1、生物產品分析實驗 實驗一 熒光法測定藥物中核黃素含量生物產品分析實驗 實驗一 一 實驗目的了解熒光法測定藥物中VB2的原理；學會熒光儀的使用。一 實驗目的了解熒光法測定藥物中VB2的原理；二 實驗原理核黃素（Vit B2）在pH49的條件下，用450nm波長的光激發，可發出波長為520nm的熒光。在核黃素的含量為0.110g范圍內，熒光的強度，與核黃素濃度成正比，硫代硫酸鈉可消除核黃素的熒光性。二 實驗原理核黃素（Vit B2）在pH49的條件下，三 試劑、材料和儀器1試劑與材料1.0g/ml標準核黃素溶液： 精稱5mg標準核黃素, 用蒸餾水定容至100ml, 再從中取2ml定容至100ml。

2、三 試劑、材料和儀器1試劑與材料含核黃素0.011g/ml樣品液（VB2）： 精稱2mg左右的 VB2藥片，用蒸餾水 定容至100ml, 從中取5ml再定容至100ml。 5g/ml熒光紅溶液：稱500g熒光紅，定容至100ml。熒光消光劑：0.2g硫代硫酸鈉, 加水溶解至10ml。0.1mol/L HCI：量取0.94ml濃鹽酸, 用水稀釋至100ml。精密pH5.0試紙。含核黃素0.011g/ml樣品液（VB2）：2儀器（1）RF-540熒光光度計：1臺。（2）1ml微量進樣器：1個 （槍頭若干）； （3）容量瓶：100ml6個； 10ml4個；（4）感量1/10000g電子天平：1臺；2

3、儀器四 操作步驟1掃描激發波長EX在樣品室內放入熒光紅溶液，首先調整熒光發射波長到520nm，然后對激發波長進行掃描，譜圖峰值處即為熒光激發波長EX。2掃描發射波長EM將EX固定，再對發射波長EM進行掃描，譜圖峰值處即為熒光發射波長EM。四 操作步驟1掃描激發波長EX3 標準核黃素熒光強度的測定 吸取樣品液10ml于25ml比色管中，加入標準核黃素溶液1ml，用0.1mol/L鹽酸調至pH5.0，測定熒光強度A。4樣品熒光強度的測定 吸取10ml樣品液于2支25ml比色管中，分別加入1ml蒸餾水和1ml消光劑溶液。用0.1mol/L鹽酸調至pH5.0，于熒光光度計中測定各自的熒光強度。加水者為

4、B，加消光劑者為C。3 標準核黃素熒光強度的測定五計算五計算六注意事項1.開機后，扳動氙燈開關到“ON”處數秒后，待燈亮后松手；2.核黃素對光敏感，樣品配制應再暗處進行；3.核黃素可被低亞硫酸鈉還原成無熒光型，但搖動后很快就被空氣氧化成有熒光物質，所以要立即測定。六注意事項1.開機后，扳動氙燈開關到“ON”處數秒后，待燈七思考題1熒光法測定VB2含量的基本原理。2熒光法測定VB2時應注意哪些問題？七思考題1熒光法測定VB2含量的基本原理。實驗二 味精成品純度的測定生物產品分析實驗課件一.實驗目的1. 掌握旋光法測定味精成品純度的測定方法；2. 了解旋光法測定味精成品純度的基本原理。一.實驗目的

5、1. 掌握旋光法測定味精成品純度的測定方法；二原理食用味精為L谷氨酸單鈉鹽。L谷氨酸分子中具有不對稱碳原子，故有旋光性。在水溶液中比旋光度為aD20=+12.1在2N鹽酸溶液中為+32。L谷氨酸在鹽酸溶液中的比旋光度在一定鹽酸濃度范圍內隨酸度增加而增加。在測定味精純度時加入鹽酸使其濃度為2N，此時谷氨酸鈉以谷氨酸的形式存在。二原理食用味精為L谷氨酸單鈉鹽。L谷氨酸分子中具有不對在一定的溫度下測定其比旋光度，并與該溫度下純L谷氨酸的比旋光度比較，即可求得味精中谷氨酸鈉的百分含量，即味精純度。結晶味精其純度可達99%以上。在一定的溫度下測定其比旋光度，并與該溫度下純L谷氨酸的比旋三儀器與試劑WZZ

