤霉素的峰型對(duì)稱性得到了很大改善。綜合考，赤霉素色譜峰的前慮，本實(shí)驗(yàn)選擇乙酸為0.5%。3.6.3續(xù)沖鹽濃度的優(yōu)化選擇本研究比較了 4種不同濃度的乙酸銨對(duì)目標(biāo)物質(zhì)分離測(cè)定效果的影響。隨著流動(dòng)相中乙酸銨濃度3.6.3續(xù)沖鹽濃度的優(yōu)化選擇本研究比較了 4種不同濃度的乙酸銨對(duì)目標(biāo)物質(zhì)分離測(cè)定效果的影響。隨著流動(dòng)相中乙酸銨濃度的增大，保留時(shí)間發(fā)生了明顯的變化。鑒于靈敏度和分離度的影響，綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇度為為5mM度為為5mM。確度一. 一乙酸3.7銨濃準(zhǔn)確為考察萬(wàn)法

18、的準(zhǔn)確度，我們?cè)诓煌氖卟怂然|(zhì)中添加不同濃度的目標(biāo)物進(jìn)行回收率的 試驗(yàn)。歐盟規(guī)定赤霉素的殘留限量為5mg/kg。在本實(shí)驗(yàn)中選擇蘋果、葡萄、黃瓜等7種蔬菜水果 及茶葉和茶青進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，具體結(jié)果見表5。圖1 不同乙酸濃度下的液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS/MS）色譜圖表6不同樣品基質(zhì)中目標(biāo)物添加回收率結(jié)果（%）赤霉素（GA3）樣品添加水平（mg/kg）重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差桔子0.188.299.8100967.030.2111.1108.8114.71122.660.485.393.590.589.84.62桔子皮0.298.6103.699.61012.630.48210

19、09993.710.80.892.892.490.691.91.27蘋果0.189.185.384.286.22.980.2110.1113.5113.81121.830.484.587.489.887.23.04葡萄0.185.189.993.689.54.760.280.987.587.985.44.60.496.798.999.598.41.49西瓜0.1109.7111.5112.91111.440.298.8102.3100.51011.740.480.385.788.284.74.76番茄0.176.385.590.584.18.560.294.8101.5104.21004.83

20、0.490101.310297.86.88黃瓜0.193.288.290.190.52.780.290.993.195.693.22.520.498.7105.2109.81055.33油菜0.190.395.393.5932.720.288.385.189.687.72.640.483.187.389.786.73.85茶葉0.195.291.193.293.22.050.282.376.382.380.33.460.491.486.488.288.72.53茶青0.190.993.991.392.01.630.282.372.382.679.15.860.480.188.192.586.9

21、6.293.8精密度3.8.1重復(fù)性在本實(shí)驗(yàn)中，在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作者使用相同儀器設(shè)備，按相同的前處理方法 和測(cè)試方法，在短時(shí)間內(nèi)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品樣品中的赤霉素進(jìn)行了6次測(cè)定，重復(fù)性結(jié)果見表6-10， 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.04 %-4.55%范圍內(nèi)，符合重復(fù)性試驗(yàn)對(duì)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的要求。表7重復(fù)性結(jié)果-赤霉素樣品6次重復(fù)測(cè)定結(jié)果瞄/kg平均瞄慫標(biāo)準(zhǔn)偏差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(%)123456番茄159.28158.68159.25155.49158.53157.01158.041.490.95黃瓜185.64189.48188.06188.76186.9187.76187.761.360.73油菜195.

22、23196.42188.57190.80190.86192.41192.382.951.54蘋果147.09139.05142.75143.56143.45146.23143.682.841.98葡萄130.66132.08133.48134.33135.85131.86133.041.881.41西瓜147.98145.26144.22146.04148.98145.46146.321.791.22桔子161.74162.08160.56160.74160.86163.09161.510.9780.61桔子皮165.23166.12164.75164.87165.42166.04165.41

23、0.5760.35茶青200.01202.02203.05201.25203.21201.45202.371.580.07茶葉202.76201.13201.57201.89203.24202.19202.130.780.043.8.2再現(xiàn)性在本實(shí)驗(yàn)中，我們選擇了不同部委下屬的5家實(shí)驗(yàn)室，即農(nóng)業(yè)部蔬菜品質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè) 試中心、中國(guó)檢科學(xué)院綜合檢測(cè)中心、農(nóng)業(yè)部蜂產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心、中國(guó)科學(xué)院 生態(tài)環(huán)境研究中心環(huán)境水質(zhì)學(xué)室及北京市疾病預(yù)防控制中心，分別記為實(shí)驗(yàn)室1、實(shí)驗(yàn)室2、 實(shí)驗(yàn)室3、實(shí)驗(yàn)室4及實(shí)驗(yàn)室5，由不同操作人員使用不同的儀器，對(duì)本方法進(jìn)行了驗(yàn)證。 通過對(duì)蘋果、桔子和黃瓜3種蔬菜水果中

24、添加3種不同濃度水平，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次， 分別計(jì)算不同樣品的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差等各項(xiàng)參數(shù)，結(jié)果詳見表12-17。 3.8.2.1數(shù)據(jù)匯總本精密度試驗(yàn)由5個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)3個(gè)水平作3次測(cè)試，測(cè)試原始數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表。表8植物性農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素殘留實(shí)驗(yàn)室間原始數(shù)據(jù)表（單位：mg/kg）蘋果樣品實(shí)驗(yàn)室i1234水平j(luò)12312312312赤霉素0.12120.18040.45500.10400.18180.33430.08480.18170.38900.08010.165300.10840.23560.38520.09850.17550.32660.08160.18790.38530.0

