1、乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學驗證PPT課件-醫學資料乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學驗證PPT課件-醫學課程要求掌握： 乙肝表面抗原的ELISA法定量檢測方法； ELISA法方法學評價的方法。熟悉： 定量檢測的酶標儀操作要領； 各種緩沖液的配制。了解： ELISA檢測中的影響因素和注意事項。課程要求掌握：試驗目的 進行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法學驗證。試驗目的 進行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法學驗證。 試驗材料 1 試劑盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析試劑盒，福州藍圖生物工程有限公司出品。2 儀器及酶標板酶標儀：Bio-Rad 680 ；洗板機：Bi

2、o-Rad 1575；超純水系統：Millipore Elix ；電熱恒溫培養箱(DNP-9052):上海精宏實驗設備有限公司。 試驗材料 1 試劑盒3 溶液配制0.01M pH7.4的PBS緩沖液： 稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調節溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。質控品： 用PBS緩沖液將標準品配制成6、3、1.5ng/ml三個質控品，每質控品1ml。3 溶液配制試驗方法 1 標準曲線各濃度的配制用PBS緩沖液將標準品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062

3、5ng/ml。試驗方法 1 標準曲線各濃度的配制2 測定方法 設計標準品、質控品及空白分配方案；取出試劑盒中已包被酶標板，取出板條，按需要重新配制；在相應孔中加入系列標準品、質控品及空白對照，每孔50ul；37溫育30min，洗板4次；加入酶標抗體，生物素二抗，50 ul/孔；37溫育30min，洗板4次；加入A、B液,50 ul/孔，37溫育15分鐘。加入終止液，50 ul/孔。2 測定方法 3 標準曲線制作及結果計算酶標板放入酶標儀，蓋上蓋子；在電腦上打開Microplate Manager 5.2軟件選擇450nm波長（參照波長630nm），設置LAYOUT和報告模式，測定各孔吸收值；輸

4、入標準品各濃度值，以雙對數法制備標準曲線，獲取各孔的濃度值，打印標準曲線圖和計算結果。3 標準曲線制作及結果計算ELISA法標準曲線示意圖ELISA法標準曲線示意圖4 準確度（回收率）計算 按示例表1樣式列表并計算回收率。4 準確度（回收率）計算 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學驗證PPT課件-醫學資料5 按示例表列表并計算精密度 。5 按示例表列表并計算精密度 。板內精密度板內精密度板間精密度板間精密度6 檢測限（LOD）計算：取空白孔的OD值的均數加2倍標準差。6 檢測限（LOD）計算：注意事項標準品和質控品配制要準確。實驗各個環節都很重要，每步操作都要認真。注意事項標準品和質控品配制要準確。討 論1.實驗背景介紹（目的、采用的方法、檢測原理、方法學驗證的基本知識介紹）2.本實驗的設計及實施特點3.實驗結果分析4.臨床應用及分析討 論1.實驗背景介紹（目的、采用的方法、檢測原理、方法學驗本實驗報