6、-2B自動旋光儀；99%紅梅味素、80%味精、次品味素；6N HCl；1dm或2dm長旋光管。三儀器與試劑WZZ-2B自動旋光儀；四測定步驟準確稱取味精樣品10.00g，加2025ml蒸餾水,攪拌下加入6N鹽酸32ml,使其全部溶解，冷卻至室溫，用蒸餾水定容至100ml。旋光計零點校正：有三種校正法，一種為蒸餾水調零法，即將蒸餾水裝入旋光管于旋光儀中調零；一種為空白溶液校正法，即取32毫升6N HCl置入100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，于旋光儀中調零；另一種為空氣法，即不用溶液和旋光管，空著儀器調零。四測定步驟準確稱取味精樣品10.00g，加2025ml蒸用少量樣品溶液洗滌旋光管三次，

7、然后注滿一管，將玻璃蓋片從管的側面水平地推進蓋好，適當擰緊螺絲蓋，用干布擦干蓋片。打開旋光儀光源，穩定后校正零點。放入裝好樣品的旋光管，記錄旋光儀的讀數，并記錄測定時的溫度。用少量樣品溶液洗滌旋光管三次，然后注滿一管，將玻璃蓋片從管的五計算當溫度為t時旋光物質的比旋光度為：式中：a測得旋光度； L旋光管長度（dm）； C100ml樣品溶液中含旋光物質的克數。五計算當溫度為t時旋光物質的比旋光度為：因測定時溶液中是L谷氨酸，故需將味精樣品的重量W換算成L谷氨酸的重量C：式中：147.13L谷氨酸的分子量；18713味精的分子量(含1分子結晶水的L谷氨酸單鈉鹽)。 因測定時溶液中是L谷氨酸，故需將

8、味精樣品的重量W換算成L純L谷氨酸20時比旋光度為+32，校正為t時比旋光度為：純L谷氨酸20時比旋光度為+32，校正為t時比旋光度式中：a測得的旋光度； t測量時溫度（）； L旋光管長度（dm）； W味精樣品重量（g）。 生物產品分析實驗課件六思考題1配制樣品時為何要加32ml 6N NCl？2旋光法測定樣品的純度，零點校正的方法有幾種？怎樣校正？六思考題1配制樣品時為何要加32ml 6N NCl？實驗三 電位滴定法測定總酸測定 (設計性)生物產品分析實驗課件一. 實驗目的學會用酸度計測pH值和總酸度；任選兩種方法或兩種樣品做實驗；進一步熟悉滴定操作；實驗結束后，從實驗中總結出3個問題進行討

9、論。 一. 實驗目的學會用酸度計測pH值和總酸度； 二. 實驗原理采用酸堿中和容量分析法。pH9.0為中和反應時酚酞指示劑發生顏色突變時的pH值。電位滴定法控制pH終點，消除了目視比色法對有色試樣的感官誤差，有操作簡便、結果準確等優點。 二. 實驗原理采用酸堿中和容量分析法。pH9.0為中和反應 三. 實驗儀器與試劑pHS-3型酸度計；磁力攪拌器；0.1N標準NaOH溶液；20、50ml移液管；100ml燒杯；除CO2蒸餾水的制備：將蒸餾水煮沸15min后，冷卻至室溫。樣品隨意在市場采購。 三. 實驗儀器與試劑pHS-3型酸度計；四.酸度計的校正與定位四.酸度計的校正與定位把選擇開關鈕調到pH

10、檔；調節溫度補償旋鈕，使旋鈕白線對準溶液溫度值；把斜率調節旋鈕順時針旋到底；把清洗過的電極插入pH=6.86的緩沖溶液中；調解定位調節旋鈕，使儀器顯示讀數與該緩沖溶液當時溫度下的pH值相一致；用蒸餾水清洗電極，再插入pH9.18的標準緩沖溶液中，調節斜率旋鈕使儀器顯示讀數與該緩沖溶液中當時溫度下的pH值一致；重復以上操作2-3次。把選擇開關鈕調到pH檔； 測定乳酸菌飲料總酸度生物產品分析實驗課件一.測定步驟吸取20ml乳酸菌飲料于100ml燒杯中，加入40ml蒸餾水（除CO2），放入一攪拌指，置于磁力攪拌器上，將玻璃電極和甘汞電極插入試樣中，開動攪拌器，按下酸度計讀數開關，用0.1N標準NaO

