1、簡答：流式細胞免疫學技術的質量控制1.單細胞懸液的質控適當的方式；處理紅細胞；實體組織來源標本用機械法；溫度 25377.07.22.免疫熒光染色的質控溫度；濃度；固定劑3.分選后細胞的培養培養基及的選擇；溫度；離心速度；無菌操作問答：舉例做流式時設置的細胞各管的名稱及其所加的抗體（三、對照管的設置： 高老師）。同型對照（對照）：去除抗體非特異性吸附的影響。單色補償（單陽管）：去除相鄰熒光光譜的例：部分。CD34-PE CD34+ CD38-1/ PE- Isotype;CD38-FITC細胞FITC-Isotype: 設置對照門, 去除抗體非特異性吸附的影響2/ CD34-PE ; FITC

2、-Isotype3/CD38-FITC ; PE- Isotype: 單陽管對照, 設置補償: 單陽管對照, 設置補償問答題：參與腫瘤細胞藥物抗性 microRNA 的發現及其實驗驗證技術比較腫瘤耐藥細胞及其敏感細胞株 MicroRNA 的表達差異，從而篩選出參與利用腫瘤細胞藥物抗性的 MicroRNA。可以利用Northern blot 及 RT-PCR 比較耐藥細胞株及敏感細胞株的MicroRNA 的表達量來驗證。3.干系胞的分選方法并舉例：（1） MACS 細胞分選技術2流式細胞儀分選技術：該方法的特點是精度高（99%以上）；多標志分選，正選負選可以同時進行；無菌分選能滿足后續試驗要求熒

3、光標記小鼠的應用及工藝（大概是這個意思）熒光發光是通過激發光激發熒光基團到達高能量狀態，而后產生發射光。常用的有紅色熒 光 蛋 白 （ RFP ） 和 綠 色 熒 光 蛋 白 （ GFP ）。 RFP包 括DsRed,DsRed-Express,mRFPmars,DsRed-Timer 等；GFP 包括 S65T-GFP,EGFP,BFP,RSGFP4等。熒光成像具有操作簡單、所得結果直觀、靈敏度高等特點，在動物體內成像中到廣泛應用，如示蹤表達、標記轉動物、研究腫瘤生物學行為、追蹤干細胞的分化與定位等。熒光蛋白轉小鼠作為一種工具小鼠，廣泛的應用于生物學的各個領域，為干細胞的分化與定位、腫瘤、免

4、疫與腫瘤細胞相互作用和形成等研究提供有力的工具動物和分子影像學技術。制作工藝：1、熒光蛋白表達載體的構建及轉：螢光蛋白的可以被為載體并轉到生小鼠，物體中或轉染到細胞中，例如以攜帶綠色熒光蛋白（GFP）的慢將慢表達載體 FUGW 與 ViraerTMLentiviral PackagingMix 按 12 比例混合,用LipofectamineTM2000 轉染 293FT 細胞,包裝出的經濃縮后以 293T 細胞測定滴度。采用卵卵周隙顯微注射的方式轉小鼠。2、PCR 鑒定熒光蛋白轉組 DNA 進行小鼠：小鼠生后剪腳趾提取表型檢測。3、熒光影像系統分析熒光蛋白轉小鼠4、熒光蛋白轉敲除（名解）小鼠

5、全身重要組織熒光蛋白表達分析通過同源重組將外源定點整合入靶細胞組上某一確定的位點，以達到定點修飾改造上某一基本步驟:的目的的一種技術。ES 細胞的獲得；將載體的構建；打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法)導入同源的胚胎干細胞(EScell)中，使外源 DNA 與胚胎干細胞組中相應部分發生同源重組，將打靶載體中的 DNA 序列整合到內源組中從而得以表達；用選擇性培養基篩選已的細胞；通過觀察嵌和體小鼠的生物學形狀的變化進而了解目的變化前后對小鼠的生物學形狀的改變，達到研究目的敲除的應用領域主要有：的目的。1、2、3、4、建立人類疾病的轉動物模型，為醫學研究提供材料；改造動物型，鑒定新和/或其新功能

6、，研究發育生物學；治療遺傳病；改造生物、培育新的生物品種。現代技術名解：CT 值Ct 值的定義是 PCR 擴增過程中，擴增產物(熒光信號）到達閾值時所經過的擴增循環次數。簡答：RT-PCR 中，什么情況下需要采用絕對定量方法，什么情況下相對定量即可？如果需要知道拷貝數，就必須用絕對定量的方法，否則只需要給出表達相對量就足夠了。相對定量可能比絕對定量要更容易一些，因為它不需要作標準曲線。3.問答：判斷擴增曲線是否良好有哪些指標？曲線拐點清楚，特別是低濃度樣本指數期明顯，擴增曲線整體平行性好。曲線指數期斜率與擴增效率成正比，斜率越大擴增效率越高。標準的基線平直或略微下降，無明顯的上揚趨勢。管的擴增曲線平行性好，表明各反應管的擴增效率相近。2. 簡答題：簡述實驗中如何去除 RNase（1）（2）（3）操作者在整個實驗過程中必須戴手套和，并經常更換玻璃器皿沖洗干凈后，需要 180250干烤 4 小時以上盡可能使用制品（Ep 管、吸頭等），用 0.1%DPEC 溶液浸泡過夜，80烤干后高壓滅菌電泳槽沖洗干凈后，于 30%H2O2 中浸泡 30 分鐘以上，然后用 0.1%DPEC溶液或高壓滅菌水徹底沖洗除 Tris 類試劑外，所有溶液用 0.1%DPEC 處理 12