1、PAGE 10 -大氣壓化學電離質譜法快速測定四種果蔬中阿維菌素農藥殘留阿維菌素是目前農業應用較多的微生物源殺蟲、殺螨、殺菌劑的一種,屬于土壤微生物阿維鏈霉菌的發酵代謝產物，近年來被大量用于農產品生產中，是種植業害蟲防治體系中理想的生物農藥1-4。然而，對于阿維菌素這類高毒農藥，不合理的施藥行為會導致環境中的農藥污染以及農產品中農藥殘留超標，從而影響到人們的身體健康，甚至還可能會引起食物中毒現象5-6。因此，我國規定阿維菌素在番茄、韭菜、結球甘藍等蔬菜以及柑橘類等水果中的最大殘留量為0.0100.50mg/kg7。在農殘檢測中用于檢測蔬果中阿維菌素的標準方法雖多8-10，但標準方法的樣品前處理

2、涉及到的步驟較為繁瑣，耗時較長，當需要進行大量樣品檢測時，將加大檢測人員的任務量，影響檢測時效。根據目前研究趨勢，對阿維菌素的檢測方法主要有：高效液相色譜紫外檢測11-12、高效液相色譜熒光檢測13-14、液相色譜-串聯質譜檢測15-16。其中，紫外和熒光法檢出限欠佳，前處理復雜甚至需進行衍生。質譜法分析時間長，且研究大多數圍繞電噴霧電離(electrosprayionization，ESI)源展開，方法檢出限高但不穩定，結果易受提取樣品中鈉含量的影響，線性不佳，故普適性不高17-18。在越來越注重食品安全的當下，農產品中農藥殘留的監管力度在不斷加強，建立一種簡便、準確、快速的檢測方法，以解決

3、日常檢測多種農藥殘留面臨的基質干擾、檢測時效低等問題顯得極其重要。前處理方法中，QuEChERS法高效便捷，適合大批量樣品的篩查，同時，相關研究也發現，與ESI接口相比，大氣壓化學電離(atmosphericpressurechemicalionization，APCI)接口的基質效應較小19。因此本研究將二者結合，建立了一種新的阿維菌素檢測方法。方法性能測試的結果顯示，該方法檢測穩定性好、基質效應低、回收率精密度符合相關標準規定。因此，本方法是一種適用于日常大批量蔬果中阿維菌素快速定量檢測的方法，可滿足農產品質量安全的快篩監測的需要。1材料與方法1.1材料與試劑實驗室用番茄，結球甘藍，韭菜和

4、橙子，是經實驗檢測后得到的空白樣品，所選的樣品均經勻漿機打漿裝瓶貼標簽后冷凍于-18條件下，備用。阿維菌素農藥標準物質(1000mg/L)，天津農業部環境質量監督檢驗檢測中心；乙酸銨、甲酸(均為優級純)，安譜科學儀器有限公司(上海)；固體氯化鈉(分析純)，西隴化工股份有限公司；甲醇、乙腈(均為4L容量色譜純)，德國默克公司；實驗用水為實驗室自制超純水；丙基乙二胺(primary-secondaryamine，PSA)粉(100mg)，成分為N-丙基乙二胺固相吸附劑，美國安捷倫有限公司。1.2儀器與設備TripleQuad5500型液相色譜-三重四極桿串聯質譜聯用儀(軟件為Analyst)，可根

5、據檢測情況替換離子源，配有APCI等2種接口裝置，美國ABSCIEX公司；N-EVAP112型氮吹儀，美國OrganomationAssociates公司；Elix5型純水機，美國Millipore公司；XH-B型旋渦混合儀，康健醫療器具有限公司；TG16G型臺式高速離心機，凱達科學儀器有限公司；BS200S-WEI型電子天平，德國Sartorius公司；AS30600BDT型超聲波清洗機，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；聚四氟乙烯濾膜(0.22m孔徑)、棕色液相小瓶(規格：2mL)，安捷倫科技有限公司；HY-5型回旋式振蕩器，江蘇省金壇市宏華儀器廠；KS4000i型控溫搖床，德國IKA公司；AU