11、H滴定試樣，隨時觀察試樣pH值變化，到接近pH9.0時應每加半滴停一停，直至pH9.0時為滴定終點。記錄消耗0.1 N標準 NaOH的毫升數。一.測定步驟吸取20ml乳酸菌飲料于100ml燒杯中，加入4二. 計算式中： T100ml樣品所需0.1 N NaOH溶液的毫升數；V滴定試樣時消耗0.1 N 標準NaOH的毫升數。注：酸度（QB）：2580T二. 計算 啤酒總酸度的測定 生物產品分析實驗課件一.測定步驟吸取50ml除氣啤酒于100ml燒杯中，放入一攪拌指，置于磁力攪拌器上，將玻璃電極和甘汞電極插入試樣中，開動攪拌器，按下酸度計讀數開關，用0.1N標準NaOH滴定試樣，隨時觀察試樣pH值

12、變化，到接近pH9.0時應每加半滴停一停，直至pH9.0時為滴定終點。記錄消耗0.1 N標準 NaOH的毫升數。一.測定步驟吸取50ml除氣啤酒于100ml燒杯中，放入一攪二.計算式中：N、V標準NaOH溶液的當量濃度與消耗體積（ml）;50吸取酒樣體積（ml）;100換算成100ml酒樣中酸量。二.計算 白酒中總酸含量的測定生物產品分析實驗課件一.測定步驟吸取50ml白酒于250ml三角瓶中，加100ml蒸餾水（除CO2），2滴0.5%酚酞指示劑，用0.1N標準NaOH滴定試樣至微紅色，記錄消耗0.1 N標準 NaOH的毫升數。一.測定步驟吸取50ml白酒于250ml三角瓶中，加100m二.

13、計算式中：N、V標準NaOH溶液的當量濃度與消耗體積（ml）;50吸取酒樣體積（ml）;100換算成100ml酒樣中酸量；0.06006乙酸的毫克當量（g）.二.計算實驗四 紫外分光光度法測定 樣品中蛋白質含量 生物產品分析實驗課件一 實驗目的掌握樣品中蛋白質提取的基本方法；學會紫外分光光度計的使用。 一 實驗目的掌握樣品中蛋白質提取的基本方法；二. 實驗原理 蛋白質及其降解產物（胨、肽和氨基酸）的芳 R 香環殘基NHCHCO在紫外區內對一定波長的光具有選擇吸收作用。在此波長（280nm）下，光吸收程度與蛋白質濃度（38mg/ml）成線性關系,故可做定量測定。核苷酸分子中的堿基含有共軛雙鍵，在

14、紫外光區（260nm）也有吸收，可通過校正加以清除。本法操作簡便迅速，故常用于生化領域研究工作中。二. 實驗原理 三. 儀器與試劑1UV755B-分光光度計；三. 儀器與試劑1UV755B-分光光度計；20.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液0.1M磷酸氫二鈉溶液：稱取Na2HPO4.12H2O 8.995g定容至250ml。0.1M磷酸二氫鈉溶液：稱取NaH2PO4.2H2O 3.90g定容至250ml。量取0.1M磷酸氫二鈉溶液244ml和0.1M磷酸二氫鈉溶液156ml混合均勻。3打漿機；4高速離心機。20.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液四.UV755B-分光光度計的使用開機，儀器顯

15、示F755B，開蓋, 預熱520min；調整測定波長；將參比試樣(空白)裝入比色皿，放入比色槽后，調零；調零時開蓋，按“MODE”鍵，使儀器顯示“T 0.0”, 按“0%”鍵；然后閉蓋，按“100%”鍵，使儀器顯示“T100”， 反復調節數次，使之穩定；放入待測樣，按“MODE”鍵，儀器顯示“A”，讀數記錄；再按“MODE”鍵，儀器顯示“T”后，開蓋；測定完畢后關機。 四.UV755B-分光光度計的使用開機，儀器顯示F755B，五. 操作步驟1樣品處理準確稱取約10g左右的大豆，洗凈，用蒸餾水浸泡，加0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液至100ml打漿，過濾，然后用0.1mol/L pH7.

