1、食品檢驗工(中級)黃高明 主編 第十一章 茶葉的檢驗第十一章 茶葉的檢驗 掌握直接灰化法的測定原理和操作要點；掌握高溫爐的使用、坩堝的處理、樣品炭化、灰化等的基本操作方法；熟練掌握酸度、茶葉中粗纖維的測定原理及操作技能；掌握用平板菌落計數法測定霉菌、酵母菌的方法和檢測技能。第一節茶葉中水溶性灰分堿度的測定1)0.1mol/L鹽酸標準溶液。2)甲基橙指示劑：甲基橙0.5g，用熱蒸餾水溶解后稀釋至1L。1)坩堝：3050mL的石英坩堝或瓷坩堝(一次性使用)。2)馬弗爐(muffle furnace)。3)坩堝鉗。4)干燥器。3.儀器2.試劑1.原理第一節茶葉中水溶性灰分堿度的測定5)分析天平。6)

2、磨碎機：由不吸收水分的材料制成；死角盡可能小，易于清掃；使磨碎樣品能完全通過孔徑為6001000m的篩。7)電熱板。(1)坩堝的恒重用稀鹽酸(14)將坩堝煮12h，洗凈置于馬弗爐內，在(52525)下灼燒30min，待爐溫降至200以下時，將坩堝移入干燥器中，冷卻至室溫，稱重(準確至0.0001g)，重復灼燒至恒重。(2)試樣的制備 4.操作方法第一節茶葉中水溶性灰分堿度的測定1)緊壓茶：用錘子和鑿子將緊壓茶分成48份，再在每份不同處取樣，用錘子擊碎，混勻，按上述方法制備試樣。2)除緊壓茶以外的各類茶：先用磨碎機將少量試樣磨碎，棄去，再磨碎其余部分，作為待測試樣。(3)炭化稱取混勻的磨碎試樣2

3、g(準確至0.0001g)置于坩堝內，在電熱板上徐徐加熱，使試樣充分炭化至無煙。(4)灰化將坩堝移入(52525)馬弗爐內，灼燒至無炭粒(不少于2h)。第一節茶葉中水溶性灰分堿度的測定(5)水溶性灰分堿度的測定加約20mL熱水于所得的灰分中，全部移入已放好濾紙的漏斗中，然后用少量熱水洗滌濾紙上的殘留物，將洗滌液并入濾液，待濾液冷卻后加2滴甲基橙指示劑，用0.1molL鹽酸溶液滴定至溶液由黃色變為紅色，記錄消耗標準鹽酸溶液的體積。(1)堿度用毫摩爾數表示(100g干態磨碎樣品)(2)堿度用氫氧化鉀的質量分數表示0.05611氫氧化鉀的摩爾質量(g/mmol)。6.說明5.結果計算第二節茶葉中氟含

4、量的測定一、擴散-氟試劑比色法1)丙酮。2)硫酸銀-硫酸溶液(20gL)：稱取2g硫酸銀，溶于100mL硫酸(31)中。3)氫氧化鈉-無水乙醇溶液(40gL)：取4g氫氧化鈉，溶于無水乙醇并稀釋至100mL。4)乙酸(1molL)：取3mL冰乙酸，加水稀釋至50mL。2.試劑1.原理第二節茶葉中氟含量的測定5)茜素氨羧絡合劑溶液：稱取0.19g茜素氨羧絡合劑，加少量水及氫氧化鈉溶液(40gL)使其溶解，加0.125g乙酸鈉，用1乙酸溶液調節pH值為5.0(紅色)，加水稀釋至500mL，置冰箱內保存。6)乙酸鈉溶液(250gL)。7)硝酸鑭溶液：稱取0.22g硝酸鑭，用少量1乙酸溶液溶解，加水至

5、約450mL，用乙酸鈉溶液(250gL)調節pH值為5.0，再加水稀釋至500mL，置冰箱內保存。第二節茶葉中氟含量的測定8)緩沖液(pH4.7)：稱取30g無水乙酸鈉，溶于400mL水中，加22mL冰乙酸，再緩緩加冰乙酸調節pH值為4.7，然后加水稀釋至500mL。9)二乙基苯胺-異戊醇溶液(5100)：量取25mL二乙基苯胺，溶于500mL異戊醇中。10)硝酸鎂溶液(100gL)。11)氫氧化鈉溶液(40gL)：稱取4g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至100mL。12)氟標準溶液：準確稱取0.2210g經95105干燥4h的氟化鈉，溶于水后移入100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻。第二節茶葉中氟含

