1、第三章 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和 寄生蟲質(zhì)量控制省疾病預(yù)防控制中心省 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物 學(xué) 會(huì)盧笑叢 研究員標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1、遺傳學(xué)控制2、微生物學(xué)控制3、環(huán)境控制4、營(yíng)養(yǎng)控制 在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體表、體內(nèi)及飼養(yǎng)環(huán)境中存在著種類繁多的微生物和寄生蟲. 這些微生物或者寄生蟲可以是致病的、條件致病的、和非條件致病的。有的是人獸共患的病原體。1、人獸共患病造成的危害 威脅人的健康和生命 未進(jìn)行微生物學(xué)控制的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)有那些危害2、烈性傳染病對(duì)生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)造成嚴(yán)重危害：（1） 種子群死亡不能生產(chǎn)；（2） 正在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)死亡實(shí)驗(yàn)被迫中斷。 3、隱性感染的主要危害： 獲得免疫或隱性感染的動(dòng)物，會(huì)引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性的改

2、變，會(huì)給人假像。 造成錯(cuò)誤的結(jié)果不真實(shí)可靠， 沒有重復(fù)性。 4、生物污染造成的危害： 干擾動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行（將外源性致病因子帶入各種生物實(shí)驗(yàn)材料，如移植腫瘤等）。 造成錯(cuò)誤的結(jié)果不真實(shí)可靠， 沒有重復(fù)性。受到微生物學(xué)控制的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是高質(zhì)量的。對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的安全有保障。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。威脅人的健康和生命對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)有影響 使實(shí)驗(yàn)被迫中斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性有質(zhì)疑為什么要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制？！第三章 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲質(zhì)量控制第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分級(jí)第二節(jié) 普通動(dòng)物 第三節(jié) 清潔級(jí)動(dòng)物與無(wú)特定病原體動(dòng)物第四節(jié) 無(wú)菌動(dòng)物 第五節(jié) 悉生動(dòng)物 第六節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲監(jiān)測(cè) 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3、分級(jí)依 據(jù)標(biāo)準(zhǔn)與等級(jí)自然宿主其他動(dòng)物一、分級(jí)的依據(jù)人危害極大干擾試驗(yàn)病原體1、環(huán)境的凈化程度2、動(dòng)物本身的凈化程度二、國(guó)內(nèi)與國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)3級(jí)4級(jí)普通級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于開放系統(tǒng)SPF級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)悉生動(dòng)物及無(wú)菌，飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)國(guó)際：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三個(gè)等級(jí)2134321普通級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于開放系統(tǒng)SPF級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)悉生動(dòng)物及無(wú)菌，飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)清潔級(jí)動(dòng)物，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)國(guó)內(nèi)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)等級(jí)第二節(jié) 普通動(dòng)物（CV）一、基本概念 二、普通動(dòng)物的管理與用途 三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見人獸共患病四、動(dòng)物間烈性傳染病一、基本概念1、不攜帶人獸共患病和動(dòng)物烈性傳染病的病原及寄生蟲。2、飼養(yǎng)

4、在普通環(huán)境中，3、動(dòng)物體內(nèi)外所攜帶的微生物和寄生蟲很難控制。普通動(dòng)物（CV） 低：微生物分級(jí)中級(jí)別最低 低：生活的環(huán)境要求低 低：微生物控制標(biāo)準(zhǔn)低 低：質(zhì)量較低 低：在實(shí)驗(yàn)研究中敏感性低普通動(dòng)物特點(diǎn)（5個(gè)低）二、普通動(dòng)物的管理與用途（一）普通級(jí)動(dòng)物的用途1、教學(xué)示教之用；2、某些科學(xué)研究為探索方法而從事的預(yù)試驗(yàn)之用；3、沒有培養(yǎng)出高級(jí)別的動(dòng)物，不得以用之；（二 ）管理住的環(huán)境：陽(yáng)光、通風(fēng)、干燥、清潔吃的、喝的：清潔飲用水、干凈飼料普通環(huán)境*防蟲、鼠害、大動(dòng)物接種必要的疫苗小鼠 清潔級(jí) SPF級(jí) 無(wú)菌級(jí)大鼠 清潔級(jí) SPF級(jí) 無(wú)菌級(jí)地鼠 普通級(jí) 清潔級(jí) SPF級(jí) 無(wú)菌級(jí) 豚鼠 普通級(jí) 清潔級(jí) S