6、TO-HOMOGEZER型自動勻漿機，HestixScientific公司。1.3實驗方法1.3.1溶液的配制標準儲備液(20mg/L)：準確移取阿維菌素標準物質1.00mL于50.00mL的容量瓶，使用甲醇(色譜純)定容，標準儲備溶液保存于-18條件下，備用。標準工作溶液(0.080mg/L)：準確移取上述配制的標準儲備液(20mg/L)0.10mL于25.00mL容量瓶中，使用配制的甲醇-水溶液(體積比11)定容至刻度線，現配現用。阿維菌素純溶劑標準工作曲線：使用移液管準確移取一定量的標準儲備液(20mg/L)，使用配制的甲醇-水(體積比11)溶液稀釋至0.0125、0.025、0.050

7、、0.10、0.20、0.40mg/L，放置于04環境下待測。5mmol/L乙酸銨(含體積分數為0.5%的甲酸)溶液：使用電子天平準確稱取固體乙酸銨0.392g，吸取0.50mL甲酸溶液，加水稀釋至1000mL刻度，經5min超聲脫氣后作為樣品上機時的流動相使用。1.3.2樣品處理與凈化參照以往改良的QuEChERS法20，將冷凍的空白樣品在常溫下進行解凍后，充分攪拌均勻。使用電子天平準確稱取各類果蔬樣品(100.1)g，置于50mL的尖底塑料離心管中，管中添加20mL的乙腈，設置勻漿機轉速為12000r/min勻漿2min后加入3g氯化鈉，充分振蕩30min，使氯化鈉混合溶解。將該塑料離心管

8、置于10000r/min高速離心機中離心3min后，準確移取2mL上清液于15mL塑料離心管中，添加100mgPSA粉充分混合凈化1min后，在轉速為9000r/min的高速離心機上離心1min。移取上清液1mL于氮吹儀上50條件下緩緩吹至近干，得到各類樣品基質。整個實驗檢測過程中嚴格控制樣品瓶保存溫度為4，以此減少樣品瓶中溶劑的揮發。1.3.3基質混合標準溶液的配制及相關標準曲線繪制將選定的4種樣品按1.3.2的方法處理后，得到4種空白基質。分別用1.3.1所配制的系列純溶劑標準工作液定容至2.00mL，依次配制得到0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4mg/L的系列基質

9、混合標準溶液。將以上系列基質標準溶液經孔徑0.22m的有機濾膜過濾至2mL容量的液相小瓶中，按照設定的儀器條件上機測定，以待測阿維菌素的峰面積作為縱坐標，選擇相對應的添加濃度作為橫坐標，以此繪制阿維菌素的標準曲線。1.3.4檢測方法的穩定性將1.3.1配制的標準工作溶液(0.080mg/L)在APCI模式下按照標準工作液、基質標準溶液和樣品的順序進樣，考慮該模式下的掃描時間，每間隔1h對阿維菌素檢測方法穩定性進行考察。其中統計每間隔時間點連續進樣2次的平均峰面積20，某時間段的穩定性計算如公式(1)所示：某時間段的穩定性/%(1)1.3.5方法的正確度及精密度結合回收率研究正確度，分別將番茄、

10、結球甘藍、韭菜和橙子空白樣品進行添加回收實驗，考察檢測方法的正確度和精密度。準確稱取4種空白基質10g(精確到0.001g)至50mL塑料離心管中，分成5個平行樣，分別添加標準儲備液(20mg/L)0.050、0.100mL，即添加水平為0.1、0.2mg/kg，混勻后同1.3.2節方法進行樣品處理后，甲醇-水(體積比11)定容2.00mL，過膜上機，計算上機所測定的加標回收數據和相對標準偏差(relativestandarddeviation，RSD)。1.4儀器分析條件1.4.1液相色譜條件AcquityUPLCBEHC18色譜柱(1.7m，2.1mm50mm)；柱溫設置：40；進樣量：1

11、0L；設定流速：0.60mL/min；流動相管路A：水，流動相管路B：甲醇(色譜純)；流動相梯度洗脫程序：01.5min20%B逐漸升至50%B；1.54.5min95%B；4.54.6min95%B逐漸下降至20%B；4.56.5min20%B。1.4.2質譜條件離子監測模式：APCI-；氣簾氣：40psi；碰撞氣壓力：8psi；離子化電壓：-4500V；源溫：550；噴霧氣：55psi。質譜檢測參數詳見表1。表1阿維菌素液質質多離子掃描檢測參數(APCI)Table1TheLC-MS-MSmultiplereactionmonitoringparametersofavermectin(AP

