1、第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測第1頁，共29頁。內(nèi)容簡介 本章講述了食品食品中常見有害有毒物質(zhì)如有機氯農(nóng)藥、有機磷農(nóng)藥、黃曲霉毒素等的測定方法以及各種測定方法的注意事項。第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測第2頁，共29頁。學(xué)習(xí)目的與要求：1、掌握食品常見有害有毒物質(zhì)如有機氯農(nóng)藥、有機磷苯農(nóng)藥殘留及黃曲霉毒素等的測定操作方法2、熟練使用氣相色譜和液相色譜儀第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測第3頁，共29頁。重點：有機氯農(nóng)藥、有機磷苯農(nóng)藥殘留及黃曲霉毒素等的測定操作方法、氣相色譜和液相色譜儀的使用難點：氣相色譜和液相色譜儀的使用第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測第4頁，共29頁。第一節(jié) 有機氯

2、農(nóng)藥殘留的測定第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定本章目錄第七章 食品常見有害有毒物質(zhì)的檢測第5頁，共29頁。一、定性檢驗1、焰色法 2、亞鐵氨化銀試紙法二、定量檢驗 采用氣相色譜法第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定第6頁，共29頁。二、定量檢驗1、農(nóng)藥提取2、凈化3、測定（1）氣相色譜參考條件色譜柱：內(nèi)徑34mm，長1.22m的玻璃柱，內(nèi)裝涂以O(shè)V-7（15g/L）和QF-1（20g/L）的混合固定液的80100目硅藻土。第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定第7頁，共29頁。（2）電子捕獲檢測器 汽化室溫度：215；色譜柱溫度：195 ；檢測器溫度：225 ；載氣（氮氣）流速：90ml/m

3、in；（3）色譜圖（4）計算第一節(jié) 有機氯農(nóng)藥殘留的測定第8頁，共29頁。一、定性檢驗1、剛果紅法 2、紙上斑點法二、定量檢測 采用氣相色譜檢測法 第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第9頁，共29頁。二、定量檢測1、標準溶液的配制 2、試樣制備 3、有機磷農(nóng)藥提取 4、有機磷農(nóng)藥凈化5、測定第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第10頁，共29頁。5、測定（1）氣相色譜條件； 色譜柱：玻璃柱2.6m3mm （id），填裝涂有4.5DC2002.5OV17的ChromosorbWAW DMCS（80100目）的擔體。玻璃柱2.6m3mm（id），填裝涂有 1.5（質(zhì)量分數(shù)）DCOE1的Chromosorb WA

4、W DMCS（6080目）氣體速度：氮氣（N2）50mLmin、氫氣（H2）100ml/min、空氣 50mLmin。溫度：柱溫240、汽化室260、檢測器270 第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第11頁，共29頁。（2）測定。吸取25L混合標準液及樣品凈化液，注入色譜儀中，以保留時間定性。以試樣的峰高或峰面積與標準比較定量。6、結(jié)果計算第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第12頁，共29頁。7、16種有機磷農(nóng)藥的色譜圖 第二節(jié) 有機磷農(nóng)藥殘留的測定第13頁，共29頁。黃曲霉毒素，是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物。 已分離鑒定出12種，包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。

5、第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定黃曲霉毒素B1 黃曲霉毒素B2 黃曲霉毒素B3 黃曲霉毒素B4黃曲霉毒素B5黃曲霉毒素B6第14頁，共29頁。表1 中國對食品中黃曲霉毒素的最高允許含量 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定食 物 名 稱最高允許含量/(ug/kg)玉米、花生、花生油、堅果和干果(核桃、杏仁)20(黃曲霉毒素B1)玉米、花生仁制品(按原料折算)20(黃曲霉毒素B1)大米、其他食用油(香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油)10(黃曲霉毒素B1)其他糧食(麥類、面粉、薯干)、發(fā)酵食品(醬油、食用醋、豆豉、腐乳制品)、淀粉類制品(糕點、餅干、面包、裱花蛋糕)5黃曲霉

6、毒素B1)牛乳及其制品(消毒牛奶、新鮮生牛乳、全脂牛奶粉、淡煉乳、甜煉乳、奶油)、黃油、新鮮豬組織(肝、腎、血、瘦肉)0.5(黃曲霉毒素M1)第15頁，共29頁。一、薄層層析法 1、儀器 小型粉碎機、樣篩、電動振蕩器、玻璃濃縮器、玻璃板5cm20cm、薄層板涂布器、展開槽(25cm6cm4cm)、紫外光燈100125W、波長365nm濾光片、微量注射器。2、測定方法 (一)樣品處理 (二)黃曲霉毒素提取 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第16頁，共29頁。(三)測定 1單向展開法 (1)薄板制備：稱取3g硅膠G，加23倍量的水，研磨12min呈糊狀后，倒入涂布器推成5cm20cm，厚度約0.25mm的

7、薄層板3塊。在空氣中干燥15min，在100活化2h，取出，放干燥器中保存。一般可保存23d，若放置時間較長，可再活化后使。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第17頁，共29頁。(2)點樣在距薄層板下端3cm的基線上用微量注射器或血紅素吸管滴加樣液。第一點：10l AFTB,標準使用液(0.04gml)。 第二點：20l 樣液。 第三節(jié)：20l 樣液+10L0.04gml AFTB1標準使用液。 第四點：20l 樣液+10L0.02gml AFTB1標準使用液。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第18頁，共29頁。 (3)展開與觀察 在展開槽內(nèi)加10mL無水乙醚，預(yù)展12cm，取出揮干。再于另一展開槽內(nèi)加10