16、0磷酸緩沖液將漿液定容至250ml。4000r/min離心15min，上清液即為蛋白質提取液。五. 操作步驟1樣品處理2樣品中蛋白質含量的測定取適量的樣品提取液，根據蛋白質濃度，用0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液適當稀釋（取1ml提取液定容至50ml）后，用紫外分光光度計，10mm厚的石英比色皿分別在280nm和260nm波長下讀取吸光值，以0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖液為空白調零。2樣品中蛋白質含量的測定六結果計算式中：A280蛋白質溶液在280nm處的吸光值：A260蛋白質溶液在260nm處的吸光值；1.45和0.74校正值；n稀釋倍數；W樣品重（mg）。六結果計算七.思考題

17、1.石英比色皿與玻璃比色皿的區別？2.使用高速離心機應注意的事項。七.思考題1.石英比色皿與玻璃比色皿的區別？實驗五 氣相色譜法分離分析酒中雜醇油生物產品分析實驗課件一. 實驗目的. 了解氣相色譜儀及色譜工作站的使用；. 了解氣相色譜儀的基本分析原理。一. 實驗目的. 了解氣相色譜儀及色譜工作站的使用；二. 實驗原理氣相色譜分析是采用氣體作為流動相的一種層析方法。由于流動相為氣體，物質在氣相中傳遞速度快，氣態樣品中各組分與固定相相互作用（吸附或分配）次數多，因而混合物通過氣相色譜可以得到良好的分離，再通過適當的檢測儀器進行鑒定，即可給出定性或定量的結果。二. 實驗原理氣相色譜分析是采用氣體作為

18、流動相的一種層析方法酒除了乙醇和水外，還含有數百種微量香味成分。酒中的香味成分以醇類、酯類、酸類為主。酒中的醇類除乙醇外，還含有甲醇、正丙醇、異丁醇、正丁醇、2-戊醇、異戊醇、正戊醇、正己醇等。用常規的化學分析方法測出的是這類物質的總量，如雜醇油是以異丁醇和異戊醇計，這樣不足以反映各種成分的本來面目。利用氣相色譜儀可以準確迅速地檢測出酒中所含的各種醇類物質。酒除了乙醇和水外，還含有數百種微量香味成分。酒中的香味成分以三儀器GC122氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測器。微量注射器10ul。三儀器GC122氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測器。微量注四色譜操作條件色譜柱：FFAP毛細管柱。柱溫：40

19、恒溫6min后，以4/min程序升溫至220，繼續恒溫16min；汽化室溫度：230；檢測器溫度：240。載氣：高純氮，柱頭壓：20psi；柱流量：1.36ml/min；尾吹氣：39ml/min；空氣：400ml/min；氫氣：30ml/min；進樣量：0.4ul。四色譜操作條件色譜柱：FFAP毛細管柱。五定性方法標準物保留時間的確定 分別取甲醇、正丙醇、正丁醇、異丁醇、異戊醇各0.2ul（試劑都用色譜純試劑）注入色譜儀，調節衰減控制器，使信號在量程范圍內，分別記錄各物質的保留時間。樣品中各組分保留時間的測定 將樣品溶液注入色譜儀，測定各色譜峰的保留時間，與標準物保留時間對照初步定性。五定性方

20、法標準物保留時間的確定六思考題什么叫程序升溫？程序升溫的目的？雜醇油的概念。六思考題什么叫程序升溫？程序升溫的目的？實驗六 高效液相色譜法分離分析葡萄酒中的有機酸生物產品分析實驗課件一. 實驗目的了解高效液相色譜儀分離分析有機酸的基本原理；學會恒流洗脫的基本方法。一. 實驗目的了解高效液相色譜儀分離分析有機酸的基本原理；二. 實驗原理利用混合物中各組分的化學、物理性質差異，使各組分以不同程度分布在兩相中。當流動相流過含有樣品的固定相時，各組分以不同速度移動，從而達到互相分離的目的。二. 實驗原理利用混合物中各組分的化學、物理性質差異，使各三. 試劑色譜純甲醇，超聲波除氣；0.01 mol/L磷酸二氫鉀；20%磷酸溶液；pH值為4.9的0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液（用20%磷酸調節），經孔徑為0.45m濾膜過濾，超聲波除氣；三. 試劑色譜純甲醇，超聲波除氣；酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸，分析純，經孔徑為0.45m濾膜過濾，超聲波除氣。葡萄酒樣品經0.