6、量的測定13)氟標準使用液：吸取1.0mL氟標準溶液，置于200mL容量瓶中，加水至刻度，混勻。14)圓濾紙片：把濾紙剪成直徑為4.5cm圓，浸于氫氧化鈉-無水乙醇溶液，于100烘干、備用。1)塑料擴散盒：內徑4.5cm，深2cm，蓋內壁頂部光滑，并帶有凸起的圈(盛放氫氧化鈉吸收液用)，蓋緊后不漏氣。2)恒溫箱：(551)。3)可見分光光度計。4)酸度計：PHS2型或其他型號。3.儀器第二節茶葉中氟含量的測定5)馬弗爐。(1)擴散單色法1)樣品處理谷類樣品：稻谷去殼，其他糧食除去可見雜質，取有代表性樣品50100g，粉碎，過40目篩(孔徑為.)。蔬菜、水果：取可食部分，洗凈、晾干、切碎、混勻，

7、稱取100200g樣品，以80鼓風干燥，粉碎，過40目篩(孔徑為.)。結果以鮮重表示，同時要測水分。4.分析步驟第二節茶葉中氟含量的測定特殊樣品(含脂肪高、不易粉碎過篩的樣品，如花生、肥肉、含糖分高的果實等)：稱取研碎的樣品1.002.00g置于坩堝(鎳、銀、瓷等)內，加4mL硝酸鎂溶液(100gL)，加氫氧化鈉溶液(100gL)使其呈堿性，混勻后浸泡0.5h，將樣品中的氟固定，然后在水浴上揮干，加熱炭化至不冒煙，再于600馬弗爐內灰化6h，待灰化完全，取出放冷，取灰分進行擴散。2)測定 取塑料盒若干個，分別于盒蓋中央加0.2mL氫氧化鈉-無水乙醇溶液，在圈內均勻涂布，于(551)恒溫箱中烘干

8、，形成一層薄膜，取出備用；或把濾紙片貼于盒內備用。第二節茶葉中氟含量的測定 稱取1.002.00g處理后的樣品置于塑料盒內，加4mL水，使樣品均勻分布，不能結塊。加4mL硫酸銀-硫酸溶液(20gL)，立即蓋緊，輕輕搖勻。若樣品經灰化處理，則先將灰分全部移入塑料盒內，用4mL水分數次將坩堝洗凈，洗液均倒入塑料盒內，并使灰分均勻分散，若坩堝還未完全洗凈，可加4mL硫酸銀-硫酸溶液(20gL)于坩堝內繼續洗滌，將洗液倒入塑料盒內，立即蓋緊，輕輕搖勻，置(551)恒溫箱內保溫20h。第二節茶葉中氟含量的測定 分別于塑料盒內加0.0mL、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mL氟標準使用液(相當于0、

9、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0g氟)。補加水至4mL，各加硫酸銀-硫酸溶液(20gL)4mL，立即蓋緊，輕輕搖勻(切勿將酸濺在蓋上)置恒溫箱內保溫20h。 將盒取出，取下盒蓋，分別用20mL水，少量多次地將盒蓋內氫氧化鈉薄膜溶解，并用滴管小心完全地移入100mL分液漏斗中。 分別于分液漏斗中加3mL茜素氨羧絡合劑溶液、3.0mL緩沖液、8.0mL丙酮、3.0mL硝酸鑭溶液、13.0mL水，混勻，放置10min，各加入10.0mL二乙基苯胺-異戊醇溶液(5100)，振搖2，待分層后，棄去水層，分出有機層，并用濾紙過濾于10mL帶塞比色管中。第二節茶葉中氟含量的測定 用1cm比色皿于580

10、nm波長處以標準零管調節零點，測吸光值，繪制標準曲線，用樣品吸光值與標準曲線比較求得氟的含量。3)結果計算(2)擴散復色法1)樣品處理：同擴散單色法。2)測定 取塑料盒若干個，分別于盒蓋中央加0.2mL氫氧化鈉-無水乙醇溶液(40gL)，在圈內均勻涂布，于(551)恒溫箱中烘干，形成一層薄膜，取出備用；或把濾紙片貼于盒內備用。第二節茶葉中氟含量的測定 稱取1.002.00g處理后的樣品置于塑料盒內，加4mL水，使樣品均勻分布，不能結塊。加4mL硫酸銀-硫酸溶液(20gL)，立即蓋緊，輕輕搖勻。若樣品經灰化處理，則先將灰分全部移入塑料盒內，用4mL水分數次將坩堝洗凈，洗液均倒入塑料盒內，并使灰分