8、mL丙酮三氯甲烷(8+92)，展開1012cm，取出，在紫外光下觀察結(jié)果. 方法如下： a由于樣液上加滴了AFTB1標準，可使AFTB1標準點與樣液中AFTB1，熒光點重疊。若樣液為陰性，薄板上第三點AFTB1為0.0004g，可用作檢查樣液中AFTB1最低檢出量是否正常出現(xiàn)；若樣液為陽性；則起定性作用。薄層板上第四點AFTB1標準為0.002g，主要起定位作用。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第19頁，共29頁。b若第二點與AFTB1標準點的相應(yīng)位置上無藍色熒光點，則表示樣品中AFTB1含量5gkg；若在相應(yīng)位置上有藍色熒光點，則需進行確證試驗。 (4)確證試驗：為確認薄層樣上樣液熒光系由黃曲霉毒

9、素B1產(chǎn)生的，加滴三氟乙酸，產(chǎn)生AFTB1的衍生物，展開后此衍生物的比移值約在0.1左右。于薄層板左邊依次滴加兩個點。 第一點：10L 0.04gmL AFTB1標準使用液。 第二點：20L樣液 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第20頁，共29頁。 于以上兩點各加一小滴三氟乙酸蓋于其上，反應(yīng)5min后，用吹風(fēng)機吹熱風(fēng)2min(板上溫度不高于40)，再于薄層板上滴加以下兩點。 第三點：10L 0.04gmL AFTB1標準使用液。 第四點：20L樣液。 按上法展開并觀察，樣液是否產(chǎn)生與AFTB1標準點相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四兩點，可依次作為標準與標準的衍生物空白對照。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第

10、21頁，共29頁。（5）稀釋定量：樣液中的AFTB1熒光點的熒光強度，如與AFTB1標準點最低檢出量（0.0004g）的熒光強度一致，則樣品中AFTB1含量為即為5gkg。 若樣液中熒光強度比最低檢出量強，則根據(jù)強度估計，減少滴加微升數(shù)，或?qū)右合♂尯笤俚渭硬煌⑸龜?shù)，直至樣液的熒光強度與最低檢出量的熒光強度一致為止。滴加式樣如下： 第一點：10LAFTB1標準使用液（0.04gmL）。 第二點；根據(jù)情況滴加 10L樣液。 第三點：根據(jù)情況滴加 15L樣液。 第四點：根據(jù)情況滴加20L樣液。第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第22頁，共29頁。（6）結(jié)果計算 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定式中 X樣品中AFT

11、B1的含量，y/kg； V1加入苯一乙睛混合液的體積，mL； V2出現(xiàn)最低熒光時滴加樣液的體積，mL； D樣液的總稀釋倍數(shù)； m1 加入苯一乙腈混合液溶解時相當樣品的質(zhì)量，g； 0.0004AFTB1的最低檢出限量，g。第23頁，共29頁。 2雙向展開法 (1) 點樣：取薄層板三塊，在距下端3cm基線上，在距左邊緣0.8lcm處，各滴加10LAFTB1(0.04gmL)標準液，在距左邊緣2.83cm處，各滴加20L樣液。然后在第二塊板的樣液點上加滴10L AFTB1(0.04gmL)標準液，在第三塊板的樣液點上加滴10L AFTB1(0.02gmL)標準液。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第24頁，

12、共29頁。(2) 展開a橫向展開：在展開槽內(nèi)的長邊置一玻璃支架，加10mL無水乙醇，將上述點好的薄層板靠標準點的長邊，置于展開槽內(nèi)展酗，展至板端后，取出揮干。根據(jù)情況，需要時，可再重復(fù)12次。b縱向展開：揮干的薄層板以丙酮三氯甲烷(8:92)展開至10l2cm為止。丙酮與氯甲烷的比例，根據(jù)不同條件自行調(diào)節(jié)。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第25頁，共29頁。 (3) 觀察與評定結(jié)果:a在紫外光下觀察第一、二塊板，若第二塊板在AFTB1標準點的相應(yīng)處出現(xiàn)最低檢出量，而在第一板與第二板的相同位置上未出現(xiàn)熒光，則樣品中AFTB1含量5gkg。 b若第一塊板與第二塊板的相同位置上出現(xiàn)熒光點，則將第一塊板與第

13、三塊板比較，著第三塊板上第二點與第一塊板上第二點的相同位置上的熒光點是否與AFTB1標準點重疊，如果重疊，再進行確證試驗。在具體測定中，三塊板可以同時做，也可按順序做。當?shù)谝粔K板出現(xiàn)陰性時，第三塊板可以省略，如第一塊板為陽性,則第二塊板可省略，直接做第三塊。 第三節(jié) 黃曲霉毒素的測定第26頁，共29頁。(4)確認試驗：另取薄層板二塊，于第四、五兩板距左邊緣0.81cm處，各滴加10LAFTB1(0.04gmL)標準液及1小滴三氟乙酸；在距左邊緣2.83cm 處，于第四板滴加20L樣液及1小滴三氟乙酸；于第五板滴加20L樣液、10LAFTB1標準液及1小滴三氟乙酸，反應(yīng)5min后，用熱風(fēng)吹2min（板上溫度不高于 40）。 再用雙向展開法展開后，觀察樣液是否產(chǎn)生與AFTB1標準點重疊的衍生物。觀察時，可將第一板作為樣液的衍生物空白板。若樣液AFT