25、8840.163100.10840.22340.44160.10940.18580.33350.08440.18160.38950.08740.16290桔子樣品實(shí)驗(yàn)室i1234水平j(luò)12312312312赤霉素0.09720.22910.45600.08360.15540.31420.09810.19820.40620.08820.186700.09740.22230.44930.09730.14090.30110.09920.18940.38910.08030.183600.09170.23120.41280.09380.15390.33390.09560.18720.38430.0856

26、0.17790黃瓜樣品實(shí)驗(yàn)室i1234水平j(luò)12312312312赤霉素0.08980.21060.34920.07570.15320.33220.07920.19610.36470.08620.176300.10360.18800.36100.06650.17080.34140.07880.19370.35840.08840.183100.11300.19200.40180.06810.16780.39180.07250.18550.3650.08740.16290蘋果樣品實(shí)驗(yàn)室i1234水平j(luò)12312312312赤霉素0.11270.21310.42730.10400.18100.331

27、50.08360.18370.38790.08530.1638桔子樣品實(shí)驗(yàn)室i1234水平j(luò)12312312312赤霉素0.09540.22750.43940.09160.15010.31640.09760.19160.39320.08470.1827黃瓜樣品實(shí)驗(yàn)室i1234水平j(luò)12312312312赤霉素0.10210.19690.37070.07010.16390.35510.07680.19180.36270.08730.1741表9植物性農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素殘留實(shí)驗(yàn)室間單元平均值（mg/kg）蘋果樣品實(shí)驗(yàn) 室i1234水平12312312312赤 霉素5.46E-058.41E-041.3

28、7E-032.97E-052.70E-051.79E-053.04E-061.30E-055.26E-062.05E-051.77E-06桔子樣品實(shí)驗(yàn)12343.8.2.2異常值的檢驗(yàn)3.8.2.2.1檢驗(yàn)單元方差根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)次數(shù)與實(shí)驗(yàn)室個(gè)數(shù)，科克倫檢驗(yàn)臨界值如下所示。每個(gè)水平的最大方差所在實(shí)驗(yàn)室編號(hào)與科克倫表10各水平單元方差的科克倫檢驗(yàn)最大單元方差單元方差之和科克倫檢驗(yàn)的檢蘋果水平j(luò)12312312赤霉素5.46E-058.41E-041.37E-031.14E-048.86E-041.42E-030.47700.9487桔子水平j(luò)12312312赤霉素5.08E-056.33E-055.

29、41E-049.83E-051.42E-049.96E-040.51660.4460水平j(luò)12312312黃瓜赤霉素1.36E-041.45E-041.03E-031.92E-043.83E-041.85E-030.70790.37953.8.2.2.2檢驗(yàn)單元平均值依據(jù)格拉布斯檢驗(yàn)計(jì)算公式，計(jì)算格拉布斯檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量Gp,判定其檢驗(yàn)項(xiàng)目的接受值，詳見表16。由GB639 格拉布斯檢驗(yàn)臨界值為1.715（5%概率水平）和1.764（1%概率水平）。在各實(shí)驗(yàn)室的單元平均值中，用格拉布斯 均值的格拉布斯檢驗(yàn)表明5個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果的一致性較好，數(shù)據(jù)是可信的。表11各水平單元平均值的格拉布斯檢驗(yàn)平均值（m

30、g/kg）單元平均值最值（mg/kg）單個(gè)高值（最大/最?。﹩蝹€(gè)低值蘋果水平j(luò)12312312赤霉素0.09340.18680.37960.11270.21310.42731.37301.46200.08140.16380.33150.85401.2790桔子水平j(luò)12312312赤霉素0.09100.18650.37900.09760.22750.43941.15301.47600.08470.15010.31641.09201.3130黃瓜水平j(luò)12312312赤霉素0.08360.18240.36920.10210.19690.38471.52501.08100.07010.16390.

31、35511.11401.38103.8.2.2.3建立R, r與m之間的回歸方程經(jīng)計(jì)算，各水平的R, r與平均值m見表12。表12重復(fù)性限和再現(xiàn)性限統(tǒng)計(jì)平均值（mg/kg）重復(fù)性限r(nóng)再現(xiàn)性限R蘋果水平j(luò)123123123赤霉素0.09340.18680.37960.013400.037280.047210.040810.058900.10346桔子水平j(luò)123123123赤霉素0.09100.18650.37900.012410.014920.039520.019050.078670.12944黃瓜水平j(luò)123123123赤霉素0.08360.18240.36920.017370.024520

32、.053880.036820.042470.145813.9方法的線性范圍與檢出限匚=1不同基質(zhì)對(duì)質(zhì)譜定量有很大影響。本實(shí)驗(yàn)在樣品前處理過程中充分考查了基質(zhì)效應(yīng)，全 部采用空白樣品添加6個(gè)不同濃度目標(biāo)物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，其中赤霉素的質(zhì)量濃度分別為 10、20、50、100、200和500gg/kg制作工作曲線。按照操作方法制備樣品溶液，將不同質(zhì) 量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述選定的液相-質(zhì)譜條件下分別進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為10uL，根據(jù)質(zhì)量 濃度與色譜峰面積響應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算回歸方程及其相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明：赤霉素的質(zhì) 量濃度在10-500pg/kg濃度范圍內(nèi)，濃度與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)（r2） 均大于0.9900。表13為在蘋果基質(zhì)中添加標(biāo)準(zhǔn)樣品的回歸方程和相關(guān)系數(shù)，圖2為在線性 范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表13赤霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍名稱線性方程相關(guān)系數(shù)（r2）線性范圍（gg/kg）赤霉素y=4.34e+003x+1.67e+0030.999