5、PF級(jí) 無(wú)菌級(jí)家兔 普通級(jí) 清潔級(jí) SPF級(jí) 無(wú)菌級(jí)犬 普通級(jí) SPF級(jí)猴 普通級(jí) SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物等級(jí)的設(shè)定（2001）！三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見人獸共患病人獸共患病病原體病毒寄生蟲細(xì)菌6、弓形蟲病7、體外寄生蟲病1、狂犬病病毒病2、流行性出血熱病毒病3、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒病4、猴皰疹病毒病5、 沙門氏菌病6、 志賀氏菌病7、結(jié)核分枝桿菌病1、狂犬病（狂犬病毒 tabes virus)（1）感染犬以極度興奮、狂躁不安、流涎、攻擊人獸為特征。（2）我國(guó)是高發(fā)地區(qū)之一。全球均有發(fā)生，以亞洲和非洲為主。（3）所有的溫血?jiǎng)游锒紝?duì)RV易感。（4）沒有明顯的季節(jié)性。 3、主要通過(guò)動(dòng)物咬傷或帶病毒的

6、唾液濺入眼結(jié)膜后致病。 2、人如果感染狂犬病病毒后不進(jìn)行治療的話，死亡率為100% 4、人被動(dòng)物咬傷后，傷口應(yīng)立即徹底清洗，不包扎，并立即（24小時(shí)內(nèi)）到防疫部門進(jìn)行預(yù)防注射。 1、主要存在于中樞神經(jīng)組織、唾液腺和唾液內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)工作者應(yīng)該重點(diǎn)記住以下5點(diǎn)！5、實(shí)驗(yàn)用犬進(jìn)行疫苗接種。2、流行性出血熱(EHFV)漢坦病毒（HV) 在國(guó)際上統(tǒng)稱為腎綜合性出血熱。 在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，主要感染大鼠造成危害。大鼠感染后不表現(xiàn)癥狀，也不發(fā)生死亡。 人感染后,主要臨床特征為發(fā)熱、出血、腎臟損害，若不及時(shí)治療死亡率較高。 在國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位出現(xiàn)過(guò)多起人感染后死亡的現(xiàn)象。一種自然疫源性疾病，主要在野鼠中流行，隱性感

7、染為主。在常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中感染大、小鼠、豚鼠、家兔。黑線姬鼠、長(zhǎng)爪沙鼠對(duì)本病特別敏感。 在實(shí)驗(yàn)室里，防止感染流行性出血熱的最主要措施是滅野鼠、防止野鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。！褐家鼠（ 型病毒）特別要記住的是：（二）感染方式1、污染塵埃飛揚(yáng)形成氣溶膠吸入感染2、病毒污染血、尿 破損皮膚 革螨等昆蟲叮咬完整皮膚3、帶病毒的排泄物通過(guò)消化道粘膜感染（1）野鼠是天然宿主。（2）所有的嚙齒類動(dòng)物以及犬、猴、馬、兔、人易感，動(dòng)物多呈隱性感染。（3）少數(shù)動(dòng)物發(fā)病，出現(xiàn)急性癥狀，主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是脈絡(luò)叢和腦膜。死亡率甚低（4）唾液、鼻分泌物、尿液經(jīng)皮、經(jīng)口、吸入、結(jié)膜均能感染，患LCM動(dòng)物的腫瘤可帶病毒并可傳

8、染人！3、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎（LCM）（5）感染后大多呈預(yù)后良好，僅有極少數(shù)病例死亡。 不顯著感染； 無(wú)腦膜炎癥狀的流感樣疾病； 無(wú)菌性腦膜炎； 腦膜腦脊髓炎；！4、猴皰疹病毒（Simian herpesvirus） B病毒1、猴是自然宿主。在我國(guó)猴感染率10-60%，野生猴更高。隨年紀(jì)增長(zhǎng)抗體陽(yáng)性呈上升趨勢(shì)。 2、猴之間通過(guò)咬傷、抓傷、親密接觸感染。 患病猴多呈良性皰疹性口炎，可自愈。感染特征是潛伏性和復(fù)發(fā)性。3、人感染后則產(chǎn)生致死性腦炎或腦脊髓炎。1、沙門氏菌在自然界分布廣泛；2、消化系統(tǒng)的疾病；3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的沙門氏菌病是由鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌引起，多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均能感染，以小鼠