12、CI)注：*定量離子2結果與分析2.1方法的檢測穩定性為了確保結果的準確性，考察方法檢測過程中的穩定性是確證方法的必要指標。在以往檢測中，多采用甲醇、乙腈、乙腈-水和甲醇-水作為定容溶劑上機，但是研究表明，定容體系中使用甲醇-水(11，體積比)時可以在長時間(11h)的檢測中展現出更高的穩定性21。故本文采用50%(體積分數)甲醇水進行置換溶劑再上機，以減少溶劑因素對檢測穩定性的影響。由圖1可知，按1.3.1處理的阿維菌素標準工作溶液，在APCI上每隔1h檢測的前后2次峰面積的比值均在5%以下。這表明，阿維菌素在該方法上呈現出的穩定性高。圖1APCI模式下阿維菌素檢測穩定性(5h內)Fig.1

13、ThestabilityofavermectindetectionunderAPCImode(in5h)2.2方法的線性方程及基質效應本文測定過程前處理上選擇采用分散固相萃取，為了避免儀器檢測時引入更多基質，對樣品進行稀釋后上機，以降低基質帶來的影響。由表2可知,按照1.3.3方法處理，在空白基質混合標準曲線及其相應的純溶劑標準曲線0.01250.40mg/L，4種基質添加阿維菌素質量濃度與對應的峰面積間的相關系數均在0.99以上，表現出良好的線性關系。本文參考國內外研究中表示基質效應的方法，采用標準曲線及斜率比值法評價阿維菌素在各樣品上的基質效應22-25。當純溶劑標準曲線的斜率與各基質混合

14、標準曲線的斜率比值為1.00.2時，表示所產生的基質效應在可接受范圍內26。其中斜率比值越趨向1.0，表示所產生的基質效應越小；當比值大于1.0時，表示基質有增強作用；而比值小于這個范圍時，則表示基質產生了抑制作用。結果如表2所示，4種基質的基質效應在0.971.05，這意味著基質效應可忽略不計，同時解決了以往研究中檢測阿維菌素的絕對基質效應低的問題20。因此，在此方法上不同的果蔬樣品產生的基質效應總體較弱，影響較小，幾乎可以用純溶劑標準溶液直接進行測定。表2APCI上阿維菌素的線性回歸方程、相關系數和基質效應(線性范圍：0.01250.40mg/L)Table2Linearregressio

15、nequations,correlationcoefficientsandmatrixeffectsofavermectinonAPCI(0.0125-0.40mg/L)注：“-”表示無2.3四種基質在APCI中的添加回收試驗由表3可知，在0.01、0.1、0.2mg/kg3水平加標回收試驗中，4種基質中添加的阿維菌素平均回收率均為93.3%100.8%，得到RSD為1.8%5.7%。通過分析各基質中阿維菌素的結果可知，該方法檢測阿維菌素精密度高，回收率理想且穩定，滿足阿維菌素農藥殘留分析測試的要求27-28。3結論本文對測定果蔬中阿維菌素的大氣壓化學電離質譜法結合改良的樣品前處理法(QuEC

16、hERS-LC-APCI-MS-MS)進行了可行性的研究，同時考察了檢測過程中的穩定性、基質效應以及方法準確度等指標。結果表明，該方法在4種基質中添加3水平加標回收試驗中，精密度高(1.8%5.7%)，回收率穩定(93.3%100.8%)，且5h內檢測阿維菌素標準溶液的穩定性良好(比值5%)，以及在0.01250.40mg/L表現出理想的線性關系(r20.99)，幾乎不存在基質效應(斜率比：0.971.05)，這意味著，在茄果、蕓薹屬、鱗莖和柑橘類四類農產品中阿維菌素殘留檢測過程中可省略相應基質配標的步驟，直接使用純溶劑標準溶液進行定量。由于實驗測算整個檢測過程僅需0.48h，還可同一時間處理多個樣品進行檢測。綜上所述，該方法操作簡便，基質影響小，方法穩定，準確快捷，不失為一種大批量農產品