11、均勻分散，若坩堝還未完全洗凈，可加4mL硫酸銀-硫酸溶液(20gL)于坩堝內繼續洗滌，將洗液倒入塑料盒內，立即蓋緊，輕輕搖勻，置(551)恒溫箱內保溫20h。第二節茶葉中氟含量的測定 分別于塑料盒內加0.0mL、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mL氟標準使用液(相當0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0g氟)。補加水至4mL，各加硫酸銀-硫酸溶液(20gL)4mL，立即蓋緊，輕輕搖勻(切勿將酸濺在蓋上)置恒溫箱內保溫20h。 取下盒蓋，分別用10mL水分數次將盒蓋內的氫氧化鈉薄膜溶解，并用滴管小心完全地移入25mL帶塞比色管中。第二節茶葉中氟含量的測定 分別于帶塞比色管中加2.0mL

12、茜素氨羧絡合劑溶液、3.0mL緩沖液、6.0mL丙酮、2.0mL硝酸鑭溶液，再加水至刻度，混勻，放置20min，用3cm比色皿于波長580nm處以零管調節零點，測各管吸光度，繪制標準曲線比較。3)結果計算：同擴散單色法。二、灰化蒸餾-氟試劑比色法1)丙酮。2)鹽酸(111)：取10mL鹽酸，加水稀釋至120mL。2.試劑1.原理第二節茶葉中氟含量的測定3)乙酸鈉溶液(250gL)。4)乙酸溶液：同擴散-氟試劑比色法。5)茜素氨羧絡合劑溶液：同擴散-氟試劑比色法。6)硝酸鎂溶液(100gL)。7)硝酸鑭溶液：同擴散-氟試劑比色法。8)緩沖液(pH4.7)：同擴散-氟試劑比色法。9)氫氧化鈉溶液(

13、100gL)。10)酚酞-乙醇指示液(10gL)。11)硫酸(21)。12)氫氧化鈉溶液(40gL)：同擴散-氟試劑比色法。13)氟標準使用液：同擴散-氟試劑比色法。第二節茶葉中氟含量的測定1)電熱恒溫水浴鍋。2)電爐：800W。3)酸度計。4)馬弗爐。5)蒸餾裝置(見圖11-1)。3.儀器第二節茶葉中氟含量的測定圖11-1蒸餾裝置1電爐2蒸餾瓶3溫度計4冷凝管5小燒杯第二節茶葉中氟含量的測定6)可見分光光度計。(1)樣品處理1)糧食：同擴散-氟試劑比色法。2)蔬菜：同擴散-氟試劑比色法。3)魚、肉類：取鮮肉絞碎，混合。4)蛋類：去殼，將蛋白、蛋黃打勻。5)豆制品：將樣品搗碎、混勻。4.操作步

14、驟第二節茶葉中氟含量的測定(2)灰化稱取混勻樣品5.00g(以鮮重計)，置于30mL坩堝內，加5.0mL硝酸鎂溶液(100gL)和0.5mL氫氧化鈉溶液(100gL)，使其呈堿性，混勻后浸泡0.5h，置水浴上蒸干，再低溫炭化，至完全不冒煙為止。(3)蒸餾1)于坩堝中加入10mL水，將數滴硫酸(21)慢慢加入坩堝中，防止溶液飛濺，中和至不產生氣泡為止。2)于蒸餾瓶中加60mL硫酸(21)，數粒無氟小玻璃珠，連接蒸餾裝置，加熱蒸餾。3)取下冷凝管，用滴管加水洗滌冷凝管34次，洗液合并于燒杯中。第二節茶葉中氟含量的測定4)分別吸取0.0mL、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL氟標準使用液置于

15、蒸餾瓶中，補加水至30mL，以下按蒸餾操作中2)、3)進行。(4)測定1)分別吸取標準系列蒸餾液和樣品蒸餾液各10.0mL置于25mL帶塞比色管中。2)分別于帶塞比色管中加2.0mL茜素氨羧絡合劑溶液、3.0mL緩沖液、6.0mL丙酮、2.0mL硝酸鑭溶液，再加水至刻度，混勻，放置20min，用3cm比色杯于波長580nm處以零管調節零點，測各管吸光度，繪制標準曲線比較。第二節茶葉中氟含量的測定三、氟離子選擇電極法1)乙酸鈉溶液(3molL)：稱取204g乙酸鈉(CH3COONa3H2O)溶于300mL水中，加乙酸(1molL)，調節pH值至7.0，加水稀釋至500mL。2)檸檬酸鈉溶液(0.