9、和豚鼠最易感； 4、 消化道感染，不能通過(guò)胎盤。 5、對(duì)化學(xué)消毒劑的抵抗力不強(qiáng)。5、沙門氏菌（salmonella）6、志賀氏菌（Shigella） 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均易感，但是以靈長(zhǎng)類動(dòng)物最典型。 新來(lái)的猴群痢疾發(fā)病率高，如果衛(wèi)生狀況不好，可高達(dá)100%，死亡率60%以上。 急性表現(xiàn)為高熱、嘔吐、排膿血便，劇烈腹痛，出現(xiàn)脫水和循環(huán)衰竭，如治療不及時(shí)極易造 成動(dòng)物死亡 。！7、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中我們最敏感在購(gòu)入猴做實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意在隔離、檢疫后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 8、弓形蟲（Toxoplasma gondii）病中間宿主是貓等多種動(dòng)物、終末宿主是貓 9、體外寄生蟲病四、動(dòng)物間

10、烈性傳染病 1、鼠痘 2、兔出血癥1、鼠痘（mouse pox）（脫腳病) 小鼠急性烈性傳染病 ，急性突然死亡。 慢性表現(xiàn)為： 腳、尾和鼻部出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴(yán)重者可見腳、尾壞死脫落。 隱性感染無(wú)臨床癥狀，實(shí)驗(yàn)激活鼠痘病毒而使鼠痘流行。2、兔出血癥（rabbit epidermic hemorrhagic fever）（1)是家兔的一種急性烈性傳染病。(2)具有傳播快、病程短，發(fā)病率和死亡率高的特點(diǎn)(3)主要感染青壯年兔，多呈急性經(jīng)過(guò)。(4)接種疫苗后，3-4天后即可產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，免疫效果可持續(xù)6個(gè)月以上。在使用普通級(jí)動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，要注意 1、到具有動(dòng)物生產(chǎn)許可證的單位去購(gòu)買動(dòng)物 2、在具

11、有動(dòng)物使用許可證的環(huán)境下實(shí)驗(yàn) 3、犬、兔可以接種一些指定的疫苗 4、購(gòu)回動(dòng)物后要嚴(yán)格檢疫。！第三節(jié) 清潔級(jí)動(dòng)物與無(wú)特定病原體動(dòng)物、基本概念 二、潛在感染的病毒 三、條件致病菌四、對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾大的寄生蟲五、應(yīng)用與飼養(yǎng)管理1、 清潔級(jí)動(dòng)物(Clean animals,CL) （1）是根據(jù)我國(guó)國(guó)情而設(shè)立的等級(jí)動(dòng)物。 （2）除普通動(dòng)物應(yīng)該排除的病原體外還不攜帶對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原體 （3）來(lái)源于SPF動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。 （4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。 （5）目前我們國(guó)家使用廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。！（一）、概念特點(diǎn)：3個(gè)不應(yīng)有1、不應(yīng)有異常的死亡。 2、不應(yīng)有明顯的疾病癥狀 。3、尸體解剖時(shí)，主要臟器、組織無(wú)論是眼

12、觀還是病理切片均不應(yīng)有無(wú)病變。（1）國(guó)際通用 （2）除清潔級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶 主要潛在感染或條件致病和對(duì)研究實(shí)驗(yàn)干擾 大的寄生蟲及病原（3）SPF動(dòng)物來(lái)源于無(wú)菌動(dòng)物（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中（5）目前我們國(guó)家使用廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物！2、無(wú)特定病原體動(dòng)物（Specific pathogen free animals,SPF)（二）清潔級(jí)動(dòng)物和SPF動(dòng)物的共同特點(diǎn)： 1、在屏障系統(tǒng)里生活 2、內(nèi)環(huán)境中沒有致病強(qiáng)的微生物及寄生蟲 3、生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)的效果比普通動(dòng)物好 4、一旦遭到污染后，病原體的傳播強(qiáng)烈 5、在我們國(guó)家廣泛地被應(yīng)用！清潔級(jí)動(dòng)物（1）是根據(jù)我國(guó)國(guó)情而設(shè)立的等級(jí)動(dòng)物。SPF級(jí)動(dòng)物（1）國(guó)

