1、海洋泉源的口蛄蝦生物堿的分散純化和抗鼻咽癌作用研究葉才果，潘海燕，黃培春，何志巍【摘要】目的從海洋泉源的口蛄蝦中提取并純化該生物堿，研究其抗鼻咽癌作用。要領體系溶劑法開端分散口蛄蝦乙醇粗提物，大孔樹脂HP20層析分散正丁醇洗脫的組分；對富含生物堿的組分歸并后萃取總生物堿；主動層析儀純化總生物堿，254n波長檢測，手動網絡洗脫液；質譜儀闡發生物堿分子量；TT要領檢測藥物對細胞的生長按捺率，繪制細胞生長曲線。結果大孔樹脂HP20能非常有用地富集分散的生物堿，質譜闡發純化的生物堿D3分子量為234.33。分散純化的生物堿對鼻咽癌細胞增殖具有顯著的按捺作用。結論口蛄蝦泉源的生物堿分子量為234.33，

2、對鼻咽癌細胞的增殖具有顯著的按捺作用，并呈時間-劑量干系。【關鍵詞】口蛄蝦；生物堿；鼻咽癌；純化Keyrds：ratsquilla；Alkalid；Naspharyngealarina；Purifiatin本研究所使用鼻咽癌細胞株對一批海洋生物舉行藥物活性挑選，創造了一些具有按捺鼻咽癌細胞系增殖，同時也可以抗EB病毒(Epstein-BarrVirus)增殖的海洋生物1，2，此中口蛄蝦乙醇粗提物按捺結果最顯著，并申請了中國創造專利(專利號：ZL99102633.0)。我們以往的實行證明口蛄蝦單次乙醇提取物能明顯按捺人鼻咽癌細胞系NE1、NE-2Z的DNA合成，低落細胞活性和細胞集落形本錢領周鴻

3、科.?海洋生物1號對人鼻咽癌細胞系NE-2Z生長的影響及其機制的研究?.2022,廣東醫學院碩士學位論文。動物實行證明乙醇粗提物能按捺人低分化鼻咽癌細胞裸鼠移植瘤的生長和轉移顧帝水.?海洋生物1號對人鼻咽癌細胞系NE-2Z轉移特性及其裸鼠轉移瘤的影響?.2022,廣東醫學院碩士學位論文。本實行在進一步對活性組分分散純化的底子上，結合前期的實行底子，確定活性物質的種類和分子信息正是本研究要辦理的題目，以期為進一步將其開拓成為有用治療鼻咽癌的新藥創立可靠的實行底子和根據。1質料和要領1.1細胞造就和藥物挑選NE1和NE-2Z鼻咽癌細胞系用含10%小牛血清的細胞造就液RPI-1640通例造就(37，

4、52)。取對數生恒久，生長狀態好的細胞用于實行。細胞接種于96孔造就板，每孔200l，1104個細胞。設置4個藥物濃度，別離為50，100，200，400g/l，含DS(0.1)的生長液為陰性比較，40g/l5-Fu作陽性比較。詳細操縱和檢測參考文獻3要領。1.2生物堿分散純化接納95食用乙醇冷浸漬法從口蛄蝦中得到乙醇粗提物4。顛末體系溶劑法開端分散，大孔樹脂HP20層析進一步分散、歸并得到總生物堿，稱為D，顯色要領見文獻5。主動層析儀SHQT-6A純化總生物堿，得組份D1D4，純化后得生物堿D3。1.3生物堿質譜闡發用闡發純的甲醇溶解配制成1g/l的液體，混懸振蕩器振蕩10in，然后1200

5、0r/in高速離心。上清液用液相色譜質譜聯用儀島津DP8080闡發。1.4統計學闡發實行數據資料均用s表現，接納統計學軟件SAS8.0舉行統計學闡發。別離選用直線回歸法、重復丈量資料的方差闡發和單因素方差闡發要領。2結果2.1純化的生物堿對NE1和NE-2Z的按捺作用生物堿對NE1、NE-2Z細胞均有顯著的按捺作用，并呈時間劑量依靠干系。見圖1。結果表現各組間差異具有明顯性(P0.01)。D3和各組間兩兩比力，差異均有明顯性(P0.05)。直線回歸法盤算各組份的I50值。2.2生物堿的純化總生物堿D經硅膠層析分散后的4個組份薄層層析睜開結果如圖2所示。D3只有一個斑點，說明層析分散的結果比力好

6、，可以得到較高純度的生物堿。2.3生物堿的質譜闡發枯燥的待測樣品用色譜純的甲醇溶解。D3的大部門已經溶解，離心后仍舊覺察有小部門未溶解，沉淀能完全溶解在三蒸水中。質譜結果如圖3所示。水溶解的質譜結果未表現。阿托品作為參照，經校正后的生物堿的分子量為234.33。圖1生物堿分散組份對NE1、NE-2Z細胞的影響略3討論生物堿是含負氧化態氮原子的環狀化合物，重要漫衍于植物界，在動物中創造的生物堿很少。比年來，越來越多的生物堿在海洋生物中被創造，這些生物堿多數泉源于海洋，而且都有特異布局和生理活性。生物堿類化合物具有誘導凋亡與按捺凋亡兩方面作用，別離表如今差異的疾病中，尤其在腫瘤方面的研究是如今的熱

7、門6。圖2薄層層析睜開結果略圖3阿托品(a)和生物堿(b)尺度質譜峰圖略前期的動物實行已經證明乙醇粗提物能按捺人低分化鼻咽癌細胞裸鼠移植瘤的生長和轉移的底子上，進一步的實行創造海洋泉源的口蛄蝦提取物中醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物均具有顯著按捺人低分化鼻咽癌細胞系NE1和NE-2Z生長的作用數據沒有表現。實行表白，進一步從粗提物分散提取的總生物堿D和純化的單一生物堿D3對兩種細胞系都表現出精良的按捺作用，并呈時間-劑量依靠干系。口蛄蝦乙醇粗提物中還含有多種物質，有糖類、苷類、卵白多肽等物質數據沒有表現，那么，組份內的別的物質是否起作用或和生物堿起協同作用，仍舊必要進一步的實行來驗證。本實行證明D3具有顯著的抗腫瘤活性，其I50值為80g/l。【參考文獻】1顧帝水,黃培春,孔霞,等.口蝦蛄提取物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長的影響J.當代中西醫結合雜志，2022,1414:1826.2孔霞，黃培春，李明勇，等.口蝦蛄抗鼻咽癌活性身分的挑選及其對細胞周期的影響J.寧夏醫學雜志,2022,297:584.3黃全勇，黃巨恩，黃培春.TT法檢測在差異濃度的氫化可的松下腎小管上皮細胞的活性J.醫學文選，2022，24(4):459.4汪茂田,謝培山,王忠東,等.自然有機化合物提取分散與布局斷定.北京:化學產業出書社,2022：8.5趙慶春,郭濤,張萍，等.大孔吸