16、75molL)：稱取110g檸檬酸鈉(Na3C6H5O72H2O)溶于300mL水中，加14mL高氯酸，再加水稀釋至500mL。2.試劑1.原理5.結果計算第二節茶葉中氟含量的測定3)總離子強度緩沖劑：乙酸鈉溶液(3molL)與檸檬酸鈉溶液(0.75molL)等量混合，臨用時現配制。4)鹽酸(111)。5)氟標準溶液。6)氟標準使用液：吸取10.0mL氟標準溶液置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。1)氟電極。2)酸度計(或離子計)：0.01pH單位。3)磁力攪拌器。4)甘汞電極。3.儀器第二節茶葉中氟含量的測定1)稱取1.00g粉碎過40目篩(孔徑為0.45)的樣品，置于50mL容量瓶中，

17、加10mL鹽酸(111)，密閉浸泡提取1h(不時輕輕搖動)，應盡量避免樣品粘于瓶壁上。2)吸取0，1.0mL，2.0mL，5.0mL，10.0mL氟標準使用液(相當于0，1.0g，2.0g，5.0g，10.0g氟)，分別置于50mL容量瓶中，于各容量瓶中分別加入25mL總離子強度緩沖劑，10mL鹽酸，加水至刻度，混勻，備用。3)將氟電極和甘汞電極與測量儀器的負端與正端相聯接。4.分析步驟第二節茶葉中氟含量的測定4)以電極電位為縱坐標，氟離子濃度為橫坐標，在半對數坐標紙上繪制標準曲線，根據樣品電位值在曲線上求得含量。1)此法不適用于脂肪含量高而又未經灰化的樣品(如花生、肥肉等)。2)最低檢出含量

18、為0.25mgkg。3)氟電極在每次使用前，先用水洗至電位為340mV以上。4)塑料和玻璃儀器在使用前需用11鹽酸及水淋洗。6.說明5.結果計算第三節茶葉中霉菌和酵母菌的測定1)馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基。2)孟加拉紅培養基。3)高鹽察氏培養基。4)滅菌蒸餾水。5)乙醇。(1)采樣取樣時須特別注意樣品的代表性和避免采樣時的污染。4.操作步驟3.檢驗程序2.培養基和試劑1.設備和材料第三節茶葉中霉菌和酵母菌的測定(2)樣品處理1)以無菌操作稱取檢樣25g(或25mL)，放入含有225mL滅菌水的具塞三角瓶中，振搖30min，即為110稀釋液。2)用滅菌吸量管吸取110稀釋液10mL，注入試管中，另

19、用帶橡膠乳頭的1mL滅菌吸量管反復吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。3)取1mL 110稀釋液注入含有9mL滅菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸量管吹吸5次，此液為1100稀釋液。第三節茶葉中霉菌和酵母菌的測定4)按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸量管。(3)接種培養根據對樣品污染情況的估計，選擇3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿，然后將冷卻至45左右的培養基注入平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于2528溫箱中，3天后開始觀察，共培養觀察5天。(4)計算方法通常選擇菌落數在10150之間的平皿進行計數，一個稀釋

20、度使用兩個平板，采用兩個平板的平均數；選擇稀釋度也選擇平均菌落數在10150之間的稀釋度，菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每克(或毫升)檢樣中所含霉菌和酵母數。第四節茶葉的檢驗技能訓練實例(1)儀器瓷坩堝(3050mL)、馬弗爐、坩堝鉗、干燥器、分析天平、磨碎機。(2)試劑0.1mol/L鹽酸標準溶液、0.5gL甲基橙指示劑。1)數據記錄：將試驗數據填入下表。3.數據記錄及處理2.操作步驟1.儀器及試劑第四節茶葉的檢驗技能訓練實例表格2)按式(-)計算茶葉中的水溶性灰分堿度(用氫氧化鉀質量分數表示)。1.儀器及試劑第四節茶葉的檢驗技能訓練實例(1)儀器恒溫水浴箱、分析天平(感量0.0001g)、孔

21、徑為50m的尼龍布(相當于300目)、玻質砂芯坩堝(微孔平均直徑80160m，體積30mL)、高溫爐(52525)、鼓風電熱恒溫干燥箱(溫控1202)、干燥器(盛裝有有效干燥劑)。(2)試劑1.25(體積分數)硫酸溶液、12.5g/L氫氧化鈉溶液、1(質量分數)鹽酸溶液、95(體積分數)乙醇、丙酮。2.操作步驟第四節茶葉的檢驗技能訓練實例(1)酸消化稱取制備好的試樣約2.5g(準確至0.0001g)置于400mL燒杯中，加入約100的1.25(體積分數)硫酸溶液200mL，放在電爐上加熱(在1min內煮沸)。(2)堿消化用約100的12.5g/L氫氧化鈉200mL，將尼龍布上的殘渣全部洗入原燒杯中，放在電爐上加熱(在1min內煮沸)。(3)干燥將上述坩堝及殘留物移入干燥箱中，120烘4h。(4)灰化將