13、際通用 使用范圍不同（3）來(lái)源于SPF動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。（3）來(lái)源于無(wú)菌動(dòng)物來(lái)源不同（二）清潔級(jí)動(dòng)物和SPF動(dòng)物的不同點(diǎn)：（2）要排除的微生物名錄不同二、潛在感染和對(duì)實(shí)驗(yàn)有干擾的病毒 （一）、小鼠肝炎病毒（二）、仙臺(tái)病毒（三）呼腸病毒III型（四）、嚙齒類動(dòng)物細(xì)小病毒（一）小鼠肝炎病毒（mouse hepatitis virus MHV） 1、流行病學(xué)特點(diǎn)：只感染小鼠消化道、呼吸道、垂直傳播實(shí)驗(yàn)可以激活病鼠和無(wú)癥狀帶毒鼠是本病的傳染源！可引起小鼠致死性肝炎、腦炎和腸炎 改變肝酶的活性 改變小鼠機(jī)體的各種免疫應(yīng)答參數(shù) 感染的裸小鼠常呈暴發(fā)性發(fā)病，迅速消瘦，出現(xiàn)進(jìn)行性消耗綜合癥2、影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果2、

14、發(fā)病小鼠的臨床表現(xiàn)是（二）仙臺(tái)病毒(Sendai Virus) 引起的大小鼠呼吸道疾病，經(jīng)空氣傳播。（三）、嚙齒類動(dòng)物細(xì)小病毒 小鼠細(xì)小病毒(Minute virus of mice MVM)和大鼠細(xì)小病毒(Rat parvovirus)。 是迄今所知的唯一抗癌譜廣、具有高度抗癌特異性的微生物，對(duì)肝癌、胃癌、肉瘤等多種腫瘤均有明顯殺傷作用，故其感染將會(huì)給腫瘤的研究造成嚴(yán)重的干擾。三、條件致病菌（一）.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica） 家兔和豚鼠尤為敏感，侵害部位是呼吸器官（鼻腔炎、支氣管肺炎）。本菌對(duì)環(huán)境抵抗力較強(qiáng)，可在異種動(dòng)物間互相傳染，傳播性強(qiáng)。 在不良情況下可使動(dòng)物

15、發(fā)病。（二）.巴氏桿菌(Pasteurella) 多殺巴斯德菌(Pmultocida) 對(duì)兔和小鼠有較強(qiáng)的致病作用，主要侵襲部位呼吸系統(tǒng) 。 嗜肺巴斯德菌(Ppneumotropica)在動(dòng)物的呼吸道、生殖道帶菌率較高，但致病性不強(qiáng)。（三）、綠膿桿菌(P.aeruginosa) 當(dāng)實(shí)驗(yàn)刺激（放射性照射、實(shí)驗(yàn)燒傷、外科處理、使用免疫抑制劑或抗生素）時(shí)，可誘發(fā)動(dòng)物致命的綠膿桿菌菌血癥，引起內(nèi)臟器官?gòu)V泛的灶性壞死。四、對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾大的寄生蟲1、短膜殼絳蟲2、球蟲五、應(yīng)用與飼養(yǎng)管理1應(yīng)用 （1）清潔級(jí)動(dòng)物：是根據(jù)我國(guó)國(guó)情而設(shè)立的等級(jí)動(dòng)物。 （2）SPF動(dòng)物：是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。適用于科研實(shí)驗(yàn)。適用

