1、同濟大學附屬同濟醫院檢驗科免疫組項目操作指導書TJYYJYKMY/XMZ701第2版標題：抗核抗體(ANA)測定第7章 第01號第 PAGE 4 頁 共 NUMPAGES 4 頁1. 目的：檢測血清標本中的抗核抗體。2. 適用范圍：同濟醫院檢驗科免疫室。3. 項目名稱：抗核抗體測定。4. 方法：間接免疫熒光法。5. 檢測原理: 固定在生物薄片載片反應區上的Hep-2細胞和靈長類肝臟冰凍切片與稀釋后的血清溫育。如果標本陽性，IgA，IgG，IgM類特異性抗體與核抗原結合，在第二步，結合的抗體與熒光素標記的抗人抗體反應并可用熒光顯微鏡觀察。 試劑：6.1 品牌：德國歐蒙。6.2 包裝規格：50人份

2、；30人份。6.3 內含物：6.3.1 10張生物薄片載片，每張有52個覆有Hep-2細胞和靈長類肝組織復合片的生物片。6.3.2 0.3m1熒光素標記羊抗人IgG濃縮液，使用時用PBS-Tween緩沖液1:5稀釋。6.3.3 0.lml陽性對照血清，直接使用。6.3.4 0.lml陰性對照血清，直接使用。6.3.5 3.0ml封片介質 (磷酸鹽緩沖甘油PH8.4)。7 儀器品牌、型號： OLYMPUS熒光顯微鏡(病理科提供)。8. 操作步驟：8.1 打印工作單:8.1.1 打開電腦及打印機電源，8.1.2 雙擊齊效檢驗系統，登陸工號與密碼；8.1.3 雙擊報告處理，單擊標本申請信息打開標本申

3、請明細信息查詢，打開左上角的所有信息，選擇未生成報告信息。8.1.4 在檢驗項目處選擇ANA執行查詢，點擊打印申請單，打印出工作單。8.2 排列待測標本:根據工作單上的庫位號從標本架中找出相應標本，并按工作單上的 順序排列在樣本架上。8.3 按以下步驟開始操作:8.3.1 準備：生物薄片達到室溫時方可打開包裝。不要觸摸生物薄片，對每塊玻片編一個順序號。8.3.2 稀釋:用PBS-Twen緩沖液將待測血清1：101稀釋，每次實驗均需陽性、陰性對照。8.3.3 加標本:將加樣板放在泡沫塑料板上，加25ul稀釋血清至加樣板每一反應區，避免氣泡。加完所有標本后開始溫育。8.3.4 溫育:將生物薄片蓋在

4、加樣板的凹槽里，反應開始。確保每一樣品均與生物薄片接觸且樣品間互不接觸。室溫溫育30分鐘。8.3.5 沖洗：用燒杯盛 PBS-Tween緩沖液流水沖洗生物薄片載片，然后立即將其進入裝有PBS-Twe緩沖液的小燒杯中至少一分鐘。不必混搖。8.3.6 加試劑:從PBS-Tween緩沖液中取出一張生物薄片載片，滴加20ul熒光素，標記抗人球蛋白(結合物)至一潔凈加樣板的反應區，完全加完方可繼續溫育。熒光素標記抗人球蛋白使用前需混勻，用PBS-Tween緩沖液稀釋。8.3.7 溫育:將生物薄片載片避光溫育30分鐘。8.3.8 沖洗:用燒杯盛 PBS-Tween緩沖液流水沖洗生物薄片載片，然后立即將其浸

5、入裝有PBS-Tween緩沖液的小杯中至少一分鐘。8.3.9 封片:將蓋玻片直接放在泡沫塑料板的凹槽里。滴加甘油/PBS至蓋玻片;每反應區約101ul，從PBS-Tween緩沖液中取出一張生物薄片載片，用紙擦干背面私四邊，不要擦拭反應區間隙。將生物薄片載片面朝下放在已準備好的蓋玻片上，立即查看并調整使蓋玻片欠入載里片的凹槽，然后進行下一張。8.3.10 結果判讀：熒光顯微鏡下觀察。8.4 結果：8.4.1 1:40無熒光反應：陰性，血清標本申末檢出抗核抗體。8.4.2 1:40或更高：陽性，提示有不同類型的疾病或其他疾病。8.5 發送報告：詳見免疫報告發送程序。9. 參考范圍：正常人陰性。10. 臨床意義：己證實抗核抗體對很多自身免疫性疾病有診斷價值，這些抗體在不同疾病中有特征性，特別是風濕性疾病。主要有：自身免疫性疾病 發生率系統性紅斑狼瘡(SLE)活動性 95-100%非活動性 85-100%藥物誘導的紅斑狼瘡 100%混合性結締組織病 (MCTD) 100% 類風濕性關節炎 20-40%其他風濕性疾病 20-50%進行性系統性硬化癥 85-95% 多肌炎和皮肌炎 30-50%干燥綜合癥 70-80%慢性活動性肝炎 30-40%潰瘍性結腸炎 26%11. 病人準備、標本要求：標本為血清時最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。12. 注意事項:12.1 接受標本后不能及時檢測