1、 附件3茶葉中氯噻啉的測定BJS 2019141 范圍本方法規(guī)定了茶葉中氯噻啉殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于茶葉中氯噻啉殘留量的測定。2 原理試樣中的氯噻啉經(jīng)乙腈均質(zhì)提取后，經(jīng)濃縮、凈化，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測和確證，外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除另行規(guī)定外，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 乙腈（CH3CN）：色譜純。3.1.2 甲酸（CH2O2）：色譜純。3.1.3 二氯甲烷（CH2Cl2）：色譜純。 3.1.4 氯化鈉（NaCl）：分析純。3.1.5 無水硫酸鈉（Na2SO4）：分析純。3.2 溶液配制3.2.1 乙腈-二氯甲烷（3+

2、1，體積比）溶液：取乙腈（3.1.1）600 mL，取二氯甲烷（3.1.3）200 mL，混合均勻，備用。3.2.2 0.1%甲酸水溶液：準(zhǔn)確吸取1.0 mL甲酸（3.1.2），用超純水定容至1.0 L，混勻。3.2.3 0.1%甲酸乙腈溶液：準(zhǔn)確吸取1.0 mL甲酸（3.1.2），用乙腈定容至1.0 L，混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱等如表1所示，純度不小于95.0%。表1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量化合物名稱英文名CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量氯噻啉Imidaclothiz105843-36-5C7H8ClN5O2S261.013.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制稱

3、取氯噻啉標(biāo)準(zhǔn)品（3.3）10 mg（精確至0.01 mg），用乙腈（3.1.1）溶解定容至100 mL，配制成濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于0 4 以下避光保存，有效期12個月。3.5 氨基硅膠酰胺化聚合物/石墨化碳柱規(guī)格1000 mg，6 mL，或等效SPE柱。4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧離子源（ESI）。4.2 分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。4.3 渦旋振蕩器。4.4 高速組織搗碎機：轉(zhuǎn)速不低于15000 r/min。4.5 離心機：轉(zhuǎn)速不低于4000 r/min。4.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5 試樣制備和保存將茶葉粉碎后置于干

4、燥狀態(tài)下保存。6 分析步驟6.1 提取稱取2 g樣品（精確至0.01 g），置50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，渦旋振蕩0.5 min，在高速組織搗碎機上以15000 r/min均質(zhì)1 min后4000 r/min離心5 min，將上清液移入梨形燒瓶中。殘渣再用15 mL乙腈重復(fù)上述提取一次，合并提取液，在40 水浴中減壓旋轉(zhuǎn)濃縮至23 mL。6.2 凈化在固相萃取柱（3.5）上預(yù)先加入約1 cm高的無水硫酸鈉（3.1.5），先用5 mL乙腈-二氯甲烷（體積比3+1）溶液（3.2.1）預(yù)洗固相萃取柱，棄去流出液，將提取濃縮液（6.1）轉(zhuǎn)移到固相萃取柱上，用5 mL乙腈-二氯甲烷（體積比3

5、+1）溶液（3.2.1）分3次洗滌梨形燒瓶并轉(zhuǎn)移至固相萃取柱上，同時用梨形燒瓶收集全部流出液，再用20 mL乙腈-二氯甲烷（體積比3+1）溶液（3.2.1）淋洗固相萃取柱，合并全部流出液，在40 水浴中減壓旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，氮氣吹干。準(zhǔn)確加入2.0 mL乙腈溶解殘渣，經(jīng)微孔濾膜（0.22 m，有機相）過濾后，供LC-MS/MS測定。6.3 儀器參考條件6.3.1色譜條件色譜柱：Eclipse Plus C18（2.150 mm，1.8 m），或相當(dāng)者；流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈，洗脫梯度見表2；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ；進(jìn)樣體積1 L。表2 梯度洗脫條件時間（min

6、）流動相A （%）流動相B（%）0.0085153.0085156.0025758.0025758.10851510.0085156.3.2質(zhì)譜條件a） 離子源類型：電噴霧離子源（ESI）；b） 掃描方式：正離子掃描；c） 毛細(xì)管電壓：4 kV；d） 毛細(xì)管溫度：300 ；e） 霧化氣：氮氣，3 L/min；f） 碰撞氣：氬氣；g） 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；h） 定性離子對、定量離子對參見表3表3 氯噻啉主要質(zhì)譜參數(shù)組分母離子（m/z）子離子（m/z）Q1 Pre Bias（V）碰撞能量（eV）Q3 Pre Bias（V）氯噻啉262.00*181.05101530262.00122.

7、10102723注： *表示定量離子6.4標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作取粉碎的經(jīng)質(zhì)譜確認(rèn)不含氯噻啉的空白試樣，依據(jù)6.1和6.2步驟操作處理后得到與待測樣品相同的空白基質(zhì)。用該基質(zhì)稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.4），配制濃度為0.005 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別按儀器參考條件（6.3）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.5 測定6.5.1 定性測定按照6.3的條件測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果試樣譜圖中出現(xiàn)的保留時間與標(biāo)

8、準(zhǔn)工作液中氯噻啉峰保留時間偏差在2.5%之內(nèi)；且其定性離子的相對豐度與標(biāo)準(zhǔn)中氯噻啉工作溶液定性離子的相對豐度偏差不超過表4規(guī)定的范圍時，則可確定為樣品中存在氯噻啉。表4 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度%50%20%50%10%20%10%允許的相對偏差%20%25%30%50%6.5.2 定量測定待測樣液中氯噻啉的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)用空白基質(zhì)稀釋后再進(jìn)樣分析。6.6空白試驗不加試樣或僅加經(jīng)質(zhì)譜確認(rèn)不含氯噻啉空白試樣的空白試驗應(yīng)采用與試樣測定完全相同的試劑、設(shè)備和步驟進(jìn)行。7 結(jié)果計算試樣中氯噻啉以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，按

9、公式（1）計算。 QUOTE X=CV1000m1000 錯誤!未找到引用源。X=CV1000m1000 （1）式中：X 試樣中氯噻啉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的氯噻啉濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V 樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL）；m 試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于1 mg/kg時保留3位有效數(shù)字。8 精密度和準(zhǔn)確度8.1 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8.2 準(zhǔn)確度本方法在0.005-3 mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為70%-120%。9 檢出限和定量限本方法的定量限為0.005 mg/kg，檢出限為0.0015 mg/kg。附錄A 氯噻啉總離子流圖和特征離子圖圖1 氯噻啉總離子流圖（100 g/L）圖2 氯噻啉定量離子對提取色譜圖（262.0181.05）（100 g/L）圖3 氯噻啉