16、于所有科研實(shí)驗(yàn)。飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中飲水、飼料、墊料、空氣都要除菌后才可以使用。 工作人員要嚴(yán)格按照規(guī)范操作 定期對(duì)動(dòng)物和環(huán)境檢測(cè)！2 SPF動(dòng)物和清潔級(jí)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理（要點(diǎn)）一、概念二、特征三、培育與飼養(yǎng)管理四、應(yīng)用（放在悉生動(dòng)物一起講）第四節(jié) 無(wú)菌動(dòng)物 （germ free animals ，GF ） 一、概念 用現(xiàn)有的檢驗(yàn)技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)外的任何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲的動(dòng)物。 無(wú)菌動(dòng)物的“菌” 是指各種微生物及寄生蟲。 +=無(wú)菌動(dòng)物？ 消化系統(tǒng)：腸道肌層薄。盲腸肥大。肝臟重量相對(duì)下降。 營(yíng)養(yǎng)：體內(nèi)不能合成維生素B和K。 代謝：代謝周期長(zhǎng)，無(wú)菌動(dòng)物血液中含氮量少，腸管對(duì)水的吸收率低。

17、 壽命：長(zhǎng)。二、特征 免疫系統(tǒng)：不發(fā)達(dá)。胸腺、淋巴結(jié)、脾臟小。產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱，血中無(wú)抗體。 循環(huán)系統(tǒng)：心臟相對(duì)縮小，白細(xì)胞數(shù)少且值恒定三、無(wú)菌動(dòng)物的培育飼養(yǎng)管理 1 無(wú)菌動(dòng)物在自然界并不存在，必須用人為的方法培育而成。 2 飼養(yǎng)在隔離系統(tǒng)中； 3 所用一切經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理 4 要定期對(duì)環(huán)境和動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè) 5 補(bǔ)充維生素K、B無(wú)菌技術(shù) 對(duì)無(wú)菌動(dòng)物的培育的正確描述是 無(wú)菌動(dòng)物在因?yàn)橛幸韵绿卣鳎詫?duì)微生物感染敏感： 免疫器官相對(duì)小 血液中無(wú)抗體 白細(xì)胞數(shù)目相對(duì)少，且恒定 產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱！ 無(wú)菌動(dòng)物在消化與代謝方面中有以下特征： 腸道肌層薄，盲腸肥大 體內(nèi)不能合成維生素B和K 代

18、謝周期長(zhǎng)！第五節(jié) 悉生動(dòng)物、概念二、應(yīng)用三、飼養(yǎng)管理 一、基本概念 1、已知菌動(dòng)物或已知菌叢動(dòng)物； 2、飼養(yǎng)在隔離系統(tǒng)； 3、生命力比無(wú)菌動(dòng)物強(qiáng)； 4、可以排除動(dòng)物體內(nèi)帶有的各種不明確的微生物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，更不會(huì)帶有傳染性疾患。！二、無(wú)菌動(dòng)物和悉生動(dòng)物的應(yīng)用能夠廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域各個(gè)級(jí)別動(dòng)物的先驅(qū)。悉生動(dòng)物飼喂無(wú)抗原飼料作為種子SPF動(dòng)物清潔級(jí)動(dòng)物作為種子各個(gè)級(jí)別動(dòng)物的先驅(qū)飼喂細(xì)菌無(wú)抗原動(dòng)物 無(wú)菌動(dòng)物無(wú)菌豚鼠死亡大腸桿菌豚鼠福氏痢疾桿菌存活大腸桿菌對(duì)痢疾桿菌有拮抗作用（1）微生物的研究 （2）衰老機(jī)理研究 無(wú)菌動(dòng)物的壽命比同種普通動(dòng)物的壽命長(zhǎng)，對(duì)23年齡無(wú)菌大鼠的研究證明，其心、腎、肺、腦等部位沒有檢出與年齡相關(guān)的病變，而作為對(duì)照組SFP大鼠則有這種變化。 （3）、免疫學(xué)研究 球蛋白來(lái)自與消化道菌的刺激。給無(wú)菌動(dòng)物喂無(wú)抗原的飼料時(shí)，動(dòng)物血清完全沒有丙種球蛋白和特異性抗體存在。 無(wú)菌動(dòng)物血液中無(wú)特異性抗體，很適合做各種免疫現(xiàn)象的研究。無(wú)抗原動(dòng)物應(yīng)用疾病的診斷纖維蛋白纖維